Un<em> Ex Vivo</em> Metodo per Time-Lapse Imaging di coltura Rat mesenteriche microvascolari Networks

Crescita della rete microvascolare e rimodellamento sono denominatori comuni per la funzione dei tessuti, la guarigione della ferita, e molteplici patologie e un processo chiave è l'angiogenesi, definita come la crescita di nuovi vasi sanguigni da quelli esistenti ^{1, 2.} Per Tissue Engineering nuovi vasi o la progettazione di terapie basate angiogenici, comprendendo l'importanza delle dinamiche cellulari coinvolti nell'angiogenesi è fondamentale. Tuttavia, questo processo è complesso. Può variare in punti specifici all'interno di una rete microvascolare e coinvolge più tipi di cellule (ad esempio cellule endoteliali, cellule muscolari lisce, periciti, macrofagi, cellule staminali) e sistemi multipli (reti linfatici e reti neurali). Sebbene i modelli in vitro hanno contribuito enormemente ad esaminare il rapporto tra le diverse cellule coinvolte nell'angiogenesi ^3, la loro rilevanza fisiologica può essere compromessa a causa di thei r limitata complessità e il fatto che essi non riflettono strettamente uno scenario in vivo. Per superare queste limitazioni, sistemi di coltura tridimensionale ^3, ex vivo modelli di tessuto ^4, sistemi microfluidici ^{5, 6,} e ⁷ modelli di calcolo sono stati sviluppati e introdotti negli ultimi anni. Tuttavia, vi è ancora la necessità di un modello con funzionalità time-lapse per studiare l'angiogenesi in reti microvascolari intatti ex vivo. La creazione di nuovi modelli di time-lapse per gli studi di angiogenesi con quel livello di complessità fornirà uno strumento prezioso per comprendere i meccanismi alla base che regolano l'angiogenesi e per migliorare le terapie.

Un modello potenziale che permette alla ex vivo indagini dell'angiogenesi attraverso una rete microvascolare intatto è il modello di cultura mesentere ratto> 8. Nel recente lavoro, abbiamo dimostrato che il sangue e le reti microvascolari linfatici rimangono vitali dopo la cultura. Ancora più importante, il mesentere modello di cultura del ratto può essere utilizzato per studiare le interazioni funzionali periciti-endoteliale di cellule del sangue, e le connessioni delle cellule endoteliali linfatiche, e time-lapse imaging. L'obiettivo di questo lavoro è quello di fornire il nostro protocollo per il metodo time-lapse imaging. I nostri risultati rappresentativi documentano le molteplici tipi di cellule che rimangono vitali dopo la stimolazione dell'angiogenesi con siero e offrono esempi di utilizzo di questo metodo per quantificare specifiche risposte angiogenici dei tessuti così come endoteliali studi di monitoraggio delle cellule.