Murino linfociti Etichettatura da⁶⁴ Cu-anticorpo recettore Targeting per<em> In Vivo</em> Cell Traffico da PET / CT

Inseguimento cella non invasiva è uno strumento versatile per monitorare la funzione cellulare, la migrazione e homing in vivo. Recenti studi di monitoraggio delle cellule mesenchimali si sono concentrati su ^{1, 2} o del midollo osseo di cellule staminali derivate ³ nel contesto della medicina rigenerativa, periferiche autologhe globuli bianchi a infiammazione o linfociti T in terapie cellulari adottivi contro il cancro ^{3, 4.} La spiegazione dei siti di azione ei principi biologici sottostanti di terapie a base di cellule è di enorme importanza. I linfociti T citotossici CD8 ^+, geneticamente antigene recettore chimerico cellule T (CAR) o linfociti infiltranti il tumore (TIL) sono stati ampiamente considerato come il gold standard. Tuttavia, le cellule TH1 antigene-specifiche associati al tumore hanno dimostrato di essere un efficace opzione di trattamento alternativa ^{4, <}/ sup> ^{5, 6, 7.}

Come attori chiave infiammazione, malattie autoimmuni organo-specifiche (ad esempio, l'artrite reumatoide o asma bronchiale), e le cellule di elevato interesse in immunoterapia del cancro, è importante caratterizzare la distribuzione e homing modelli temporali di cellule TH1. Invasiva imaging in vivo da PET presenta un metodo altamente sensibile quantitativa ⁸ per esaminare i modelli di migrazione cellulare, in vivo homing, ed i siti di azione delle cellule T e risposte durante l'infiammazione, allergie, infezioni o tumore rifiuto ^{9, 10, 11.}

Clinicamente, ¹¹¹ In ossina viene utilizzato per leucociti scintigrafia per la discriminazione di infiammazione e infezione ^12, mentre 2-deossi-2- ⁽¹⁸F) fluoro-D-glucosio ⁽¹⁸ F-FDG) viene comunemente utilizzato per studi di localizzazione cellulare mediante PET ^{3, 13.} Uno svantaggio principale di questo tracciante PET, tuttavia, è la breve emivita del radionuclide ¹⁸ F a 109,7 min e la bassa stabilità intracellulare che ostacola l'imaging in momenti successivi caricare trasferimento adottivo di cellule. A lungo termine studi in vivo inseguimento cellulare mediante PET, anche se instabile nelle cellule, ⁶⁴ Cu-PTSM viene frequentemente usato per marcare le cellule non specifico ^{14, 15} con effetti dannosi minimizzati sulla vitalità delle cellule T e funzionamento ^16.

Questo protocollo descrive un metodo per ridurre ulteriormente gli effetti svantaggiosi sulla vitalità delle cellule e la funzione utilizzando un recettore di cellule T (TCR) -specifica radiomarcato mAb. In primo luogo, la produzione del radioisotopo ⁶⁴ Cu, la coniugazione del mAb KJ1-26 con the chelante DOTA, ed il successivo ⁶⁴ Cu-radiomarcatura sono mostrati. In una seconda fase, l'isolamento e l'espansione delle cellule cova-TH1 di topi donatori DO11.10 e la radiomarcatura con ⁶⁴ Cu-caricata DOTA-coniugato mAb KJ1-26 ⁽⁶⁴ Cu-DOTA-KJ1-26) sono descritte in dettaglio. La valutazione dei valori di assunzione e efflusso di radioattività con un calibratore di dosi e y-conteggio, rispettivamente, nonché la valutazione degli effetti di ⁶⁴ Cu-radiomarcatura sulla vitalità cellulare mediante trypan blu e funzionalità con IFN-y ELISA sono rappresentati . Per non invasiva nel monitoraggio delle cellule in vivo, l'elicitazione di un modello murino di cova indotta acuta delle vie aeree e DTHR immagine acquisizione da PET / TC dopo trasferimento adottivo di cellule sono descritti.

Inoltre, questo approccio etichettatura può essere trasferito a diversi modelli di malattia, cellule T murine con differenti TCR o cellule generali di interesse con recettori di membrana o espressione markers sottostante membrana continua spola ^17.