عزل ماوس بطانة الرحم طلائي واللحمية خلايا ل<em> في المختبر</em> Decidualization
Summary
تقدم هذه الدراسة طريقة موحدة والتحقق من صحتها للعزلة وثقافة الماوس الرئيسي انسجة بطانة الرحم والخلايا الظهارية، والتي يمكن استخدامها في نظام coculture للدراسة في decidualization المختبر.
Abstract
Decidualization هو عملية المفاضلة التي تعتمد على هرمون البروجسترون من خلايا انسجة بطانة الرحم، وهو شرط أساسي لنجاح زرع الأجنة. رغم ما بذل الكثير من الجهود للكشف عن الآليات الكامنة وراء decidualization، والإشارات الدقيقة بين الخلايا الظهارية التي هي على اتصال مع الجنين والخلايا اللحمية الأساسية لا تزال غير مفهومة. لذلك، ودراسة decidualization بطريقة يأخذ كل الظهارية وخلايا اللحمية في الاعتبار يمكن تحسين معرفتنا حول التفاصيل الجزيئية للdecidualization. لهذا الغرض، في النماذج الحية من decidualization الاصطناعي هي من الناحية الفسيولوجية الأكثر أهمية. ومع ذلك، والتلاعب من الاتصالات بين الخلايا غير محدود. حاليا، في الثقافات المختبر من خلايا انسجة بطانة الرحم يتم استخدامها للتحقيق في التشكيل من decidualization عدة جزيئات الإشارة. تقليديا، وخلايا انسجة الإنسان أو الماوس بطانة الرحم هيمستخدم. ومع ذلك، فإن توافر العينات البشرية وفي كثير من الأحيان محدودة. وعلاوة على ذلك، ويرافق استخدام أنسجة الفئران مع التنوع في طريقة زراعة. تقدم هذه الدراسة طريقة التحقق من صحة وموحدة للحصول النقي بطانة الرحم الخلايا الظهارية (EEC) والثقافات اللحمية الخليوي (ESC) باستخدام الكبار الفئران سليمة تعامل مع هرمون الاستروجين لمدة ثلاثة أيام متتالية. تم تحسين بروتوكول لتحسين العائد، والسلامة، ونقاء من الخلايا وكذلك تمديد لدراسة decidualization في coculture الجماعة الاقتصادية الأوروبية وESC. هذا النموذج قد تكون مناسبة لاستغلال أهمية كل أنواع الخلايا في decidualization وتقييم مساهمة الجزيئات يشير الهامة التي يفرزها EEC أو ESC خلال الاتصالات بين الخلايا.
Introduction
بطانة الرحم البشري هو البطانة الداخلية للرحم ويخضع لدورات شهرية من انهيار وإصلاح تمهيدا لحالات الحمل المحتملة. وهو يتألف من طبقة واحدة من الخلايا الطلائية المبطنة لتجويف الرحم وسدى الكامنة التي تختلف في السمك وفقا لتقلبات المبيض هرمونات الاستروجين والبروجستيرون. خلال مرحلة الجسم الأصفر، وارتفاع هرمون البروجسترون بعد الإباضي لحث على تمايز الخلايا اللحمية بطانة الرحم إلى خلايا الساقطية أكبر، جولة، وهي عملية تسمى decidualization 1 و 2. في الإنسان، تحدث هذه الظاهرة بشكل عفوي لتشكيل predecidua، ولكنه يصبح أكثر وضوحا على زرع الأجنة. والنتيجة الوظيفية decidualization هي أن الرحم يصبح عابر تقبلا لزرع الجنين. وصفت هذه الفترة باسم "نافذة زرع". خلال الفترة المبكرة من زرع الأجنة، البريد decidualizedوالخلايا اللحمية ndometrial المحيطة الجنين زرع توفر حاجزا لمنع مرور المواد الضارة إلى الجنين 3. خلال فترة الحمل، وهذا الساقط توفير المواد الغذائية للجنين النامي قبل اتخذت المشيمة مكان، وستشكل لاحقا الجزء الأمهات من المشيمة (4).
الاعتبارات الأخلاقية والعملية تحد من تصميم الدراسات الإنسان للتحقيق في عملية decidualization ولقد دفعت استخدام النماذج الحيوانية. كونه عضوا في مجموعة المشيمة دموية مشيمائية، فإن بطانة الرحم من القوارض تخضع أيضا decidualization قبل المشيمة 5. في القوارض، ومع ذلك، فإن الشروع في عملية decidualization يعتمد على وجود الكيسات الأريمية في تجويف الرحم، مما يدل على أن التحفيز الإضافي اللازم لتحريك ردود الساقطية 6. هذا ينطوي على الاتصالات المعقدة بين عشرالبريد خلايا بطانة الرحم الظهارية التي لها اتصال مباشر مع الكيسة، والخلايا اللحمية الأساسية. ومع ذلك، decidualization يمكن أن يتسبب بشكل مصطنع استخدام المنبهات مثل الخدش الميكانيكي أو تقطير النفط في الرحم تستعد هرمونيا. على الرغم من الدراسات المجراة باستخدام نماذج decidualization الاصطناعية سمحت لنا لتحسين رؤيتنا في عملية معقدة إشارات من decidualization، الميكانيكية دراسات معمقة، على سبيل المثال، التحقيق في البلاغ الذي لا غنى عنه بين الخلايا الظهارية واللحمية، محدودة. لذلك، في الدراسات المختبرية decidualization يمكن استخدامها لمعالجة مسارات مهمة ودراسة العمليات الأساسية. تحقيقا لهذه الغاية، مزارع الخلايا اللحمية بطانة الرحم الأولية يمكن إعدادها من بطانة الرحم البشري أو القوارض. توظيف القوارض يوافق على استخدام الحيوانات المعدلة وراثيا للتحقيق في دور بروتين معين من الاهتمام أثناء عملية decidualization. ومع ذلك، غير ناضج، prepuberوغالبا ما تستخدم تاي الفئران من أجل تجنب المضاعفات دورة داقية، بينما في حالات أخرى يتم جمع رحم من جميع مراحل دورة داقية، مما يؤدي إلى عدم التجانس في الثقافات. وعلاوة على ذلك، وقد تمت دراسة عملية decidualization في بروتوكولات مختلفة، على سبيل المثال، عن طريق (ط) الهرمونات المكمل (الاستروجين والبروجسترون أو الأدينوزين الأدينوزين الحلقي (المخيم)) إلى وسيلة زراعة، أو (ب) عزل الخلايا الساقطة من الفئران في اليوم 4.5 من (الزائفة) الحمل، والتي تتطلب ضرورة إضافية لفحص المكونات والذكور أجريت لهم هذه العمليات. هذه القيود تدل على ضرورة وجود طريقة موحدة للدراسة في decidualization المختبر. في هذه الدراسة، وهذا نموذج الفسيولوجية لفحص في المختبر decidualization بدءا من الكبار، وستعرض غير (الزائفة) الفئران الحوامل. في هذه الطريقة، سوف حقن يومية من 17β استراديول (E2) تحفز تكاثر خلايا بطانة الرحم، مما أدى إلى زيادة العائد من متجانسة وصالسكان الخلية لدى عودتهم. وعلاوة على ذلك، فإن استخدام نظام coculturing يسمح دراسة الحديث المتبادل-الظهارية انسجة والقدرة على التعامل مع عملية decidualization على مستويات مختلفة.
Protocol
Representative Results
Discussion
Decidualization هو التمايز التي تعتمد على هرمون البروجسترون من خلايا انسجة بطانة الرحم إلى خلايا الساقطية إفراز الجولة. في الإنسان، هذه العملية تحدث بشكل عفوي خلال مرحلة الجسم الأصفر من الدورة الشهرية، وبدأت في الخلايا اللحمية المحيطة خلايا الأوعية الدموية لتشكيل predecidua. ومع ذلك، في القوارض، وجود الكيسة لا بد للحث على decidualization. حقيقة أن decidualization يحدث إلا بعد الاتصال مع الخلايا الظهارية بطانة الرحم يعني أن هناك عوامل مهمة تفرز من خلايا الظهارية للحث على decidualization في سدى الكامنة. وعلى الرغم من هذا الاختلاف في بدء عملية decidualization ينبغي الاعتراف، والحقيقة أن decidualization الإنسان يصبح أكثر قوة على زرع الأجنة تشير إلى أن آليات مماثلة يمكن أن تشارك. في المختبر غالبا ما تستخدم مزارع الخلايا لدراسة تأثير جزيئات محددة خلال عملية decidualization.ومع ذلك، فإن توافر وكمية من الأنسجة البشرية التي يمكن جمعها وغالبا ما يقتصر ويرافقه الاختلافات، وعلى سبيل المثال، مرحلة دورة، وعدد حالات الحمل وجود أمراض النساء مثل التهاب بطانة الرحم أو غدي. العديد من هذه القضايا يمكن الوقاية منها عن طريق استخدام أنسجة الفئران التي يمكن الوصول إليها بسهولة ومرحلة دورة مستقلة. ميزة أخرى قوية من استخدام أنسجة الفئران هي الفرصة لاستخدام القوارض المعدلة وراثيا وإمكانية إعداد عدد كبير من التجارب. في هذه اللحظة، وقد وصفت العديد من البروتوكولات العزلة مختلفة في الأدب مع تفاوت الكبير في السن من الحيوانات وفترة في مرحلة الشياع في لحظة الاستخدام.
تقدم هذه الدراسة طريقة جديدة لبطانة الرحم المشترك الثقافات الأولية للانسجة والخلايا الظهارية التي تم اتخاذها الاستفادة من دورة داقية موحدة من قبل حقن يومية من هرمون الاستروجين قبل العزلة. وعلاوة على ذلك، هرمون الاستروجين هو كnown للحث على الانتشار في الخلايا الظهارية وانسجة الخلايا مما يزيد العائد في العزلة. واستند بروتوكول العزلة وصفها في هذه الورقة على غرانت وآخرون. 7، ومع ذلك، تم إدراج المزيد من الخطوات الأمثل لزيادة الغلة، والنقاء، والجدوى من ثقافات مختلفة من الخلايا. أولا، كان HBSS تستكمل دائما مع المضادات الحيوية لتجنب التلوث من ثقافة الأولية. خلال عزل MEEC، تم إجراء التكيف درجة حرارة (15 دقيقة عند 37 درجة مئوية) لزيادة حصاد الخلايا الظهارية أثناء عملية الهضم الأول. بعد ذلك، أدرج خطوة إضافية لتهدئة النشاط الأنزيمي بعد التربسين الهضم عن طريق إضافة المتوسطة التي تحتوي على FBS لكبح نشاطها. وعلاوة على ذلك، صدرت MEECs من خلال مرشح والذي كانت شبكة أكبر مما هو شائع وصفها (100 ميكرون) لأنها غالبا ما تأتي في مجموعات وأوراق الخلية. وعلاوة على ذلك، تم تخفيض التلوث من قبل خلايا انسجة عن طريق أداء الوظيفةخطوة itional التي تم فصلها استنادا MEECs وMESCs على الترسيب الجاذبية. وأخيرا، تم المصنف MEECs coverslips على المغلفة الكولاجين لزيادة المرفق من الخلايا لcoverslips الزجاج، كما أصبح واضحا أن التعلق coverslips الزجاج غير المصقول أو المطلي PLL-لم يكن كافيا. خلال عزل MESCs، واستكملت كولاجيناز (1 ملغ / مل) لتحسين الهضم. وعلاوة على ذلك، تم تنفيذ هذه الخطوة الهضم في مكررة لتجنب التلوث من MEECs المتبقية. أدت كل هذه خطوات إضافية في ثقافات نقية وقابلة للحياة السكان خلية متجانسة.
تم تقييم نقاء سكان الخلية مع المناعية وQRT-PCR تستخدم فيمنتين كعلامة انسجة وcytokeratin باعتباره علامة الظهارية. بشكل واضح، وقد لوحظ نمط التعبير الآخر من فيمنتين وcytokeratin في MEEC ومسك. ومع ذلك، فإنه يمكن أن يكون لاحظت أن التعبير مرنا نسبيا من فيمنتين وcytokeratin مشابه في الثقافات MEEC. Similيتم نشر النتائج ع من قبل مجموعات بحثية أخرى، حيث تنمو الخلايا الظهارية في الثقافة اكتساب فيمنتين التعبير 9. الأهم من ذلك هو الاختلاف في التعبير البروتين بين فيمنتين وcytokeratin كما لوحظ في stainings immunohistological من السكان مختلفة من الخلايا. أظهر المناعية المزدوج الذي EECS كانت إيجابية للcytokeratin وكانت ESC إيجابية لفيمنتين. استخدام هذه العلامات في المناعية هو وسيلة ثابتة وتستخدم standardly للإشارة إلى أنواع الخلايا 10.
على الرغم من أن الكثير من الأبحاث قد أجريت على decidualization من مسك، فإنه لا يزال من الممكن أن وجود الخلايا الظهارية في هذا النموذج قد يغير من نتائج decidualization. أولا، وقد تبين أنه إذا MEEC تنمو إلى أحادي الطبقة بحضور المتوسطة مكيفة مسك أو في إعداد ثقافة مشتركة، أحادي الطبقة لديها مقاومة كهربائية تحسين الظهارية الخلايا بطريق الظهارة (طير)، والناجمة عن العوامل التي يفرزها مسك 7. وعلاوة على ذلك، بييرو وآخرون. 11 تقدم أي دليل على انتشار الظهارية، وتتأثر 17β استراديول، قد بوساطة العوامل يفرز من خلايا انسجة، وبدلا من ذلك، يمكن للخلايا الظهارية الافراج عن العوامل التي تعدل انسجة decidualization 12 و 13. وعموما، فمن الواضح أن البيئة المشارك ثقافة الظهارية انسجة توفر وضعا أكثر الفسيولوجية التي تسمح للتفاعل نظير الصماوي والاتصالات. وقد وصفت طريقة زراعة اثنين من أنواع مختلفة من الخلايا باستخدام نظام المشاركة في ثقافة إدراج سابق 14 و 15 و تم تكييفها للاستخدام الخلايا الأولية الفئران. من خلال الكشف عن مستويات البرولاكتين مرنا باعتباره من قراءة لdecidualization، تقنية الموضحة لديها استنساخه جدا للقراءة خارج لdecidualization المتاحة والسماح للليالي بالتالي دراسة للعلاقة بين الظهارية انسجة خلال decidualization. إشارات نظير الصماوي بوساطة من MEEC قد يغير مدى decidualization في خلايا انسجة. وعلاوة على ذلك، فإن النموذج يسمح لتعديل معين من الجانب الظهارية دون أن يؤثر بشكل مباشر على خلايا انسجة. لذلك، هذا التعاون ثقافة MEEC ومسك تقدم أداة مثالية لتقييم تأثير الهرمونات، السيتوكينات، وما إلى ذلك على الخلايا الظهارية مع التدريجي على قراءة decidualization اللحمية. ميزة أخرى لهذا النظام المشترك الثقافة هو أنه يسمح للباحثين للتحقيق في تورط بروتين معين في العملية decidualization سواء في الظهارية أو مقصورة انسجة باستخدام الخلايا المعزولة من الحيوانات المعدلة وراثيا. وعلاوة على ذلك، فإن هذه التقنية أن تكون مفيدة جدا للتحقيق في الكيسة التصاق لتقييم ما إذا كانت العوامل نظير الصماوي يفرز من قبل خلايا الظهارية في وجود الكيسة كافية للحث على decidualization من انسجة الكامنةالخلايا. خطوة هامة في غزو الأرومة الغاذية ربطها تدهور المصفوفة خارج الخلية، التي تتوسط فيها عمل الإنزيمات المحللة للبروتين. التقنية المقترحة يمكن تطبيقها كنموذج في المختبر للتحقيق في الحديث عبر بين الكيسة، والخلايا الظهارية وسدى الداعمة.
ومع ذلك، في هذه اللحظة لا يعرف إلا القليل عن أصل الخلايا الظهارية التي يمكن أن تكون اللمعية كذلك غدي. لذلك، هناك حاجة إلى مزيد توصيف الصورة الجينية والجزيئية للخلايا الظهارية. وبالإضافة إلى ذلك، يقتصر الطريقة الموصوفة في المعرفة المتاحة عن الاستقطاب من الخلايا الظهارية. في هذه اللحظة، لم تؤخذ استقطاب الخلايا الظهارية في الاعتبار. ومع ذلك، يتم وصف الاختلافات في التعبير عن بروتينات الغشاء في الأغشية القمية والقاعدية. الاستقطاب غير المناسب للطبقة الطلائية يمكن أن يكون لها تأثير على التفاعل نظير الصماوي بين epitheliالقاعدة والخلايا اللحمية. ومع ذلك، طرق للحصول على الخلايا الظهارية الاستقطاب وصفت ويمكن إدراجها في تقنية وصفها 15 و 16.
وإجمالا، يقترح بروتوكول صفها تقنية لإنشاء مزارع الخلايا الأولية من الماوس طلائي بطانة الرحم وخلايا انسجة بنجاح. نتائج هذا الأسلوب في مزارع الخلايا نقية كما أكد QRT-PCR والمناعية من فيمنتين وcytokeratin. في النهاية تم عرض الظهارية وانسجة الثقافة المشتركة التي تسمح للتحقيق في إشارات نظير الصماوي بوساطة إما MEEC و / أو مسك في عملية decidualization.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة أبحاث منطقة فلاندرز (FWO G.0856.13N) ومجلس البحوث في جامعة الكويت لوفين (OT / 13/113). ويتم تمويل KDC قبل FWO بلجيكا. ويتم تمويل ه أوراسكوم تليكوم / 13/113. ونود أن نشكر خلية منشأة التصوير الأساسية لوفين جامعة الكويت (http://gbiomed.kuleuven.be/english/corefacilities/microscopy/cic/cic.htm) لاستخدام المجهر متحد البؤر.
Materials
| ThinCert Tissue culture insert for 24 well plates; 1 µm pore size; transparant | Greiner Bio-one | 662610 | Inserts are also provided for other multiwell plates and/or other pore sizes. Other suppliers: Merck Millipore. https://shop.gbo.com/en/row/articles/catalogue/article/0110_0110_0090_0030/13408/ |
| Nunc Cell culture treated 24 well plates | Thermo Scientific | 142475 | http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/142475 |
| 8-Bromoadenosine 3′,5′-cyclic monophosphate sodium salt | Sigma Aldrich | B7880 | Prepare a stock solution of 100 mM in Milli Q water. Store aliquots at -20 °C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b7880?lang=en®ion=BE |
| Medroxyprogesterone 17-acetate | Sigma Aldrich | M1629 | Prepare a stock solution of 250 µM in ethanol. Store aliquots at -20 °C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m1629?lang=en®ion=BE |
| Arachis oil | Supermarket | Standard cooking arachis oil that can be found in every supermarket is used |
|
| PrestoBlue cell viability reagent | Thermo Scientific | A13261 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A13261?ICID=cvc-prestoblue-c1t1 |
| HBSS 1x, no calcium, no magnesium, no phenol red | Gibco | 14175-046 | Store in fridge as long as possible. Use cold HBSS+ during the protocol. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14175046 |
| 17-β Estradiol | Sigma Aldrich | E8875 | Prepare a stock solution of 1mg/ml in EtOH before diluting in arachis oil (1:1000). http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/e8875?lang=en®ion=BE |
| Cell medium filter Stericup, 0.22 µm, polyethersulfone, 500 mL, radio-sterilized | Merck Millipore | SCGPU05RE | http://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Stericup-GP%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-500%C2%A0mL%2C-radio-sterilized,MM_NF-SCGPU05RE |
| Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL) | Gibco | 15070-063 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15070063?ICID=search-15070-063 |
| DMEM/F12, phenol red, L-glutamine, HEPES | Gibco | 11330-032 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/11330057?ICID=search-11330-057 |
| Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, E.U.-approved, South America Origin | Gibco | 10500-056 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10500064?ICID=search-10500-064 |
| Amphotericin B | Gibco | 15290-018 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15290018?ICID=search-15290-018 |
| Gentamicin (50mg/ml) | Gibco | 15750-037 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15750037?ICID=search-15750-037 |
| DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red | Sigma Aldrich | D5921 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5921?lang=en®ion=BE |
| MCDB-105 | Sigma Aldrich | M6395 | Dilute in Milli Q water, adjust pH to 7 with NaOH and filter before use. Store in the dark. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6395?lang=en®ion=BE |
| Insulin from bovine pancreas | Sigma Aldrich | I1882 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/i1882?lang=en®ion=BE |
| Coverslips, glass, 18 mm Ø | Glaswarenfabrik Karl Hecht | 1001/18 | http://www.hecht-assistent.de/187/?L=1&tx_rmproducts_pi1[g]=937&tx_rmproducts_pi1[p]=3504&tx_rmproducts_pi1[v]=20088&cHash=abd12065683fe74b00eaa5e562824d06 |
| Poly-L-lysine | Sigma Aldrich | P2636 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p2636?lang=en®ion=BE |
| Collagenase type IA from Clostridium histolyticum | Sigma Aldrich | C2674 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2674?lang=en®ion=BE |
| DPBS, no calcium, no magnesium | Gibco | 14190-094 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14190094?ICID=search-14190-094 |
| Trypsin from bovine pancreas | Sigma Aldrich | T7409 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t7409?lang=en®ion=BE |
| Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red | Gibco | 25300-054 | Warm to room temperature before use. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/25300054?ICID=search-25300-054 |
| Cell strainer, 40 µm mesh, disposable | BD Falcon | 352340 | https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680 |
| Cell strainer, 100 µm mesh, disposable | BD Falcon | 352360 | https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680 |
| Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22 µm, polyethersulfone, 33 mm, gamma sterilized | Merck Millipore | SLGP033RS | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Millex-GP-Syringe-Filter-Unit%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-33%C2%A0mm%2C-gamma-sterilized,MM_NF-SLGP033RS?bd=1 |
| Acetic acid (glacial) 100% | Merck Millipore | 1.00063 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Acetic-acid-%28glacial%29-100%25,MDA_CHEM-100063 |
| Collagen I | Corning | 354236 | From rat tail. https://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-BR/Shopping/ProductDetails.aspx?categoryname=&productid=354236%28Lifesciences%29# |
| Pancreatin from porcine pancreas | Sigma Aldrich | P3292 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p3292?lang=en®ion=BE |
| 35 mm Tissue Culture Dishes, Polystyrene, Sterile | BD Falcon | 353001 | https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4675630 |
| Ethanol absolute AnalaR NORMAPUR ACS, Reag. Ph. Eur. analytical reagent | VWR Chemicals | 20821296 | https://uk.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=20821.310DP |
| monoclonal rabbit anti-human vimentin (D21H3) | Cell Signalling Tech | #5741 | use 1/500. http://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/vimentin-d21h3-xp-rabbit-mab/5741 |
| monoclonal mouse anti-human pan cytokeratin | Sigma Aldrich | C2562 | use 1/1000. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2562?lang=en®ion=BE |
| Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS | Affymetrix | 19943 | http://www.affymetrix.com/catalog/130621/USB/Paraformaldehyde+Solution+4+percent+in+PBS#1_1 |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/SIAL/X100?lang=en®ion=BE&gclid=Cj0KEQjwhN-6BRCJsePgxru9iIwBEiQAI8rq879lESeuIU4N4AEQRLNEXj4f8z65KkD-q8Xr35sQDRgaAp-k8P8HAQ |
| Goat serum | Sigma Aldrich | G9023 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g9023?lang=en®ion=BE |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Thermo Scientific | A-11034 | http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=488&resultPage=1&resultsPerPage=15&autocomplete=&searchMode=keyword&productTypeSelect=antibody&targetTypeSelect=antibody_secondary&species=ltechall&keyword=488#filters=genericsort2:%22Capra%20hircus%22;;generic6:^%22Oryctolagus%20cuniculus%22$;;conjugates:^%22Alexa%20Fluor®%20488%22$;; |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 594 | Thermo Scientific | A-11032 | http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=594&resultPage=1&resultsPerPage=15&autocomplete=&priorSearchTerms=&searchMode=keyword&productTypeSelect=antibody&targetTypeSelect=antibody_secondary&species=ltechall&keyword=594#filters=genericsort2:%22Capra%20hircus%22;;generic6:^%22Mus%20musculus%22$;; |
| VECTASHIELD mounting medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | http://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium-with-dapi.html |
| DPBS, with calcium and magnesium | Gibco | 14040174 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14040133 |
References
- Cummings, A. M., Yochim, J. M. Differentiation of the uterus in preparation for gestation: a model for the action of progesterone. J Theor Biol. 106 (3), 353-374 (1984).
- Jabbour, H. N., Kelly, R. W., Fraser, H. M., Critchley, H. O. Endocrine regulation of menstruation. Endocr Rev. 27 (1), 17-46 (2006).
- Wang, X., Matsumoto, H., Zhao, X., Das, S. K., Paria, B. C. Embryonic signals direct the formation of tight junctional permeability barrier in the decidualizing stroma during embryo implantation. J Cell Sci. 117 (Pt 1), 53-62 (2004).
- Zygmunt, M., Herr, F., Munstedt, K., Lang, U., Liang, O. D. Angiogenesis and vasculogenesis in pregnancy. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110 Suppl 1, S10-S18 (2003).
- Power, M. L., Schulkin, J. . The evolution of the human placenta. , (2012).
- Finn, C. A. The initiation of the decidual cell reaction in the uterus of the aged mouse. J Reprod Fertil. 11 (3), 423-428 (1966).
- Grant, K. S., Wira, C. R. Effect of mouse uterine stromal cells on epithelial cell transepithelial resistance (TER) and TNFalpha and TGFbeta release in culture. Biol Reprod. 69 (3), 1091-1098 (2003).
- De Clercq, K., et al. Functional expression of transient receptor potential channels in human endometrial stromal cells during the luteal phase of the menstrual cycle. Hum Reprod. 30 (6), 1421-1436 (2015).
- Pieper, F. R., et al. Regulation of vimentin expression in cultured epithelial cells. Eur J Biochem. 210 (2), 509-519 (1992).
- Greaves, E., et al. A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium. Am J Pathol. 184 (7), 1930-1939 (2014).
- Pierro, E., et al. Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium. Biol Reprod. 64 (3), 831-838 (2001).
- Kim, M. R., et al. Progesterone-dependent release of transforming growth factor-beta1 from epithelial cells enhances the endometrial decidualization by turning on the Smad signalling in stromal cells. Mol Hum Reprod. 11 (11), 801-808 (2005).
- Chen, J. C., et al. Coculturing human endometrial epithelial cells and stromal fibroblasts alters cell-specific gene expression and cytokine production. Fertil Steril. 100 (4), 1132-1143 (2013).
- Renaud, J., Martinoli, M. G. Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact. J Vis Exp. (113), (2016).
- Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppala, M., Lessey, B. A. Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: a new co-culture model. Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).
- Park, D. W., et al. A well-defined in vitro three-dimensional culture of human endometrium and its applicability to endometrial cancer invasion. Cancer Lett. 195 (2), 185-192 (2003).
