Мелкосерийное Распространение человека ИПСК в бессывороточной условиях для рутинного Иммуноцитохимическая Характеристика

Перепрограммирование взрослого человека соматических клеток в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (иПСК) обеспечивает способ получить потенциально неограниченный запас клеток конкретного пациента для изучения болезнью ^{1, 2.} Резюмируя фенотипа заболевания в пробирке бы сделать его правдоподобным , чтобы исследовать клеточные и молекулярные механизмы , связанные с болезнью, а также улучшить обнаружение наркотиков и персонализированной медицины ^3. Кроме того, человеческие иПСК (hiPSCs) обеспечивают возможность получения специфических типов клеток , которые могут быть использованы в качестве уникального ресурса для замены мертвых или дисфункциональные клеток и восстановления функции в контексте нескольких расстройств ^{4, 5.}

Важной предпосылкой к использованию ИПСК в вышеупомянутых приложений гарантирует, что их плюрипотентные и недифференцированное состояние сохраняется в процессе расширения в культуре. Как правило, Techniqжает , такие как проточной цитометрии, вестерн – блоттинга, полимеразной цепной реакции и функциональных анализов, которые требуют большого количества клеток и специализированного оборудования, используются для детального анализа иПСК плюрипотентности ^{6, 7, 8, 9, 10.} Тем не менее, процедура оценки недифференцированном состоянии по ИПСК "эффективно может быть достигнуто за счет ограниченного распространения этих клеток специально для иммуногистохимии (МУС), тем самым привлекая сокращение времени и ресурсов.

Последние достижения позволяют для роста ИПСК в определенных бессывороточной условиях, что является существенным улучшением по сравнению с традиционными системами культуры, которые требуют мышиные слоев фидерных фибробласты и сывороточных средах. Тем не менее, современная литература не включает в себя четкие протоколы скачкообразные, которые описывают, как переход ИПСК из фидераслой фидерными свободных систем.

В этом контексте настоящее протокол систематически подробно описано, как hiPSCs выращенные на облученный мышиных эмбриональных фибробластов (КПКО), фидерные слои могут быть (1), предназначенный для распространения в бессывороточной среде, и (2), культивировали на мелкосерийном специально для поддержки надежной иммуноцитохимическое анализ. В целом, эта методология представляет собой своевременную и экономически эффективную процедуру для размножения человека ИПСК в бессывороточной условиях для подтверждения их плюрипотентности на регулярной основе с использованием иммуноцитохимии.