Murina de linfocitos Etiquetado por⁶⁴ Cu-Anticuerpo objetivo de receptores de<em> En Vivo</em> Tráfico de células mediante PET / CT

Seguimiento de células no invasiva es una herramienta versátil para controlar la función celular, la migración y homing in vivo. Recientes estudios de seguimiento celular se han centrado en mesenquimales ^{1, 2} o de médula ósea las células madre derivadas de ³ en el contexto de la medicina regenerativa, las células blancas de la sangre periférica autólogas en la inflamación o linfocitos T en las terapias con células adoptivas contra el cáncer de ^{3, 4.} La elucidación de los sitios de acción y los principios biológicos subyacentes de las terapias basadas en células es de tremenda importancia. Linfocitos T citotóxicos CD8 ^+, por ingeniería genética del receptor de antígeno quimérico (CAR) las células T o linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) fueron consideradas ampliamente como el estándar de oro. Sin embargo, las células TH1 específicos de antígeno asociado a tumores han demostrado ser una opción de tratamiento alternativa efectiva ^{4, <}/ sup> ^{5, 6, 7.}

Como actores clave en la inflamación, enfermedades autoinmunes específicas de órganos (por ejemplo, la artritis reumatoide o el asma bronquial), y células de gran interés en la inmunoterapia del cáncer, es importante para caracterizar los patrones de distribución y homing temporales de células TH1. No invasiva in vivo de formación de imágenes por PET presenta un método cuantitativo, altamente sensible ⁸ para examinar los patrones de migración de células, en homing vivo, y los sitios de acción y las respuestas de células T durante la inflamación, alergias, infecciones o el rechazo del tumor ^{9, 10, 11.}

Clínicamente, ¹¹¹ In-oxina se utiliza para la gammagrafía de leucocitos para la discriminación de la inflamación y la infección ^12, mientras que 2-desoxi-2- ⁽¹⁸F) fluoro-D-glucosa ⁽¹⁸ F-FDG) se utiliza comúnmente para estudios de seguimiento celular por PET ^{3, 13.} Una desventaja importante de este trazador PET, sin embargo, es la corta vida media del radionúclido ¹⁸ F a 109,7 min y la baja estabilidad intracelular que impide de formación de imágenes en los puntos de tiempo posteriores poste de transferencia de células adoptivas. Para más largo plazo en los estudios de seguimiento de células in vivo por PET, aunque inestable en las células, ⁶⁴ Cu-PTSM se utiliza con frecuencia para etiquetar de manera no específica las células ^{14, 15} con efectos perjudiciales minimizadas en la viabilidad de las células T y la función ^16.

Este protocolo describe un método para reducir aún más efectos desventajosos sobre la viabilidad celular y la función utilizando un receptor de células T (TCR) mAb radiomarcado específico de. En primer lugar, la producción del radioisótopo ⁶⁴ Cu, la conjugación del mAb KJ1-26 con ésimoe quelante DOTA, y la posterior ⁶⁴ Cu-radiomarcaje se muestran. En una segunda etapa, el aislamiento y la expansión de las células cova-TH1 de ratones donantes DO11.10 y el radiomarcado con ⁶⁴ cargado-Cu DOTA-conjugado mAb KJ1-26 ⁽⁶⁴ Cu-DOTA-KJ1-26) se describen en detalle. La evaluación de los valores de captación y de flujo de salida de la radiactividad con un calibrador de dosis y por gamma-conteo, respectivamente, así como la evaluación de los efectos de ⁶⁴ Cu-radiomarcaje sobre la viabilidad celular por exclusión de azul de tripano y la funcionalidad con se presentan IFN-gamma ELISA . Para no invasivo en el seguimiento de células in vivo, se describen la obtención de un modelo de ratón de inducida por COVA vías respiratorias aguda DTHR y Adquisición de imágenes por PET / CT después de la transferencia celular adoptiva.

Además, este enfoque de etiquetado puede ser transferido a diferentes modelos de enfermedad, las células T murinas con diferentes TCR o células generales de interés con los receptores unidos a la membrana o mar expresiónkers subyacente membrana continua shuttling ^17.