Murine lymphocytaire par étiquetage⁶⁴ Cu-anticorps du récepteur de ciblage pour<em> In Vivo</em> Le trafic cellulaire par PET / CT

Le suivi des cellules non-invasive est un outil polyvalent pour surveiller la fonction cellulaire, la migration et homing in vivo. De récentes études de suivi de cellules se sont concentrées sur mésenchymateuses ^{1, 2} ou cellules souches dérivées de la moelle osseuse ³ dans le cadre de la médecine régénérative, les globules blancs périphériques autologues dans l' inflammation ou des lymphocytes T dans des thérapies cellulaires adoptifs contre le cancer ^{3, 4.} L'élucidation des sites d'action et les principes biologiques sous-jacents des thérapies à base de cellules est d'une importance énorme. CD8 ⁺ lymphocytes T cytotoxiques, récepteur de l' antigène chimère génétiquement modifiées (CAR) des cellules T ou des lymphocytes infiltrant les tumeurs (TIL) ont été largement considéré comme l'étalon-or. Cependant, les cellules TH1 spécifiques de l' antigène associé à la tumeur se sont révélés être une option de traitement alternative efficace ^{4, <}/ sup> ^{5, 6, 7.}

Comme les principaux acteurs dans l' inflammation, les maladies auto – immunes spécifiques d'organes (par exemple, la polyarthrite rhumatoïde ou d' asthme bronchique), et les cellules de grand intérêt pour l' immunothérapie du cancer, il est important de caractériser les modes de distribution et de homing temporelles des cellules TH1. L' imagerie in vivo non invasive par TEP présente une quantitative, une méthode très sensible ⁸ pour examiner les schémas de migration des cellules, dans la prise d' origine in vivo, et les sites d'action des lymphocytes T et des réponses au cours de l' inflammation, les allergies, les infections ou le rejet de la tumeur ^{9, 10, 11.}

Cliniquement, ¹¹¹ In-oxine est utilisé pour la scintigraphie des leucocytes pour la discrimination de l' inflammation et de l' infection ^12, tandis que le 2-désoxy-2- ⁽¹⁸F) fluoro-D-glucose ⁽¹⁸ F-FDG) est couramment utilisé pour les études de suivi des cellules en PET ^{3, 13.} Un inconvénient majeur de ce traceur PET, cependant, est la courte demi-vie du radionucléide ¹⁸ F à 109,7 min et la faible stabilité intracellulaire qui empêche l' imagerie aux points de temps plus tard transfert post cellulaire adoptive. Pour plus long terme in vivo des études de suivi de cellules par PET, bien instable dans les cellules, ⁶⁴ Cu-PTSM est fréquemment utilisé pour étiqueter de façon non spécifique des cellules ^{14, 15} avec des effets néfastes réduits au minimum sur la viabilité des cellules T et la fonction ^16.

Ce protocole décrit un procédé pour réduire davantage les effets désavantageux sur la viabilité cellulaire et la fonction à l'aide d'un récepteur de cellule T (TCR) de mAb radiomarquée spécifique de. Premièrement, la production du radio – isotope ⁶⁴ Cu, la conjugaison du mAb avec KJ1-26 ee chélateur DOTA, et le ⁶⁴ Cu-radiomarquage ultérieur sont présentés. Dans une deuxième étape, l'isolement et l' expansion de cellules Cova-TH1 de souris donneuses DO11.10 et le radiomarquage avec sont décrits en détail ⁶⁴ mAb conjugué DOTA-Cu chargé KJ1-26 ⁽⁶⁴ Cu-DOTA-KJ1-26). L'évaluation des valeurs absorption et l' efflux de la radioactivité avec un calibrateur de dose et par y-comptage, respectivement, ainsi que l'évaluation des effets de ⁶⁴ Cu-radiomarquage sur la viabilité des cellules par exclusion au bleu trypan et de fonctionnalité avec ELISA de IFN-y sont présentés . Pour les non-invasive dans le suivi des cellules in vivo, le déclenchement d'un modèle de souris de DTHR voies aériennes aiguë induite par Cova et l' acquisition d' image par PET / CT après le transfert cellulaire adoptive sont décrits.

De plus, cette approche de l'étiquetage peut être transférée à différents modèles de la maladie, les cellules T de souris avec différentes cellules ou RLT d'intérêt général avec les récepteurs liés à la membrane ou l'expression markers membrane continue qui sous – tend la navette ^17.