Murino Linfócitos Rotulagem por⁶⁴ Cu-Antibody Receptor Segmentação para<em> In Vivo</em> Tráfico celular por PET / CT

Rastreamento de células não-invasiva é um instrumento versátil para monitorizar a função celular, migração e homing in vivo. Estudos recentes de rastreamento de células têm-se centrado no mesenquimais ^{1, 2} ou da medula óssea derivadas de células estaminais ³ no contexto da medicina regenerativa, as células brancas do sangue perifico autogos em inflamação ou linfócitos T em terapias de células adoptivas contra cancro de ^{3, 4.} A elucidação dos locais de acção e os princípios subjacentes biológicos de terapias à base de células é de grande importância. Linfócitos T citotóxicos CD8 ^+, por engenharia genética do receptor de antigénio quimérico (CAR) células T ou linfócitos que se infiltram no tumor (TIL) foram amplamente considerada como o padrão de ouro. No entanto, as células TH1 específicas para o antigénio associado a tumores provaram ser uma alternativa eficaz opção de tratamento ^{4, <}/ sup> ^{5, 6, 7.}

Como actores-chave na inflamação, as doenças auto-imunes específicas de órgãos (por exemplo, artrite reumatóide ou asma brônquica), e células de elevado interesse em imunoterapia do cancro, é importante caracterizar a distribuição e homing padrões temporais de células TH1. Não invasiva in vivo de imagiologia por PET apresenta, um método altamente sensível quantitativa ⁸ para analisar os padrões de migração celular, no retorno in vivo, e os sítios de acção de células T e respostas durante a inflamao, alergias, infecções ou de rejeição de tumor ^{9, 10, 11.}

Clinicamente, ^111In-oxina é usado para cintigrafia de leucócitos para a discriminação de inflamação e infecção ^{de 12,} enquanto que 2-desoxi-2- ⁽¹⁸F) fluoro-D-glucose ^(18F-FDG) é comumente utilizada para estudos de rastreio celular por PET ^{3, 13.} Uma grande desvantagem deste marcador de PET, no entanto, é a meia-vida curta do radionuclídeo ¹⁸ M em 109,7 min e a baixa estabilidade intracelular que impede a imagiologia em pontos de tempo mais tardios após a transferência adoptiva de células. Para longo prazo, os estudos in vivo de rastreio celular por PET, embora instável nas células, ⁶⁴ Cu-PTSM é frequentemente usado para marcar as células não especificamente ^{14, 15,} com efeitos prejudiciais minimizadas sobre a viabilidade das células T e a função ^{de 16.}

Este protocolo descreve um método para reduzir ainda mais os efeitos desvantajosos sobre a viabilidade e função das células utilizando um receptor de células T (TCR) de mAb marcado radioactivamente espec�ico. Em primeiro lugar, a produção do radioisótopo ⁶⁴ Cu, a conjugação do mAb KJ1-26 com the quelante DOTA, e o subsequente ⁶⁴ de Cu-radiomarcação são mostrados. Num segundo passo, o isolamento e a expansão de células TH1 Cova-de ratinhos dadores DO11.10 e a radiomarcação com ^{64Cu-carregado} DOTA-conjugado mAb KJ1-26 ⁽⁶⁴ Cu-DOTA-KJ1-26) são descritos em detalhe. A avaliação dos valores de absorção e de efluxo de radioactividade com um calibrador de doses e pela y-contagem, respectivamente, bem como a avaliação dos efeitos de ⁶⁴ Cu-radiomarcao sobre a viabilidade celular por exclusão com azul de tripano e funcionalidade com ELISA y IFN-são apresentados . Para não invasiva no rastreamento de células in vivo, o desencadeamento de um modelo de ratinho de-induzida aguda das vias aéreas Cova DTHR e aquisição de imagem por PET / CT após transferência adoptiva de células encontram-se descritos.

Além disso, esta abordagem de marcao podem ser transferidos para diferentes modelos de doença, as células T de murídeo com diferentes TCRs ou células gerais de interesse com receptores ligados a membranas ou mar expressãokers subjacente membrana contínua de vaivém ^17.