Человеческие клетки легких Дендритные: Пространственное распределение и фенотипической идентификации в Эндобронхиальная Биопсию Использование иммуногистохимии и проточной цитометрии

Легкие находятся в постоянном контакте с внешней средой, и высоко подвергают воздействию как безвредные частиц и микробов со способностью вызывать заболевания. Поэтому крайне важно для иммунной системы, чтобы смонтировать сильные иммунные ответы против вторгшихся патогенов, но в равной степени важно для поддержания толерантности к вдыхаемых антигенов, которые не вызывают заболевания. Для обеспечения мощного иммунного надзора, дыхательной системы выстлана сети иммунных клеток, в том числе дендритные клетки (ДК). Контроллеры домена являются профессиональными антиген-представляющими клетками с уникальной способностью активировать наивные Т-клетки. В легких человека, РС – резиденты сталкиваются с антигеном , а затем обработать и транспортировать его в легких осушение лимфатических узлов для представления и активации Т – клеток , ^{1, 2, 3.}

В иммунной системе человека, РС можно разделить на несколько подмножеств, с DistinКТ , но пересекающиеся функции: CD1c ⁺ и CD141 ⁺ миелоидных ДК (Главгосслужбы) и CD123 ⁺ плазмоцитов контроллеры домена (PDCs) ^{4, 5.} В то время как самые подробные знания о человеческом ГЦ проистекает из исследований в крови, теперь очевидно , что человеческие легкие также питают редкие популяции DC подмножеств с Т-клеточным стимулирующим емкостью ^{6, 7, 8, 9.} Тем не менее, аккумулирующие данные показывают , что иммунные клетки, в том числе контроллеры домена, различаются по частоте, фенотип, и функции в зависимости от их анатомического расположения ^10. Таким образом, важно, чтобы изучить иммунные клетки из соответствующей ткани, чтобы понять их вклад в местный иммунитет и толерантности. Взятые вместе, это подчеркивает необходимость изучения легких резидентные РС при решении заболеваний легких, несмотря на контроллеры домена крови быть более доступными и доступными в людях.

Первые работы, изучающие легочные резидентные РС в организме человека в основном полагались на морфологии и экспрессии отдельных маркеров, таких как HLA-DR и CD11c, в срезах ткани с помощью иммуногистохимии ^{11, 12, 13.} В противоположность этому, более поздние исследования, как правило, полагаются на проточной цитометрии анализа для изучения различных подмножеств иммунных клеток. Однако, так как трудно найти хотя бы одну клеточной поверхности маркер, который однозначно идентифицирует определенное подмножество постоянного тока, потенциальное ограничение исследований применения только четыре цвета проточной цитометрии является риск в том числе клеточных популяций с аналогичными фенотипических маркеров в качестве контроллеров домена. Например, CD11c экспрессируется на всех миелоидных ДК и подавляющее большинство моноцитов. С другой стороны, в исследованиях применения более совершенных проточная цитометрия панелей, незлокачественный легочной ткани от хирургических резекций пациентов, как правило, используютсяXref "> ^{10, 14, 15, 16,} хотя остается неясным , являются ли эти редкие популяции действительно представительными ДКБ , присутствующих в здоровых субъектов. В целом, исследования ограничены во многом связано с тем , что хирургическим путем удаляется или вся ткань легких человека не хватает.

Для того, чтобы преодолеть некоторые из этих ограничений, эта работа описывает, как выполнить детальный анализ пространственного распределения и фенотипической идентификации контроллеров домена в слизистой оболочке эндобронхиальные биопсий, полученных у здоровых добровольцев, которые подвергаются бронхоскопию. Несколько небольших биопсий могут быть получены от каждого отдельного человека и впоследствии могут быть внедрены для секционирования и анализ с помощью иммуногистохимии или ферментативно переваривается для расширенного анализа проточной цитометрии. Использование легочной ткани в виде эндобронхиальные биопсий из bronchoscopies дает то преимущество, что позволило выполнить стУды на здоровых добровольцах, в отличие от открытой хирургии легких, что, по понятным причинам, ограничивается пациентами, которые требуют торакальной хирургии. Кроме того, ткань, которая оцифровывается во время бронхоскопии от здоровых добровольцев является физиологически нормальным, в отличие от не-пораженный участок легочной ткани у пациентов с легочным заболеванием. С другой стороны, биопсий невелики, и количество клеток, извлекаемых, даже при объединении нескольких биопсий, ограничивает тип анализов, которые могут быть выполнены.

Хотя настоящая работа сосредоточена на контроллерах, описанные способы могут быть непосредственно расширен за счет включения других (иммунные) клетки, представляющие интерес, которые находятся в тканях человека через слизистую оболочку легких. Кроме того, протоколы также непосредственно применимы к образцам, полученным от пациентов, страдающих легочными заболеваниями, где бронхоскопии является частью установления диагноза, таких как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), саркоидоз, или рак легких.