Tissue biomechanics is important for maintaining cell shape and function and for determining phenotype. This report demonstrates non-destructive mechanical protocols for characterizing elastic and viscoelastic properties of human soft tissues, which can be directly applied to tissue-engineered substrates to allow a close matching of engineered materials to native tissue.
La medicina rigenerativa si propone di progettare materiali per sostituire o ripristinare gli organi danneggiati o malati. Le proprietà meccaniche di tali materiali dovrebbe imitare i tessuti umani Essi mirano a sostituire; per fornire la forma anatomica desiderata, i materiali devono essere in grado di sostenere le forze meccaniche si verificano quando impiantato al sito del difetto. Anche se le proprietà meccaniche dei ponteggi tissutale sono di grande importanza, molti tessuti umani, che subiscono il restauro con materiali Engineered non sono stati completamente caratterizzati biomeccanico. Diversi protocolli di compressione e trazione sono segnalati per la valutazione dei materiali, ma con grande variabilità è difficile confrontare i risultati tra gli studi. A complicare ulteriormente gli studi è la natura spesso distruttiva di prove meccaniche. Mentre il comprensione del fallimento tessuti è importante, è anche importante avere conoscenza delle proprietà elastiche e viscoelastiche più sotto Physiolcondizioni di carico ogical.
Questo rapporto si propone di fornire un protocollo minimamente distruttivo per valutare le proprietà di compressione e trazione dei tessuti molli umani. Come esempi di questa tecnica, la prova di trazione della pelle e test di compressione della cartilagine sono descritti. Questi protocolli possono essere applicati direttamente a materiali sintetici per garantire che le proprietà meccaniche sono simili al tessuto nativo. I protocolli per valutare le proprietà meccaniche del tessuto nativo umana permetterà un punto di riferimento da cui creare adeguati sostituti tissutale.
I pazienti sono sempre in attesa per diversi trapianti di organi per il trattamento di organi in mancanza o feriti. Tuttavia, con la mancanza di organi idonei, medicina rigenerativa si propone di creare soluzioni alternative per i pazienti con insufficienza terminale d'organo. La medicina rigenerativa mira a soddisfare questa esigenza clinica da materiali tecnici di agire come sostituti dei tessuti, compresi i tessuti molli, come la cartilagine e la pelle. Per creare un materiale di successo per ripristinare i tessuti danneggiati, il materiale sostitutivo dovrebbe imitare le proprietà del tessuto nativo sta andando a sostituire 1-2. Una volta impiantato chirurgicamente, il materiale dovrà fornire forma anatomica al difetto del tessuto e quindi, le proprietà meccaniche del materiale sono fondamentali 1. Ad esempio, un materiale in sostituzione cartilagine auricolare dovrebbe avere le proprietà meccaniche adeguate per impedire la compressione dalla pelle sovrastante 2. Analogamente, un materiale per sostituire car nasaletilage avrà bisogno di avere adeguate caratteristiche meccaniche per evitare il collasso durante la respirazione 3. Tuttavia, nonostante l'importanza delle proprietà meccaniche quando fabbricazione materiali per l'impianto, poche prove si è concentrata sulla caratterizzazione delle proprietà meccaniche dei diversi tessuti umani.
regimi di controllo meccanici possono essere utilizzati per determinare la compressione, trazione, flessione o proprietà di taglio di un tessuto. La pelle è altamente anisotropa, viscoelastica, e quasi materiale incomprimibile 4-9. Comunemente pelle asportata viene testato utilizzando metodologie di trazione monoassiale, dove una striscia opportunamente sagomato di pelle viene afferrata alle due estremità e stirato mentre il carico e l'estensione vengono registrati 4-9.
Poiché il componente principale di tutti i tessuti molli è l'acqua interstiziale, la risposta meccanica della cartilagine è fortemente correlata al flusso di fluido attraverso il tessuto 10-11. I tessuti molli come la cartilagine have tradizionalmente testata utilizzando il test di compressione. I metodi di test a compressione sono abbastanza varie, con confinato, non confinato, e il rientro è il più diffuse (Figura 1). All'interno compressione confinata, un campione cartilagine è posto in una impervia, piene di liquido bene e caricata attraverso una piastra porosa. Poiché il pozzo è non poroso, flusso se la cartilagine è in direzione verticale 12-13. In compressione non confinato, la cartilagine viene caricato tramite una piastra non poroso su una camera non porosa, costringendo il flusso di fluido ad essere prevalentemente radiale 12-13. Rientro è il metodo più utilizzato per la valutazione delle proprietà biomeccaniche della cartilagine 12-13. Si compone di un penetratore, più piccola della superficie del campione in prova, che viene portato giù sul campione. Indentazione ha molti vantaggi rispetto ad altri metodi di compressione, compreso il fatto che rientranza può essere eseguita in situ, enabling la prova sia più fisiologico (Figura 1) 12-13.
Per comprendere le proprietà di compressione e trazione di un tessuto, modulo elastico di Young è tipicamente calcolata analizzando la porzione lineare della curva sforzo-deformazione, che indica la resistenza elastica alla compressione o tensione, indipendentemente dalle dimensioni del campione 12. Entrambi i regimi di trazione e di prova di compressione può variare in funzione del carico o deformazione applicato e il tasso di entrambi tali parametri. Attualmente, ci sono molti protocolli di test diversi per valutare la meccanica dei tessuti, il che rende estremamente difficile l'interpretazione o confrontare i risultati di diversi studi 6-13. Inoltre, molti metodi meccanici attualmente si concentrano sulla caratterizzazione delle proprietà meccaniche del tessuto testando il campione alla distruzione. Il nostro obiettivo è di dimostrare un protocollo di rientro e alla trazione che fornisce, confronto diretto non distruttivo delle risorse umanetessuti molli e costrutti tissutale.
Abbiamo dimostrato un metodo che limita le prove meccaniche a stress ma ancora ottiene modulo elastico di Young in compressione e trazione. Il campione viene sollecitato in tensione o compressione per un certo valore, e una volta che è stato raggiunto il valore di sollecitazione prescelta, il campione è permesso di rilassarsi mentre viene registrato tutti i dati. Questo metodo cattura sia le proprietà viscoelastiche e rilassamento del tessuto all'interno della stessa prova, che può essere applicato direttamente al materiale sintetico. Abbiamo usato il protocollo di indentazione per valutare i tessuti molli umani, tra cui la pelle e la cartilagine 14-16. La cartilagine è valutata sulla base di test di indentazione e la pelle viene valutata utilizzando il test tensione 14-16. I ricercatori con l'obiettivo di progettare materiali con proprietà simili a tessuti molli umani potrebbe prendere in considerazione l'attuazione di questi protocolli.
Diversi protocolli di trazione e di rientro sono stati pubblicati per caratterizzare i tessuti molli umani. Abbiamo fornito un altro metodo, che mira ad essere più diagnostico e non distruttivo. I campioni sottoposti a prove meccaniche in questo protocollo sono limitati dal carico anziché spostamento, come trasduttori sono più sensibili a caricare rispetto allo spostamento. Pertanto, riproduzioni dell'esperimento possono essere più precisa di tutti i tessuti e materiali sintetici. Usando questa tecnica, abbiamo dimostrato un protocollo di trazione per valutare tessuto cutaneo e un protocollo indentazione per analizzare tessuto cartilagineo. Entrambi i protocolli sono facili e semplici da implementare e potrebbero essere prese in considerazione per la caratterizzazione dei tessuti molli umani e costrutti tissutale.
Uno dei passi fondamentali della metodologia per ottenere una curva di sollecitazione-rilassamento adatto per l'analisi è quello di garantire che il campione non scivoli durante il test. fissaggio adeguato è required, ma questo deve essere bilanciato con causare sollecitazioni sui provini e garantire che il penetratore è perpendicolare alla superficie per evitare qualsiasi sollecitazione di taglio. È fondamentale che la composizione nonché le dimensioni e la forma del tessuto sono simili tra i campioni. Per la cartilagine, è fondamentale utilizzare un protocollo ripetibile dissezione e le dimensioni del campione. Per i campioni di pelle, è fondamentale rimuovere tutto il tessuto sottocutaneo per ottenere un campione ripetibile. È altresì importante garantire che per tutti i campioni, i campioni sono identiche condizioni, compresa idratazione, temperatura ambiente, e il processo di scongelamento, se del caso.
Ci sono alcune limitazioni ai protocolli presentati. Gli studi hanno suggerito che le caratteristiche di deformazione della pelle e della cartilagine dipendono l'orientamento del campione 13. Pelle è stato riconosciuto di essere anisotropico nel lontano 19 ° secolo, con Langer dimostrando nel 1861 che la pelle ha linee naturalidi tensione, denominate linee Langer 4. Così, quando la caratterizzazione campioni di pelle, è importante orientare tutti i campioni parallelo o perpendicolare alle linee Langer evitare di introdurre una polarizzazione metodo 4. Cartilagine mostra anche proprietà anisotrope e contiene linee Hultkrantz, che sono equivalenti a linee Langer, quindi la cartilagine può deformare in modo diverso secondo la direzione in cui viene caricato 12, 19. Pertanto, è importante aumentare la dimensione del campione per consentire la verifica di cartilagine in direzioni diverse. Come proprietà biomeccaniche dei tessuti variano con l'età e il sesso, gli studi devono essere eseguiti con una coorte rappresentante dei pazienti a mantenere la validità per l'impostazione clinica. Inoltre, alcuni protocolli meccanici sostengono precondizionamento, dove il tessuto subisce carico ciclico per garantire che il tessuto è in uno stato costante per i successivi test meccanico 20. Tuttavia, l'esatto meccanismo della pricondizionamento non è chiara e l'esatto numero di cicli necessari per produrre una risposta coerente e ripetibile varia nei diversi studi 20. Il ricercatore dovrebbe considerare se includere o meno precondizionamento dopo aver valutato il motivo per eseguire il test biomeccanico specifico 20.
La pelle è un complesso, materiale multistrato, diviso in tre strati principali: l'epidermide, derma, ipoderma e 4. Le proprietà meccaniche del tessuto della pelle sono state recentemente valutato utilizzando valutazioni in vivo 4. Tuttavia, i protocolli di prove di trazione possono essere utilizzati per comprendere la biomeccanica della pelle di pelle asportata 4. Tali test possono fornire informazioni per modellare relazioni sforzo-deformazione, poiché le condizioni al contorno possono essere definite 4. Tipicamente, in vitro regimi di prova usano ceppi alti per caratterizzare il materiale al fallimento, considerando che in vivo sistemi usobassa tensione varia 4. Quando si confrontano i valori biomeccaniche per la pelle asportata in tensione, vi è una grande variabilità tra studi diversi, che vanno da 2.9-150 MPa 4. Le grandi differenze tra i soggetti sono attesi a causa di variazioni biologiche, ma le differenze tra i regimi di protocollo possono anche aggravare queste differenze biologiche naturali. Ad esempio, le differenze nei tassi di caricamento tra protocolli causare variazioni, come una maggiore velocità di carico causano meno tempo per il fluido di defluire, con un conseguente maggiore rigidezza. I protocolli di preparazione, l'escissione, e la manipolazione del tessuto cutaneo anche causare differenze nelle proprietà meccaniche 4. Questo protocollo dimostrata per la pelle test fornisce un metodo alternativo per i ricercatori di caratterizzare tessuto cutaneo. Esso fornisce alcuni vantaggi, tra cui la capacità di identificare le proprietà elastiche e viscoelastiche del tessuto cutaneo in una prova meccanica, consentendo una maggiore comprensione della pellein un breve lasso di tempo. Inoltre, lo stesso test può essere applicato alle sostituzioni tissutale per produrre costrutti con simili proprietà biomeccaniche come pelle nativa.
Test Rientro fornisce un'opzione attraente rispetto ai test di compressione confinata per capire la biomeccanica della cartilagine 21. Rientro ha la capacità di conservare la struttura fisiologica della cartilagine e quindi fornisce i valori che imitano quelle di un ambiente clinico. Utilizzando indentazione, è anche possibile testare la cartilagine mentre ancora attaccata all'osso sottostante. Rientro consente inoltre di test fisiologici di cartilagine in vivo. Quando due superfici di cartilagine si avvicinano, i bordi che circondano la zona di contatto "rigonfiamento" a causa dell'acqua sotto la zona di contatto essendo spostate lateralmente dopo che si verifica la deformazione di compressione 17, 21. Cartilagine di rientro deve essere condotta con un aDImmettere con un raggio inferiore rispetto al campione cartilagine per consentire rigonfiamento simili. La dimensione del penetratore dovrebbe essere almeno 8 volte la dimensione del campione per garantire che la cartilagine reagisce come se fosse parte di un campione indefinita 22. Utilizzando un penetratore molto minore del raggio del diametro di esempio elimina eventuali effetti di bordo presenti nella creazione campione. Inoltre, il rientro evita possibili errori sperimentali causati da testare difetti della cartilagine danneggiata per estrazione del campione. Indentazione anche non comporta la preparazione del campione profondo, come la compressione confinata, consentendo piccoli pezzi sottili di cartilagine da testare 17, 21. Inoltre, il metodo non distruttivo di indentazione significa che ha un potenziale applicazione in ambito clinico come sono stati effettuati strumento diagnostico dopo studi di convalida e verifica.
Ci sono ipotesi chiave con rientro che l'utente deve garantire per approprisultati riate. Una condizione critica di confine in loading indentazione richiede contatto costante tra il penetratore e la superficie della cartilagine (cioè, che la superficie non deforma dal penetratore) 23, 24. Indentazione carico comprende anche la condizione al contorno assunto che il contatto tra la superficie della cartilagine e il penetratore è non distruttivo (cioè, che il penetratore è in contatto con la superficie, ma non passa attraverso la superficie, la superficie della cartilagine non deve cedere sotto la penetratore) 25 – 26. Studi hanno dimostrato che questa condizione di limitazione può essere verificata attraverso l'uso di inchiostro di china, che macchiare aree danneggiate quando applicato alla superficie cartilaginea 25, 26. Un'ulteriore condizione al contorno presuppone che il penetratore comprime la cartilagine perpendicolare alla superficie del campione. L'orientamento perpendicolare della compressione è un importante cond boundaryition perché la compressione ad angolo, soprattutto se si usa un carico ciclico, può causare slittamento, che potrebbe indurre componenti tranciatura e cambiare il carico meccanico. Questa condizione può essere assicurata attraverso un attento apparecchiature di prova istituito.
Dopo i protocolli sintetizzati sono stati ottimizzati per il tessuto molle di interesse, sarebbe utile per i ricercatori di studiare collaudo dinamico del tessuto di interesse. Carico ciclico appropriato di campioni dovrebbe imitare normali limiti e comportamenti fisiologici, come ad esempio mimando camminare o altri movimenti ripetitivi 27. In sintesi, questo rapporto dimostra protocolli di prova meccaniche semplici per valutare tessuti umani. L'attuazione di queste protocolli fornirà informazioni chiave sulle caratteristiche biomeccaniche dei tessuti, permettendo costrutti tissutale per imitare al meglio il tessuto nativo.
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank the funding from Medical Research Council and Action Medical Research, which provided MG with a clinical fellowship, GN 2339, to conduct this work.
Digitial Vernier Calipers | Machine Mart | 40218046 | Digitial vernier caliper is used to measure sample thickness. |
Water Bath | Cole Parmer | UY-12504-94 | StableTemp Digital Water Bath Flask Holder used to defrost tissues samples if they are frozen. |
Mach-1 Material Testing Machine | Biomomentum | V500c | Mechanical Testing Machine used to test the mechancial properties of the tissues. |
Scalpel Blade | VWR | 233-5335 | Scalpel blades using to cut and dissect the tissues. |
Forceps | VWR | 470007-554 | Forceps used to dissect the tissues. |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.2 | Life Technologies | 20012019 | PBS is used to hydate the tissue samples |