精密カットライブ肺樹状細胞を可視化するために、マウスの肺スライスを

このようリポポリサッカライド（LPS）などの炎症誘発性刺激の吸入後、への免疫細胞の協調運動は内、および肺から、そこにあります。例えば、好中球が急速に肺実質や気道に動員されます。また、従来の樹状細胞（cDCを）として知られているいくつかのプロフェッショナル抗原提示細胞は、比較的複雑な移行パターン^1,2を受けます。 cDCを、表面マーカーのCD11cのそれらの表示に部分的に基づいて、フローサイトメトリーを用いて同定することができます。 DCの異なるサブセットは、CD103とのCD11b ³の差動表面発現によって区別することができます。吸入抗原を取得すると、いくつかのcDCを、肺を出て、それらが抗原特異的T細胞⁴にペプチドを提示する場合、肺流入領域リンパ節（LNS）にリンパ管を通って移動します。これは、適応免疫Rの開始における重要な初期のイベントでありますesponses。理由は不明であるが、しかし、吸入抗原を獲得していないすべてのcDCを、肺を残し、そしてこれらの細胞の多くは、数ヶ月^5、6のためにその器官にとどまります。単球由来のCD11c ⁺ケモカイン受容体CCR7を欠く細胞は、地域のLN ^7,8に移行することができないので、この観察は、部分的に、これらの細胞の発達祖先によって説明することができます。 cDCをの移行の可能性はまた、肺内でのそれらの解剖学的位置によって、少なくとも部分的に決定される可能性が高いようです。しかし、肺におけるcDCを、これらの異なる集団の正確な位置は、完全に特徴付けされていません。肺内、およびそれを指示する分子の免疫細胞局在の改善知識は、肺の免疫系が活性化する方法をよりよく理解するために必要とされています。

PCLSが増加していますLY肺アーキテクチャ^9、10の構造的完全性を維持しながら、細胞の位置決めおよび細胞-細胞相互作用を可視化するためのex vivoアプローチとして使用。 PCLSは、マウスを含む多くの種の肺、ウシ、サル、羊、馬、そして人間^11を研究するために使用されています。この技術の主な利点は、約20スライスは、それによって個々の実験に必要な動物の数を減少させる、マウス肺の単一葉から調製することができることです。事実上すべてのDC、マクロファージ、好中球、およびT細胞を含む免疫細胞の種類は、PCLS中に存在し、彼らの正常な構造を維持します。

PCLSはまた、アセチルコリン¹²またはメタコリン¹³で処理した後カルシウムシグナル伝達および気道平滑筋細胞の収縮性を研究するために使用することができます。このアプローチでは、肺の小部分のみです微視的alyzed、しかし、1つの研究では、PCLSにおける気道収縮の測定はスライスするスライスから約10％しか変動し、この変動がそのまま動物における肺機能検査^14を使用して見られるものに匹敵することを報告しました。他の研究者らは、LPS ¹⁵とのインキュベーション後にサイトカイン発現および細胞表面マーカーの変化を研究するためのex vivoアプローチとしてPCLSを使用しています。 PCLSも小さいイントラ腺房動脈における低酸素性肺血管収縮のex vivoモデルにおいて使用されてきました。これらの血管は、動脈切開セグメントまたは胸膜下容器¹⁶の分析からの記録を含む他の手順を使用して到達できない肺の一部に配置されています。私たちの研究室では、主に、定常状態でのライブ肺組織中の免疫細胞の局在を可視化するためにPCLSを使用し、in vivoでの炎症性刺激を以下ました。次のように我々はこのために開発した手順があります。