Tissue biomechanics is important for maintaining cell shape and function and for determining phenotype. This report demonstrates non-destructive mechanical protocols for characterizing elastic and viscoelastic properties of human soft tissues, which can be directly applied to tissue-engineered substrates to allow a close matching of engineered materials to native tissue.
再生医療は、損傷または罹患臓器を交換したり、復元する材料を設計することを目指しています。このような材料の機械的性質は、彼らが交換することを目指しているヒト組織を模倣する必要があります。必要な解剖学的形状を提供するために、材料は、欠陥部位に移植するとき、彼らが経験する機械的な力を維持することができなければなりません。組織工学足場の機械的特性は非常に重要であるが、操作された材料で修復を受け、多くのヒト組織は完全に生体力学的に特徴付けられていません。いくつかの圧縮および引張のプロトコルは、材料を評価するために報告されているが、大きな変動を有することが試験間の結果を比較することは困難です。さらなる研究を複雑にすることは機械的試験の多くの場合、破壊的な性質です。組織障害の理解が重要であるが、よりphysiol下弾性及び粘弾性特性の知識を持っていることも重要ですogical負荷条件。
このレポートでは、人間の軟部組織の圧縮および引張特性を評価するための最小限の破壊的なプロトコルを提供することを目的とします。この技術の例としては、皮膚の引張試験および軟骨の圧縮試験が記載されています。これらのプロトコルは、直接の機械的特性は、天然組織に類似していることを保証するために合成材料に適用することができます。プロトコルは、適切な組織工学代替物を作成することによってベンチマークを可能にする人間の天然組織の機械的特性を評価します。
患者はますます失敗や負傷者の臓器を治療するための様々な臓器移植を待っています。しかし、適切なドナー臓器の不足で、再生医療は末期臓器不全患者のための代替ソリューションを作成することを目指しています。再生医療とは、軟骨や皮膚などの軟組織を含む、組織の代用として機能するように工学材料によって、この臨床的必要性を満たすことを目指しています。損傷した組織を復元するために成功した材料を作成するには、置換材料は、1-2を交換しようとしている天然組織の特性を模倣する必要があります。外科的に移植されると、材料は、組織欠陥に解剖学的形状を提供する必要があります、したがって、材料の機械的性質は、1不可欠です。例えば、耳介軟骨を交換材料が覆う皮膚2により圧縮を防止するために適切な機械的特性を有していなければなりません。同様に、材料は、鼻の車を交換しますtilageは3呼吸時の崩壊を防ぐために適切な機械的性質を持っている必要があります。機械的特性の重要性にもかかわらず、移植のための材料を製造する場合しかし、証拠はほとんど異なるヒト組織の機械的特性を特性に焦点を当てています。
機械的試験計画は、組織の圧縮、引張、曲げ、または剪断特性を確立するために使用することができます。皮膚は高異方性、粘弾性、ほぼ非圧縮性材料4-9です。一般的に切除された皮膚は、負荷と拡張が4-9を記録している間に肌の適切な形状のストリップが両端で把持して延伸される一軸引張方法論を使用してテストされています。
すべての軟組織の主要な成分は、間隙水であるので、軟骨の機械的な応答は、組織10-11を通る流体の流れに強く関連しています。このような軟骨hと軟組織従来、圧縮試験を用いて試験されAVE。圧縮での試験のための方法が閉じ込められ、一軸、インデントが最も普及している( 図1)と、非常に多様です。拘束圧縮の中では、軟骨サンプルは不浸透性、流体で満たされたウェルと多孔板を介してロードに配置されます。ウェルは非多孔質であるため、軟骨が垂直方向12〜13であるが、流れます。一軸圧縮では、軟骨は、12月13日 、主に放射状であることが流体の流れを強制的に、非多孔室に非多孔板を使用してロードされます。インデントは、軟骨12-13の生体力学的特性を評価するために最も頻繁に使用される方法です。それは、テストされている試料の表面よりも小さな圧子、から構成され、それは、試料上にダウンします。くぼみは、くぼみをその場で行うことができるという事実を含む圧縮の他の方法に比べて多くの利点を有する、enabli複数の生理的( 図1)12 月13日であることをテストngの。
組織の圧縮および引張特性を理解するために、ヤング弾性率は、典型的には、試料サイズ12にかかわらず、圧縮または張力弾性抵抗を示す応力-ひずみ曲線の直線部分を分析することによって計算されます。引張および圧縮試験体制の両方が負荷や変形適用され、そのようなパラメータの両方の速度に応じて変化することができます。現在のところ、それは非常に困難解釈または異なる研究6-13からの結果を比較することができている、組織力学を評価するために、多くの異なる試験プロトコルが存在します。さらに、多くの機械的な方法は、現在の破壊に試料を試験することにより、組織の機械的特性を特性に焦点を当てます。 私たちは、人間の直接、非破壊比較を提供インデントと引張プロトコルを実証することを目指して軟組織と組織工学構築物。
我々はまだ、まだストレスに機械的なテストを制限し、圧縮と引張りヤング弾性率を取得する方法を示しています。サンプルは、一定の値に張力または圧縮のいずれかで強調され、選択された応力値に達した後、サンプルは、すべてのデータが記録されている間、リラックスさせます。この方法は、合成材料に直接適用することができるのと同じ試験、内の組織の粘弾性とリラクゼーション特性の両方をキャプチャします。我々は、インデントプロトコルを使用しています 皮膚や軟骨14-16を含むヒトの軟組織を、評価します。軟骨は、押込み試験を用いて評価され、皮膚を緊張14-16のテストを用いて評価されます。研究者は、これらのプロトコルを実装することを検討可能性があり、人間の軟部組織に似た特性を有する材料を設計することを目指して。
いくつかの引張とインデントのプロトコルは、人間の軟組織を特徴づけるために公開されています。私たちは、複数の診断や非破壊なることを目指して別の方法を、提供しています。トランスデューサは変位よりも負荷に対してより敏感であるとして、このプロトコルで機械的試験を受けているサンプルは、負荷によってではなく変位により制限されています。したがって、実験の再現は、組織や合成材料全体でより正確にすることができます。この技術を用いて、皮膚組織及び軟骨組織を分析するためのインデントプロトコルを評価するための引張プロトコルを示しました。どちらのプロトコルは、実装が簡単でシンプルであり、人間の軟組織と組織工学構築物の特徴付けのために考慮することができます。
分析に適した応力緩和曲線を得るための方法の重要なステップの一つは、サンプルが試験中に滑らないようにすることです。十分な固定がrequirですエドが、これは標本上の任意のストレスを引き起こし、圧子は、任意のせん断負荷を防止するために、表面に垂直であることを保証することに対してバランスをとらなければなりません。組成物ならびに組織の大きさや形状は、サンプル間で類似していることが重要です。軟骨のためには、反復可能な解剖プロトコルとサンプルの寸法を使用することが不可欠です。皮膚サンプルの場合は、反復のサンプルを得るために全ての皮下組織を除去することが重要です。適切な場合、すべての試料について、試料の条件は、水和、室温、および解凍工程を含む、同じであることを確認することも重要です。
提示されたプロトコルにはいくつかの制限があります。研究は、皮膚や軟骨の変形特性は、試料オリエンテーション13に依存していることを示唆しています。皮膚は、ランガーは、皮膚が自然のラインを持っていることを1861年に実証して、にまでさかのぼる19 世紀のような異方性であることが認識されました緊張、ランガー線4と呼びます。皮膚サンプルを特徴づける際にこのように、方法論バイアス4を導入することを避けるためにランガー線と平行または垂直なすべてのサンプルを向けることが重要です。軟骨はまた、異方性の特性を示し、ランガー線に相当するHultkrantz線が含まれ、そのように軟骨は、12、19に装填された方向記載異なる変形することができます。これにより、異なる方向に軟骨の検査を可能にするために、サンプルサイズを大きくすることが重要です。組織の生体力学的特性はまた、年齢や性別によって変化したように、研究は、臨床設定に有効性を維持するために、代表的な患者コホートで行われるべきです。さらに、いくつかの機械的なプロトコルは、組織は、組織が、その後の機械的試験20定常状態にあることを確実にするために繰り返し荷重を受ける前処理を提唱します。しかしPの、正確なメカニズム再調整は不明であり、一貫性と再現性の応答を生成するために必要なサイクルの正確な数は異なる研究20で変化します。研究者は、特定の生体力学的テスト20を行う理由を評価した後に前処理を含めるかどうかを検討する必要があります。
表皮、真皮、および皮下組織4:皮膚は、3つの主要な層に分け、複雑な多層材料です。 皮膚組織の機械的特性は、最近、 インビボで評価 4 で使用して評価されてきました。 しかし、引張試験のプロトコルは、切除皮膚4の皮膚の生体力学を理解するために利用することができます。このような試験は、境界条件が4に定義することができるので、応力-ひずみ関係をモデル化するために情報を提供することができます。一般的に、in vitro試験制度は、 インビボ系での使用に対し、障害のために材料を特徴づけるために、高い菌株を使用します低歪は4の範囲です 。緊張で切除した皮膚のための生体力学的な値を比較すると、MPaの4 2.9から150に至るまで、異なる研究間で大きなばらつきがあります。対象者との間に大きな違いは、天然の生物学的変化に期待されていますが、プロトコルの体制の違いはまた、これらの天然の生物学的な違いを配合することができます。より大きな負荷率がより高い剛性が得られ、流体が流出するためのより少ない時間を引き起こすとして例えば、プロトコル間の負荷率の差は、変動の原因となります。準備、切除、および皮膚組織のプロトコルを扱うには、機械的性質4に違いが生じます。このプロトコルは、皮膚組織を特徴づけるために、研究者のための代替の方法を提供し、テストの肌のために実証されました。これは、皮膚のより深い理解を可能にする、1機械試験で皮膚組織の弾性と粘弾性特性を特定する能力を含むいくつかの利点を提供し、短時間インチさらに、同じ試験を、天然皮膚と同様の生体力学的特性を有する構築物を製造するために、組織工学の置換にも適用することができます。
インデントのテストは、軟骨21の生体力学を理解するための拘束圧縮試験に比べて魅力的な選択肢を提供します。インデントは、軟骨の生理的な構造を維持する能力を有し、したがって、臨床設定のものを模倣する値を提供します。まだ下にある骨に付着しながら、インデントを使用して、軟骨をテストすることも可能です。インデントはまた、 インビボでのように軟骨の生理的なテストを行うことができます。 2軟骨表面が互いに接近するとき圧縮変形17、21を生じた後、接触領域の下水による接触「バルジ」の領域を囲む縁部は横方向に変位します。軟骨インデントは内で行わなければなりません同様の膨らみを可能にするために、軟骨サンプルよりも小さな半径でdenter。圧子のサイズはまた、不定サンプル22の一部であるかのように軟骨が反応することを確実にするために、少なくとも8倍のサンプルサイズでなければなりません。サンプル直径の半径は、試料の作成中に存在する任意のエッジ効果を排除するよりもはるかに小さい圧子を使用。また、インデントはサンプル抽出により損傷を受けた軟骨欠損をテストすることによって引き起こされる可能性実験誤差を避けることができます。インデントはまた、軟骨の小さい、薄い片が17、21をテストすることができるように、このような拘束圧縮などの深い試料調製を、必要としません。また、くぼみの非破壊的方法は、検証及び確認の研究が行われた後、それは診断ツールとしての臨床設定における潜在的な用途を有することを意味します。
ユーザーがappropのために確認する必要がありますインデントを持つ主要な仮定があります。riate結果。インデント負荷の重要な境界条件は圧子と軟骨表面( すなわち、表面は圧子から離れて変形しないこと)23、24との間に一定の接触を必要とします。インデント負荷はまた軟骨表面と圧子との接触が圧子が表面に接触していること、すなわち (非破壊的であるが、表面を通過しないことを前提と境界条件を含み、軟骨表面が下に失敗してはなりません圧子)25から26。研究は、この境界条件は、軟骨表面25,26に適用した場合、損傷した領域を染色する墨の使用を介して確認することができることを示しています。さらに境界条件は圧子が試料の表面に垂直な軟骨を圧縮することを前提としています。圧縮の垂直配向性は重要な境界のcondですitionせん断コンポーネントを誘導し、機械的荷重を変更することができる滑りを引き起こすこともあり、繰り返し荷重を使用している場合は特に、角度で圧縮するため。この条件は設定慎重にテスト装置を介して確保することができます。
要約プロトコルは、関心の軟組織のために最適化された後、研究者が関心のある組織の動的テストを検討するために、それが有用であろう。標本の適切な周期的荷重は、ウォーキングや他の反復動作27を模倣するなど正常な生理的限界と動作を模倣する必要があります。要約すると、このレポートには、ヒト組織を評価するために、単純な機械的な試験プロトコルを示しています。これらのプロトコルを実装することは、より良い天然組織を模倣するために組織工学の構築を可能にする、組織の生体力学的特性に関する重要な情報を提供します。
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank the funding from Medical Research Council and Action Medical Research, which provided MG with a clinical fellowship, GN 2339, to conduct this work.
Digitial Vernier Calipers | Machine Mart | 40218046 | Digitial vernier caliper is used to measure sample thickness. |
Water Bath | Cole Parmer | UY-12504-94 | StableTemp Digital Water Bath Flask Holder used to defrost tissues samples if they are frozen. |
Mach-1 Material Testing Machine | Biomomentum | V500c | Mechanical Testing Machine used to test the mechancial properties of the tissues. |
Scalpel Blade | VWR | 233-5335 | Scalpel blades using to cut and dissect the tissues. |
Forceps | VWR | 470007-554 | Forceps used to dissect the tissues. |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.2 | Life Technologies | 20012019 | PBS is used to hydate the tissue samples |