Low-Density primaire hippocampus Neuron Cultuur

De hersenen is georganiseerd in ingewikkelde netwerken van neuronen. De bijdrage van individuele neuronen netwerkactiviteit en hersenfunctie kan bestudeerd worden door selectieve verandering van hun moleculaire samenstelling en perturbance hun fysiologische eigenschappen. Genetische en chemische manipulatie van individuele neuronen is misschien wel makkelijker in gekweekte neuronen dan in intacte hersenweefsel, vrij van cellulaire heterogeniteit en complexiteit van laatstgenoemde. Neuronen in kweek te ontwikkelen welbepaalde axonale en dendritische assen en vormen uitgebreide synaptische verbindingen met elkaar.

Terwijl neuron kweek van volwassen dieren of uit andere gebieden van het zenuwstelsel kan worden embryonale hippocampuskweken vaak de voorkeur vanwege hun gedefinieerde piramidale celpopulatie en relatief lage dichtheid gliale ^{1, 2.} Hippocampale neuronen gekweekt bij lage dichtheid in kweek bijzonder ameNable de studie van subcellulaire lokalisatie, eiwittransport, neuronale polariteit en synaps ontwikkeling. Neuronen in cultuur zijn ook op grote schaal gebruikt in het bestuderen van moleculaire processen in synaptische plasticiteit ^{3, 4, 5, 6.} Neuron cultuur bereidingen van muizen met een wereldwijde genetische deleties die niet postnataal wel overleefd hebben zijn vooral nuttig bij het bestuderen van cellulaire en synaptische functies van bepaalde genen ⁷ geweest.

Zoals in de hersenen, gekweekte hippocampale neuronen afhankelijk trofische ondersteuning van gliacellen. Dit bemoeilijkt hun cultuur, en heeft geleid tot de ontwikkeling van de verschillende manieren waarop deze ondersteuning wordt geleverd. Een algemeen gebruikte werkwijze omvat plating neuronen rechtstreeks op een monolaag van gliacellen ⁸ of waarbij verontreinigende gliacellen van het verkregen hippocampal weefsel prolifereren en vormen een monolaag onder de neuronen ^9. Hoewel deze methode enig succes heeft gevonden, de onzuiverheid van de resulterende neuronale kweek is nadelig voor afbeeldexperimenten. Een andere veel gebruikte werkwijze voor het neuron cultuur te laten-de gliale feeder-laag geheel, en in plaats daarvan trofische ondersteuning in de vorm van een gedefinieerd kweekmedium ^10.

Hier beschrijven we de "sandwich" of "Banker" methode van neuron cultuur ^{2, 11.} Deze werkwijze omvat het uitplaten van de hippocampale neuronen op dekglaasjes, die vervolgens over een monolaag van gliacellen gescheiden door paraffinewas kralen gesuspendeerd. Dit vergemakkelijkt langetermijnkweek van een homogene populatie van neuronen zonder verontreinigende glia terwijl voor trofische ondersteuning van de onderliggende gliale monolaag. Wanneer neuronen van voldoende leeftijd of niveau van volwassenheid,het neuron dekglaasjes kan worden omgedraaid-out van de gliale schaal en gebruikt bij beeldvorming of functionele assays.