Summary

L'évaluation simultanée de l'hémodynamique cérébrale et Light Scattering Propriétés du<em> In Vivo</em> Cerveau de rat en utilisant multispectral Imaging Diffuse Réflectance

Published: May 07, 2017
doi:

Summary

L'évaluation simultanée de l'hémodynamique cérébrale et des propriétés de diffusion de la lumière du tissu cérébral de rat in vivo est démontrée à l'aide d'un système d'imagerie de réflectance diffus multispectral conventionnel.

Abstract

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Introduction

Multispectrale imagerie par réflectance diffuse est la technique la plus usuelle pour obtenir une carte spatiale des signaux optiques intrinsèques (IOS) dans le tissu cortical. IOS observée dans le principalement cerveau in vivo sont attribués à trois phénomènes: variations dans l' absorption de lumière et des propriétés de diffusion en raison de l' hémodynamique corticales, la variation de l' absorption en fonction de la réduction ou l' oxydation des cytochromes dans les mitochondries et les variations dans les propriétés de diffusion de la lumière induite par des altérations morphologiques 1.

La lumière dans le visible (VIS) à la plage spectrale de l'infrarouge proche (NIR) est efficacement absorbée et diffusée par les tissus biologiques. Le spectre de réflectance diffuse du cerveau in vivo est caractérisé par spectres d' absorption et de diffusion. Les coefficients de diffusion réduit u 's du tissu cérébral dans la gamme de longueurs d'onde VIS-NIR à la suite d'une exposition de spectre de diffusion monotoneing amplitudes plus petites longueurs d'onde plus longues. Le coefficient de diffusion réduit μ spectre S '(λ) peut être approchée à être sous la forme de la fonction de loi de puissance 2, 3 comme μ S' (λ) = a × λ -b. La puissance de diffusion b est liée à la taille de diffuseurs biologiques dans un tissu vivant 2, 3. Altérations morphologiques du tissu et de la réduction de la viabilité des tissus vivants cortical peuvent affecter la taille des diffuseurs biologiques 4, 5, 6, 7, 8, 9.

Système optique pour l'imagerie multispectrale de réflectance diffuse peut être facilement construit à partir d'un li incandescentcombattre la source, des composants optiques simples, et un dispositif à couplage de charge monochromatique (CCD). Par conséquent, divers algorithmes et des systèmes optiques pour l' imagerie multispectrale de réflectance diffuse ont été utilisées pour évaluer l' hémodynamique corticales et / ou la morphologie des tissus 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18.

La méthode décrite dans cet article permet de visualiser à la fois l'hémodynamique et les propriétés de diffusion de la lumière du tissu cérébral de rat in vivo en utilisant un système d'imagerie par réflectance diffuse multispectral classique. Les avantages de cette méthode par rapport aux techniques alternatives sont la capacité d'évaluer les changements spatio-temporels dans les deux hémodynamique cérébrales et tissus corticauxLa morphologie, ainsi que son applicabilité à différents modèles animaux de dysfonctionnement cérébral. Par conséquent, la méthode sera appropriée pour les enquêtes sur les lésions cérébrales traumatiques, les crises épileptiques, les accidents vasculaires cérébraux et l'ischémie.

Protocol

soins des animaux, la préparation et les protocoles expérimentaux ont été approuvés par le Comité de recherche animale de Tokyo Université de l'Agriculture et de la technologie. Par cette méthodologie, le rat est logé dans un environnement contrôlé (24 ° C, 12 h cycle lumière / obscurité), avec de la nourriture et de l' eau disponibles ad libitum. 1. Construction d'un système conventionnel multispectral Imaging Réflectance Diffuse Mont neuf fil…

Representative Results

Images spectrales représentatives de la réflexion diffuse acquise in vivo de cerveaux de rats sont présentés dans la figure 3. Les images à 500, 520, 540, 560, 570 et 580 nm visualiser clairement un réseau dense de vaisseaux sanguins dans le cortex cérébral. La détérioration du contraste entre les vaisseaux sanguins et le tissu environnant observée dans les images à 600, 730 et 760 nm reflète la plus faible absorption de la lumière par l'hémog…

Discussion

L'étape la plus critique de ce protocole est l'élimination de la région du crâne amincie pour que la fenêtre crânienne; cela devrait être réalisé avec soin pour éviter des saignements inattendus. Cette étape est importante pour l'obtention de haute qualité diffuse des images multispectrales réflectance avec une grande précision. L'utilisation d'un stéréomicroscope est recommandé pour la procédure chirurgicale si possible. De petits morceaux d'éponge de gélatine sont utiles pou…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Part of this work was supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research (C) from the Japanese Society for the Promotion of Science (25350520, 22500401, 15K06105) and the US-ARMY ITC-PAC Research and Development Project (FA5209-15-P-0175).

Materials

150-W halogen-lamp light source Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LA-150SAE
Light guide Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LGC1-5L1000
Collecting lens Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan SH-F16
Interference filters l@500nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65088
Interference filters l@520nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65093
Interference filters l@540nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65096
Interference filters l@560nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67766
Interference filters l@570nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67767
Interference filters l@580nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65646
Interference filters l@600nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65102
Interference filters l@730nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65115
Interference filters l@760nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67777
Motorized filter wheel  Andover Corporation, NH, USA FW-MOT-12.5
16-bit cooled CCD camera Bitran, Japan BS-40
Video zoom lens Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan VZMTM300i
Spectralon white standard with 99% diffuse reflectance Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA SRS-99-020

References

  1. Bonhoeffer, T., Grinvald, A., Toga, A. W., Mazziotta, J. C. Optical Imaging based on intrinsic signals: the methodology. Brain mapping; the methods. , 55-97 (1996).
  2. Mourant, J. R., et al. Mechanisms of light scattering from biological cells relevant to noninvasive optical-tissue diagnostics. Appl. Opt. 37 (16), 3586-3593 (1998).
  3. Abookasis, D., et al. Imaging cortical absorption, scattering, and hemodynamic response during ischemic stroke using spatially modulated near-infrared illumination. J. Biomed. Opt. 14 (2), 024033 (2009).
  4. Lipton, P. Ischemic cell death in brain neuron. Physiol. Rev. 79 (4), 1432-1568 (1999).
  5. Jarvis, C. R., Anderson, T. R., Andrew, R. D. Anoxic depolarization mediates acute damage independent of glutamate in neocortical brain slices. Cereb. Cortex. 11 (3), 249-259 (2001).
  6. Joshi, I., Andrew, R. D. Imaging anoxic depolarization during ischemia-like conditions in the mouse hemi-brain slice. J. Neurophysiol. 85 (1), 414-424 (2001).
  7. Polischuk, T. M., Jarvis, C. R., Andrew, R. D. Intrinsic optical signaling denoting neuronal damage in response to acute excitotoxic insult in the hippocampal slice. Neurobiol. Dis. 4 (6), 423-437 (1998).
  8. Jarvis, C. R., Lilge, L., Vipond, G. J., Andrew, R. D. Interpretation of intrinsic optical signals and calcein fluorescence during acute excitotoxic insult in the hippocampal slice. NeuroImage. 10 (4), 357-372 (1999).
  9. Obeidat, A. S., Jarvis, C. R., Andrew, R. D. Glutamate does not mediate acute neuronal damage after spreading depression induced by O2/glucose deprivation in the hippocampal slice. J. Cereb. Blood Flow Metab. 20 (2), 412-422 (2000).
  10. Dunn, A. K., Devor, A., Dale, A. M., Boas, D. A. Spatial extent of oxygen metabolism and hemodynamic changes during functional activation of the rat somatosensory cortex. Neuroimage. 27 (2), 279-290 (2005).
  11. Jones, M., Berwick, J., Johnston, D., Mayhew, J. Concurrent optical imaging spectroscopy and laser-Doppler flowmetry: the relationship between blood flow, oxygenation, and volume in rodent barrel cortex. Neuroimage. 13 (6), 1002-1015 (2001).
  12. Jones, M., Berwick, J., Mayhew, J. Changes in blood flow, oxygenation, and volume following extended stimulation of rodent barrel cortex. Neuroimage. 15 (3), 474-487 (2002).
  13. Zhou, C., et al. Diffuse optical correlation tomography of cerebral blood flow during cortical spreading depression in rat brain. Opt. Express. 14 (3), 1125-1144 (2006).
  14. Bouchard, M. B., Chen, B. R., Burgess, S. A., Hillman, E. M. C. Ultra-fast multispectral optical imaging of cortical oxygenation, blood flow, and intracellular calcium dynamics. Opt. Express. 17 (18), 15670-15678 (2009).
  15. Jones, P. B., et al. Simultaneous multispectral reflectance imaging and laser speckle flowmetry of cerebral blood flow and oxygen metabolism in focal cerebral ischemia. J. Biomed. Opt. 13 (4), 044007 (2008).
  16. Kawauchi, S., et al. Diffuse light reflectance signals as potential indicators of loss of viability in brain tissue due to hypoxia: charge-coupled-device-based imaging and fiber-based measurement. J. Biomed. Opt. 18 (1), 015003 (2013).
  17. Yoshida, K., et al. Multispectral imaging of absorption and scattering properties of in vivo exposed rat brain using a digital red-green-blue camera. J. Biomed. Opt. 20 (5), 051026 (2015).
  18. Nishidate, I., et al. Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Tissue Morphology of In Vivo Rat Brain Using Spectral Diffuse Reflectance Imaging. Appl. Spectrosc. , (2016).
  19. Wang, L. -. H., Jacques, S. L., Zheng, L. -. Q. MCML-Monte Carlo modeling of photon transport in multi-layered tissues. Comput. Methods Programs Biomed. 47 (2), 131-146 (1995).
  20. Tsytsarev, V., Premachandra, K., Takeshita, D., Bahar, S. Imaging cortical electrical stimulation in vivo: Fast intrinsic optical signal versus voltage-sensitive dyes. Opt. Lett. 33 (9), 1032-1034 (2008).
  21. Arnold, T., Biasio, M. D., Leitner, R. Hyper-spectral video endoscope for intra-surgery tissue classification using auto-fluorescence and reflectance spectroscopy. Proc. SPIE. 8087, 808711 (2011).
  22. Basiri, A., et al. Use of a multi-spectral camera in the characterization of skin wounds. Opt. Express. 18 (4), 3244-3257 (2010).
  23. Nishidate, I., Maeda, T., Niizeki, K., Aizu, Y. Estimation of melanin and hemoglobin using spectral reflectance images reconstructed from a digital RGB image by the Wiener estimation method. Sensors. 13 (6), 7902-7915 (2013).

Play Video

Cite This Article
Nishidate, I., Mustari, A., Kawauchi, S., Sato, S., Sato, M. Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging. J. Vis. Exp. (123), e55399, doi:10.3791/55399 (2017).

View Video