Tissue biomechanics is important for maintaining cell shape and function and for determining phenotype. This report demonstrates non-destructive mechanical protocols for characterizing elastic and viscoelastic properties of human soft tissues, which can be directly applied to tissue-engineered substrates to allow a close matching of engineered materials to native tissue.
A medicina regenerativa tem o objetivo de engenheiro de materiais para substituir ou restaurar órgãos danificados ou doentes. As propriedades mecânicas de tais materiais devem imitam os tecidos humanos que são destinadas a substituir; para proporcionar a forma anatómica necessário, os materiais devem ser capazes de suportar as forças mecânicas que irá detectar quando implantado no local do defeito. Embora as propriedades mecânicas dos andaimes engenharia de tecidos são de grande importância, muitos tecidos humanos que sofrem de restauração com Engineered Materials não foram totalmente caracterizados biomecanicamente. Vários protocolos de compressão e de tracção são relatados para avaliação de materiais, mas com grande variabilidade que é difícil comparar os resultados entre os estudos. Para complicar ainda mais os estudos é a natureza muitas vezes destrutiva de testes mecânicos. Embora um entendimento do tecido é importante falha, é também importante ter um conhecimento das propriedades elásticas e viscoelásticas mais sob Physiolcondições de carga ogical.
Este relatório tem como objectivo proporcionar um protocolo minimamente destrutiva para avaliar as propriedades de compressão e tração dos tecidos moles humanos. Como exemplos desta técnica, o ensaio de tracção de pele e o teste de compressão de cartilagem são descritos. Estes protocolos podem também ser directamente aplicados aos materiais sintéticos para assegurar que as propriedades mecânicas são semelhantes às do tecido nativo. Protocolos para avaliar as propriedades mecânicas do tecido nativo humano permitirão um ponto de referência para criar substitutos da engenharia de tecidos adequados.
Os pacientes são cada vez mais à espera de diferentes transplantes de órgãos para o tratamento de falha ou feridos órgãos. No entanto, com a escassez de doadores de órgãos apropriados, medicina regenerativa é com o objetivo de criar soluções alternativas para pacientes com casos de insuficiência terminal de órgãos. A medicina regenerativa tem como objectivo satisfazer esta necessidade clínica por materiais de engenharia para actuar como substitutos de tecidos, incluindo tecidos moles, tais como cartilagem e pele. Para criar um material bem sucedida para restaurar os tecidos danificados, o material de substituição devem imitar as propriedades do tecido nativo que vai substituir 1-2. Uma vez implantado cirurgicamente, o material será necessário fornecer a forma anatómica do defeito do tecido e, portanto, as propriedades mecânicas do material são vitais 1. Por exemplo, um material de substituição de cartilagem auricular devem ter as propriedades mecânicas apropriadas para impedir a compressão através da pele 2 sobrejacente. Da mesma forma, um material para substituir automóvel nasaltilage precisará ter propriedades mecânicas adequadas para prevenir colapso durante a respiração 3. No entanto, apesar da importância das propriedades mecânicas quando o fabrico de materiais para implantação, há pouca evidência tem-se centrado na caracterização das propriedades mecânicas de diferentes tecidos humanos.
regimes de teste mecânico pode ser utilizado para estabelecer a compressão, à tracção, de flexão, propriedades de corte ou de um tecido. A pele é um altamente anisotrópica, viscoelástico, e o material quase incompressível 4-9. Comumente pele excisada é testado usando metodologias de tracção uniaxial, onde uma tira de forma adequada da pele é apertado em ambas as extremidades e esticados, enquanto a carga e extensão são registados 4-9.
Uma vez que o componente principal de todos os tecidos moles é água intersticial, a resposta mecânica de cartilagem está fortemente relacionada com o fluxo de fluido através do tecido 10-11. tecidos moles, como cartilagem have sido tradicionalmente testados usando um ensaio de compressão. Os métodos de ensaios de compressão são muito variados, com confinado, não-confinado, e recuo de ser o mais prevalente (Figura 1). Dentro de compressão confinado, uma amostra de cartilagem é colocada num impermeável, bem e carregada através de uma placa porosa cheia de fluido. Uma vez que o poço é não-porosa, embora o fluxo de cartilagem é na direcção vertical 12-13. Na compressão simples, a cartilagem é carregado usando uma placa não poroso sobre uma câmara não poroso, forçando o fluxo de fluido a ser predominantemente radial 12-13. Recuo é o método mais utilizado para avaliar as propriedades biomecânicas da cartilagem 12-13. É constituída por um penetrador, menor do que a superfície do espécime a ser testado, que é trazido para baixo para o espécime. De entalhe, tem muitas vantagens sobre os outros métodos de compressão, incluindo o facto de recuo pode ser realizada in situ, enabling do teste a ser mais fisiológico (Figura 1) 12-13.
Para compreender as propriedades de compressão e tracção de um tecido, o módulo de elasticidade de Young é tipicamente calculada através da análise da porção linear da curva de tensão-deformação, indicando a resistência elástica à compressão ou tensão, independentemente do tamanho da amostra 12. Ambos os regimes de teste de tracção e de compressão podem variar de acordo com a carga ou deformação aplicada e a taxa de ambos estes parâmetros. Actualmente, existem muitos protocolos diferentes de teste para avaliar a mecânica dos tecidos, o que torna extremamente difícil de interpretar ou comparar resultados de diferentes estudos 6-13. Além disso, muitos métodos mecânicos actualmente focar caracterizar as propriedades mecânicas do tecido, testando a amostra para destruição. Nosso objetivo é demonstrar um protocolo de recuo e de tensão que fornece comparação direta, não-destrutiva do ser humanotecidos moles e as construções da engenharia de tecidos.
Nós demonstramos um método que limita os testes mecânicos ao estresse e ainda obtém um módulo de elasticidade de Young em compressão e tensão. A amostra é sublinhado quer em tensão ou compressão de um determinado valor, e uma vez que o valor de tensão escolhida tenha sido alcançado, a amostra é deixada relaxar enquanto todos os dados são gravados. Este método capta ambas as propriedades viscoelásticas e relaxamento do tecido dentro do mesmo ensaio, que pode ser aplicado directamente ao material sintético. Temos utilizado o protocolo de recuo para avaliar tecidos moles humanos, incluindo a pele e cartilagem 14-16. A cartilagem é avaliada através de testes de recuo e da pele é avaliada usando a tensão testando 14-16. Pesquisadores com o objetivo de projetar materiais com propriedades semelhantes a tecidos moles humanos poderia considerar a implementação destes protocolos.
Vários protocolos de tração e recuo foram publicados para caracterizar tecidos moles humanos. Nós fornecemos um outro método, que pretende ser mais do diagnóstico e não destrutiva. As amostras submetidas a teste mecânico neste protocolo são limitadas pela carga, em vez de por deslocamento, como transdutores são mais sensíveis do que para carregar ao deslocamento. Portanto, reproduções da experiência pode ser mais preciso através de tecidos e materiais sintéticos. Usando esta técnica, que têm demonstrado um protocolo de tracção para avaliação de tecido da pele e um protocolo de recuo para a análise de tecido de cartilagem. Ambos os protocolos são fáceis e simples de implementar e poderiam ser considerados para a caracterização de tecidos moles humanos e construções de engenharia de tecidos.
Um dos passos essenciais da metodologia para obter uma curva de tensão-relaxamento adequado para análise é o de assegurar que a amostra não deslize durante o ensaio. fixação adequada é requirEd, mas isto tem de ser equilibrado contra a causar qualquer tensão sobre os espécimes e assegurando que o penetrador é perpendicular à superfície, para prevenir qualquer carga de cisalhamento. É crítico que a composição assim como o tamanho e forma do tecido são semelhantes entre as amostras. Para a cartilagem, é vital para usar um protocolo de dissecção repetível e as dimensões da amostra. Para as amostras de pele, é vital para remover todo o tecido subcutâneo, a fim de obter uma amostra repetível. É também importante para garantir que, para todas as amostras, as amostras são idênticas condições, incluindo a hidratação, a temperatura ambiente, e o processo de descongelamento, se for caso disso.
Existem algumas limitações para os protocolos apresentados. Estudos sugeriram que as características de deformação da pele e cartilagem são dependentes de orientação da amostra 13. A pele foi reconhecida como anisotrópica, tanto para trás como o século 19, com Langer demonstrar em 1861 que a pele tem linhas naturaisde tensão, referidas como linhas de Langer 4. Assim, quando caracterizar amostras de pele, é importante que todas as amostras orientação paralela ou perpendicular às linhas Langer para evitar a introdução de um viés metodologia 4. Cartilagem também mostra as propriedades anisotrópicas e contém linhas Hultkrantz, que são equivalentes às linhas de Langer, de modo que a cartilagem pode deformar-se de forma diferente de acordo com a direcção em que ele é carregado 12, 19. Assim, é importante para aumentar o tamanho da amostra para permitir o teste de cartilagem em diferentes direcções. Como propriedades biomecânicas do tecido também variam com a idade e sexo, os estudos devem ser realizados com uma coorte representativa paciente para manter validade ao ambiente clínico. Além disso, alguns protocolos mecânicas defender pré-condicionamento, onde o tecido é submetido a cargas cíclicas para assegurar que o tecido se encontra num estado estacionário para o teste subsequente mecânica 20. No entanto, o mecanismo exacto de precondicionamento não é clara e o número exacto de ciclos necessário para produzir uma resposta consistente e repetível varia em diferentes estudos 20. O pesquisador deve considerar se deve ou não incluir o pré-condicionamento depois de avaliar a razão para a realização do teste biomecânico específico 20.
A pele é um material complexo, multi-camadas, divididas em três camadas principais: a epiderme, derme e hipoderme 4. As propriedades mecânicas do tecido da pele têm sido recentemente avaliada usando testes in vivo 4. No entanto, os protocolos de ensaio de tracção pode ser utilizada para compreender a biomecânica da pele de pele excisada 4. Esses testes podem fornecer informações para modelar as relações tensão-deformação, uma vez que as condições de contorno pode ser definido 4. Normalmente, in vitro regimes de teste usar tensões elevadas para caracterizar o material ao fracasso, enquanto in vivo uso de sistemasbaixa exigência varia 4. Quando se comparam os valores biomecânicas para a pele excisadas em tensão, existe uma grande variabilidade entre os diferentes estudos, variando de 2,9-150 MPa 4. As grandes diferenças entre os sujeitos são esperados devido à variação biológica natural, mas as diferenças de regimes de protocolo também pode agravar essas diferenças biológicas naturais. Por exemplo, as diferenças nas taxas de carga, entre os protocolos irá causar variação, como maiores taxas de carregamento causar menos tempo para que o fluido flua para fora, resultando em uma maior rigidez. Os protocolos de preparação, excisão e de manipulação do tecido da pele também irá causar diferenças nas propriedades mecânicas 4. Este protocolo demonstrado para a pele teste fornece um método alternativo para os investigadores para caracterizar o tecido da pele. Ele oferece algumas vantagens, incluindo a capacidade de identificar as propriedades elásticas e viscoelásticas dos tecidos da pele em um teste mecânico, permitindo uma maior compreensão da peleem um curto espaço de tempo. Além disso, o mesmo teste pode ser aplicado a substituições por engenharia de tecidos para a fabricação de construções com propriedades biomecânicas semelhantes como a pele nativa.
Testes recuo fornece uma opção atraente em comparação com testes de compressão confinada para compreender a biomecânica da cartilagem 21. De entalhe, tem a capacidade de preservar a estrutura fisiológica da cartilagem e, assim, fornece valores que imitam os de um ambiente clínico. Usando recuo, também é possível testar a cartilagem enquanto ainda ligados ao osso subjacente. A indentação permite também o teste fisiológico de cartilagem como in vivo. Quando duas superfícies da cartilagem aproximam um do outro, as bordas em torno da área de contato "protuberância" devido à água sob a área de contato que está sendo deslocado lateralmente após a deformação à compressão ocorre 17, 21. recuo cartilagem deve ser conduzida com um inDenter com um raio menor do que a amostra de cartilagem para permitir abaulamento semelhante. O tamanho do penetrador também deve ser de pelo menos 8 vezes o tamanho da amostra para assegurar que a cartilagem reage como se fosse parte de uma amostra de 22 indefinido. Usando um penetrador muito menor do que o raio do diâmetro amostra elimina quaisquer efeitos de bordo presente na criação espécime. Além disso, o recuo evita possíveis erros experimentais causadas por defeitos testar cartilagem danificada por extracção da amostra. Indentação também não envolve a preparação da amostra profunda, tais como a compressão limitada, permitindo pequenos pedaços, finas de cartilagem a ser testada 17, 21. Além disso, o método não destrutivo de recuo significa que ele tem uma potencial aplicação na prática clínica como uma ferramenta de diagnóstico, após estudos de validação e de verificação ter sido realizada.
Existem suposições-chave com recuo que o usuário deve assegurar, para appropresultados riate. A condição de limite crítico no carregamento de recuo exige um contacto constante entre o penetrador e a superfície da cartilagem (isto é, a superfície que não se deforma para longe do penetrador) 23, 24. Indentação de carga inclui também a condição de contorno assumido que o contacto entre a superfície da cartilagem e o penetrador é não destrutiva (ou seja, que o penetrador está em contacto com a superfície, mas não atravessa a superfície; superfície da cartilagem não deve falhar sob a penetrador) 25-26. Estudos têm mostrado que esta condição de limite pode ser verificada através da utilização de tinta da China, que irá manchar áreas danificadas quando aplicado à superfície da cartilagem 25, 26. Uma outra condição de contorno assume que o penetrador comprime a cartilagem perpendicular à superfície da amostra. A orientação perpendicular da compressão é um importante limite condition porque comprimindo a um ângulo, em especial se usar cargas cíclicas, podem causar o escorregamento, o que pode induzir componentes de cisalhamento e alterar a carga mecânica. Esta condição pode ser assegurada através de equipamento de teste cuidadoso configurar.
Após os protocolos resumidos foram otimizados para o tecido mole de interesse, seria útil para os investigadores a olhar para o ensaio dinâmico de tecido de interesse. Carregamento cíclico adequado de exemplares deve imitar limites fisiológicos normais e comportamentos, tais como imitando a pé ou de outros movimentos repetitivos 27. Em resumo, o presente relatório demonstra protocolos de ensaio mecânico simples para avaliar tecidos humanos. A implementação destes protocolos será fornecer informações fundamentais sobre as características biomecânicas de tecidos, permitindo construções de engenharia de tecidos para melhor imitar o tecido nativo.
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank the funding from Medical Research Council and Action Medical Research, which provided MG with a clinical fellowship, GN 2339, to conduct this work.
Digitial Vernier Calipers | Machine Mart | 40218046 | Digitial vernier caliper is used to measure sample thickness. |
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Forceps | VWR | 470007-554 | Forceps used to dissect the tissues. |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.2 | Life Technologies | 20012019 | PBS is used to hydate the tissue samples |