בטכניקה שרוול במודל של עכברים של אבי העורקים השתלת - סרט הדרכה
Summary
אנו מציגים מודל השתלת אבי העורקים orthotopic בטכניקה שרוול בעכברים. זו שיטה השקה מהירה מאוד, אשר יכול להיות מועסק במחקרים של מחלת כלי דם.
Abstract
השתלת אב העורקים Orthotopic בטכניקה שרוול מפחית לפגיעה העורקים עם השלילי של 10-20% בלבד. הזמן anastomose העורקים בעכברים באמצעות השיטה שרוול היה קצר ולא קל ממוצע של 20 דקות, המתיר מחקרים שתלי iso/מאפשר. המאמר הבא מתאר את הליך השתלת אב העורקים בשימוש המעבדה שלנו. העכברים היו מרדימים עם תערובת של איזופלוריין נפח 1.5% ו 100% חמצן דרך מסיכת פנים. בשלב זה, הקטע של אבי העורקים בין העורקים הכליות שלו נגע הסתעפות הופרד מן הווריד הנבוב, בחופשיות מוכן clampedat מקטעי לקרע, בתפר משי יחיד. לפני ההסרה של אבי העורקים תמיסת מלח המכיל הפארין היה מוזרק הכלילי התחתון. לאחר מכן אבי העורקים נחתך בין התפסים, פתרון הפארין מלוחים שימש ריקון לומן. הטכניקה שרוול בתפרים monofilament שימשה על מנת להשתיל. העורק בתפקיד orthotopic.
Introduction
כפי ציינתי במחקר הקודם, תשומת לב רבה הוקדשה מודלים מאתר השתלת אב העורקים אשר מאפשרים אפליה בין תגובות ספציפיות בכלי הדם נגרמת על ידי השתל עצמו גורמים מערכתית מסוימים הקשורים סביבה arteriogenic 1 , 2 , 3. הגורם משחק כאן תפקיד מכריע הוא הזמינות של נוקאאוט, העכברים הטרנסגניים. מעורבותם במודל כזה מציע את האפשרות של זיהוי וקביעת משעולים pathophysiological חדשים הקשורים להתפתחות מחלות כלי דם ניווניות, כגון טרשת עורקים, מפרצת היווצרות4, 5.
ראוי לציין כי במהלך הרכבה של איסכמיה/פגיעה reperfusion מהותי לפגיעה בכלי הדם המיועדים להשתלה עשויים להופיע. לכן, המופע של בעיות ספציפיות עם שתל שלמות או לתגובה דלקתית לא צפויה במהלך התקופה שלאחר הניתוח לא ייכללו אולי מסלק שינויים הקשורים pathophysiological ניווניות מחלות לב וכלי דם3 ,4,5,6,7. שרוול השקה היא שיטת קצה-ב חלופי עורקי השקה של כלי בקוטר של פחות מ 1 מילימטר, הוחל בהצלחה בכליות, לב השתלת בחולדות הותאמה לאחר מכן אבי העורקים השתלת בעכברים על ידי. Dambrin et al. 8 , 9 , 10 , 11.
אבי העורקים נזק בטכניקה השתלת שרוול ממוזער, בקצב נמוך מאוד כשל טכני, עקב זה שנמשך רק 20 דקות בממוצע. התוצאות הקודמות שלנו הראו מאפיינים מבניים פונקציונלי מעולה של isograft של ויוו לאחר ההשתלה באמצעות טכניקה שרוול1. . Dambrin et al. לתאר את זה אחרי עקומת לימוד קצרה שיעור ההצלחה היה מעל 78%10. סיבוכים כגון פקקת הם נדירים, לדוגמה Engelbrecht. et al. לא להתבונן פקקת בטכניקה שרוול ב השתלת כליות עכברוש8.
המודל מאתר השתלת אב העורקים עם שרוול. חיבור הוא כלי מהיר וקל ללמוד iso/להשתלת בתגובות הכלי המושתלים. וידאו זה מדגים את הליך השתלת אב העורקים מתבצעת במעבדה שלנו. מודל זה השתלת עשויה להועיל בהגדרת המנגנונים פתולוגיים הבסיסית של כלי דם מחלות ניווניות, עשוי לתרום הערכה נוספת של התערבויות תרופתי המולקולריים12.
Protocol
Representative Results
Discussion
לפני מחקר זה היו שונים דגמים אחרים השתלת בעכברים ביסודיות ניתחו3,6,7,10,13,14. המודל של השתלת אב העורקים באמצעות הטכניקה שרוול עם שינויים על-ידי. Dambrin et al. נבחר כפי זה לקריטריונים שלנו והראו אמינות גבוהה של ההשקה השרוול לעומת שיטות קונבנציונליות תפר קצה-לקצה 1 , 10.
טכניקה זו היא חיובית מבחינות רבות עם מלחציים צולבים זמן מופחת במידה ניכרת למזער את הנזק העורקים במהלך הניתוח. שיעור נמוך של פקקת נצפתה בנוסף חוסר התאמה פוטנציאלית קוטר הכלי בין התורם הנמען. התצפיות הנ ל לבצע טכניקה זו המתאים מאוד לצרכי חוקר מחלת כלי דם באבי העורקים השתלות בעכברים.
במחקר מעקב שבו בוצע אולטרסאונד 8 שבועות לאחר ההשתלה, אותרו ללא שינויים משמעותיים. זה אישר הנחות כי נזק העורקים במהלך הניתוח יהיה מינימלי1.
ההליך grafting שהוצגו במאמר זה מבטיח אין ליקוי הן שלמות שתל והן את תפקידה. לכן, ניתן להסיק שמקדם את מודל השתלת ניסיוני זה עשוי לשמש כלי רב ערך עבור חקירות תרופתי המולקולריים עתידיות למחלות ניווניות כלי בעכברים מהונדסים גנטית.
אנו מאמינים כי מדריך וידאו יכולה לתפקד מלמד הממחיש את השימוש של מודל arterio-עורקים פשוטה זה שזה יתרום יותר פורה לדיון בנושאים חשובים רבים בפתולוגיות כלי הדם. ניתן להשתמש בשיטה זו השקה מהירה מאוד ללמוד מחלת כלי דם בעכברים מהונדסים גנטית. זה עשוי לשמש גם שינוי במודל מפרצת בשילוב עם השתלת.
ישנן נקודות קריטיות במהלך ההליך. הצבת התפר עצמו הוא השלב הקריטי ביותר. המנתח חייב לטפל כדי למנוע כל פיתול של אבי העורקים על ידי יישור תקין של התורם, הנמען. התפסים יוסרו בקפידה לאחר בדיקה של ההשקה. מוטב שנשחרר את המלחציים דיסטלי תמיד קודם וכתוצאה מכך לחץ נמוך מחזיק הקירות יחד לפני שחרורו proximal בצד בלחץ גבוה. היה מדמם. תוצאה לא תקינה בעקבות הרצף של שחרור.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות רומא Wieczorek, פיטר Kurdybacha לסיוע עריכה מעולה שלהם, ואת ליאון דקר Uli Heuter לסיוע טכני מעולה שלהם.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
References
- Rowinska, Z., et al. Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging. Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).
- Daugherty, A. Mouse models of atherosclerosis. Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).
- Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).
- Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (11), 1897-1908 (2008).
- Chereshnev, I., et al. Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation. J Surg Res. 111 (2), 171-176 (2003).
- Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. New rapid technique for renal transplantation in the rat. Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).
- Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat. J Heart Lung Transplant. 17 (11), 1057-1064 (1998).
- Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis. J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).
- Siemionow, M. Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique. J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).
- Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).
- Sun, H., et al. Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation. Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).
- Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease. J Vis Exp. (69), e4338 (2012).
