Tissue biomechanics is important for maintaining cell shape and function and for determining phenotype. This report demonstrates non-destructive mechanical protocols for characterizing elastic and viscoelastic properties of human soft tissues, which can be directly applied to tissue-engineered substrates to allow a close matching of engineered materials to native tissue.
Regenerative Medizin zielt darauf ab, Materialien zu konstruieren, beschädigte oder erkrankte Organe zu ersetzen oder wiederherzustellen. Die mechanischen Eigenschaften solcher Materialien sollte die menschlichen Gewebe nachahmen sie ersetzen wollen zu; die gewünschte anatomische Form zu schaffen, müssen die Materialien in der Lage, die mechanischen Kräfte zu stützen sie erfahren werden, wenn an der Defektstelle implantiert. Obwohl die mechanischen Eigenschaften von Tissue-Engineering-Gerüste sind von großer Bedeutung, dass viele menschliche Gewebe Restauration mit Engineered Materials unterzogen wurden nicht vollständig biomechanisch geprägt. Mehrere Druck und Zug-Protokolle werden zur Auswertung Materialien berichtet, aber mit großer Variabilität ist es schwierig, Ergebnisse zwischen den Studien zu vergleichen. die oft destruktiven Natur der mechanischen Prüfung Erschwerend die Studien wird. Während ein Verständnis der Gewebeversagen wichtig ist, ist es auch wichtig, Kenntnis der elastischen und viskoelastischen Eigenschaften unter mehr physiol habenlogischen Belastungsbedingungen.
Dieser Bericht soll eine minimal destruktive Protokoll bereitzustellen, um die Druck- und Dehnungseigenschaften des menschlichen Weichgewebe zu bewerten. Als Beispiele für diese Technik sind die Zugprüfung der Haut und die Druckprüfung von Knorpel beschrieben. Diese Protokolle können auch direkt auf synthetische Materialien angewendet werden, um sicherzustellen, dass die mechanischen Eigenschaften sind ähnlich dem nativen Gewebe. Protokolle, die mechanischen Eigenschaften des menschlichen nativem Gewebe zu beurteilen, wird ein Maßstab, an dem erlauben geeignete Tissue-Engineering-Ersatz zu schaffen.
Die Patienten warten immer für verschiedene Organtransplantationen nicht gelingt oder verletzten Organen zu behandeln. Doch mit dem Mangel an geeigneten Spenderorganen ist die regenerative Medizin zielt auf alternative Lösungen für Patienten im Endstadium einer Organversagen erstellen. Regenerative Medizin zielt darauf ab, diese klinische Notwendigkeit von technischen Materialien als Gewebeersatz zu handeln zu erfüllen, einschließlich der Weichgewebe, wie Knorpel und Haut. Um ein erfolgreiches Material erstellen , um beschädigte Gewebe wieder herzustellen, sollte das Ersatzmaterial die Eigenschaften des nativen Gewebe nachahmen , es wird auf 1-2 ersetzen. Sobald chirurgisch implantiert, muss das Material anatomischer Form dem Gewebedefekt zu schaffen , und somit sind die mechanischen Eigenschaften des Materials 1 vital. Beispielsweise ein Material Ohrmuschelknorpels ersetzen sollten die entsprechenden mechanischen Eigenschaften, um Kompression durch die darüber liegende Haut 2 verhindern. In ähnlicher Weise ein Material Nasen Auto zu ersetzentilage müssen ausreichende mechanische Eigenschaften haben kollabiert 3 während der Atmung zu verhindern. Trotz der Bedeutung der mechanischen Eigenschaften, wenn Materialien zur Implantation Herstellung hat wenig Hinweise auf die Charakterisierung der mechanischen Eigenschaften von verschiedenen menschlichen Geweben konzentriert.
Mechanische Testverfahren können die Druck-, Zug-, Biege- oder Schereigenschaften eines Gewebes herzustellen verwendet werden. Die Haut ist ein stark anisotropen, viskoelastische, und fast nicht komprimierbaren Material 4-9. Häufig herausgeschnitten Haut einachsige Zug- Methoden getestet mit, wo ein geeigneter Hautförmigen Streifen an beiden Enden gegriffen und gestreckt , während die Last und die Erweiterung 4-9 aufgezeichnet werden.
Da die Hauptkomponente aller Weichgewebe interstitiellen Wasser ist, ist die mechanische Reaktion des Knorpels zu der Strömung des Fluids durch das Gewebe 10-11 stark verwandt. Weichgewebe wie Knorpel have wurde traditionell unter Verwendung von Druckprüfung getestet. Die Verfahren zur Prüfung der Druckfestigkeit sind sehr unterschiedlich, mit gespanntem, unconfined und Einbuchtung sind die häufigste (Abbildung 1). Innerhalb beschränkt Kompression wird eine Knorpelprobe in eine undurchlässige platziert, mit Flüssigkeit gefüllte gut und belastet durch eine poröse Platte. Da die auch nicht-porös ist, fließt , obwohl der Knorpel 12-13 in der vertikalen Richtung ist. In unconfined Kompression wird der Knorpel geladen eine nicht poröse Platte auf eine nicht poröse Kammer verwendet, um die Fluidströmung zwingt überwiegend radial 12-13 sein. Einrückungen ist die am häufigsten verwendete Methode für die biomechanischen Eigenschaften des Knorpels 12-13 zu bewerten. Es besteht aus einem Eindringkörper, kleiner ist als die Oberfläche der Probe getestet wird, das heißt auf die Probe gebracht. Eindrückung hat viele Vorteile gegenüber anderen Methoden der Kompression, einschließlich der Tatsache , dass Einbuchtung kann in situ durchgeführt werden, enabliphysiologischeren (Abbildung 1) 12-13 , um die Test ng.
Um die Druck- und Zugeigenschaften eines Gewebes zu verstehen, die elastische Youngsche Modul wird typischerweise durch Analysieren des linearen Teil der Spannungs-Dehnungskurve, welche die elastischen Widerstand gegen Kompression oder Spannung, unabhängig von der Probengröße 12 berechnet. Beide Zug- und Drucktestverfahren kann entsprechend der Belastung oder Deformation variieren aufgetragen, und die Rate beider dieser Parameter. Derzeit gibt es viele verschiedene Testprotokolle Gewebemechanik zu bewerten, was es extrem schwierig , 6-13 zu interpretieren oder vergleichen Sie die Ergebnisse aus verschiedenen Studien macht. Darüber hinaus konzentrieren sich viele mechanische Verfahren, die derzeit auf die mechanischen Eigenschaften des Gewebes zu charakterisieren, indem die Probe zur Zerstörung zu testen. Unser Ziel ist eine Vertiefung und Zug-Protokoll zu zeigen, dass direkte, zerstörungs Vergleich der menschlichen bietetWeichgewebe und Tissue-Engineering-Konstrukte.
Wir zeigen ein Verfahren, das die mechanischen Tests Belastungsgrenzen noch erhält noch einen elastischen Young-Modul in Druck und Zug. Die Probe wird betont, entweder in Spannung oder Kompression auf einen bestimmten Wert, und wenn der gewählte Spannungswert erreicht ist, wird die Probe erlaubt, sich zu entspannen, während all die Daten aufgezeichnet werden. Diese Methode erfasst sowohl die viskoelastischen und Erholungseigenschaften des Gewebes innerhalb des gleichen Tests, der direkt an das Kunststoffmaterial aufgetragen werden kann. Wir haben die Einbuchtung Protokoll menschlichen Weichgewebe zu bewerten, einschließlich der Haut und Knorpel 14-16. Cartilage verwendet beurteilt Eindringprüfung und die Haut wird Spannung ausgewertet 14-16 zu testen. Ziel Forscher Materialien mit ähnlichen Eigenschaften wie menschliche Weichteile zu konstruieren, könnte in Erwägung ziehen, diese Protokolle zu implementieren.
Mehrere Zug- und Vertiefung Protokolle wurden veröffentlicht menschlichen Weichgewebe zu charakterisieren. Wir haben ein anderes Verfahren bereitgestellt, das mehr diagnostische und zerstörungsfrei sein soll. Die Proben unterziehen mechanischen Prüfung in diesem Protokoll werden durch Belastung begrenzt und nicht durch Verschiebung, als Wandler empfindlicher zu laden sind als Verdrängung. Daher Reproduktionen des Experiments kann über Gewebe und synthetischen Materialien genauer zu sein. Unter Verwendung dieser Technik haben wir eine dehnbare Protokoll zur Bewertung Hautgewebe und eine Vertiefung Protokoll zur Analyse von Knorpelgewebe nachgewiesen. Beide Protokolle sind einfach und einfach zu implementieren und könnten für die Charakterisierung von menschlichen Weichgewebe und Tissue-Engineering-Konstrukte in Betracht gezogen werden.
Eine der wesentlichen Schritte der Methodik eine Spannungsrelaxation Kurve geeignet für die Analyse zu erhalten, ist, um sicherzustellen, dass die Probe nicht während des Tests nicht verrutscht. Eine ausreichende Fixierung ist required, aber dies muss gegen Verursachung der Proben jeglichen Stress ausgeglichen werden und sichergestellt wird, dass der Eindringkörper senkrecht zur Oberfläche ist, jede Scherbeanspruchung zu verhindern. Es ist entscheidend, dass die Zusammensetzung sowie die Größe und die Form des Gewebes zwischen Proben ähnlich sind. Für Knorpel, ist es wichtig, ein wiederholbares Dissektion Protokoll und Probenabmessungen zu verwenden. Für Hautproben, ist es wichtig, alle das subkutane Gewebe, um eine wiederholbare Probe zu erhalten zu entfernen. Es ist auch wichtig, die Probe Bedingungen identisch sind, einschließlich Hydratation, Raumtemperatur, und Auftauvorgang gegebenenfalls zu gewährleisten, dass für alle Proben.
Es gibt einige Einschränkungen auf die dargestellten Protokollen. Studien haben ergeben , dass Verformungseigenschaften von Haut und Knorpel auf Objektorientierung 13 abhängig sind. Skin wurde erkannt anisotrop sind so weit zurück wie im 19. Jahrhundert, mit Langer im Jahre 1861 zeigen , dass die Haut natürliche Liniender Spannung, bezeichnet 4 als Langer Linien. Somit wird , wenn die Hautproben zu charakterisieren, ist es wichtig , dass alle Proben parallel oder senkrecht zu den Langer – Linien zu orientieren 4 eine Methodik zur Vermeidung von Verzerrungen einzuführen. Cartilage zeigt auch anisotrope Eigenschaften und enthält Hultkrantz Linien, die Langer Linien äquivalent sind, so kann der Knorpel verformen unterschiedlich nach der Richtung , in der es 12 geladen ist, 19. Somit ist es wichtig, die Probengröße zu erhöhen, für die Prüfung von Knorpel in verschiedenen Richtungen zu ermöglichen. Als biomechanischen Eigenschaften von Gewebe auch mit dem Alter und Geschlecht variieren, sollten Studien mit einer repräsentativen Patientengruppe durchgeführt werden, Gültigkeit der klinischen Einstellung beizubehalten. Weiterhin befürworten einige mechanische Protokolle Vorkonditionierung, wo das Gewebe zyklischen Belastungen unterzogen , um sicherzustellen , dass das Gewebe für eine nachfolgende mechanische Prüfung 20 in einem stationären Zustand ist. Jedoch ist der genaue Mechanismus der pAufarbeitung ist unklar und die genaue Anzahl von Zyklen benötigt , um eine konsistente und wiederholbare Reaktion zu erzeugen variiert in verschiedenen Studien 20. Der Forscher sollte prüfen , ob oder nicht zu schließen Präkonditionierung nach dem Grund für die Bewertung der spezifischen biomechanischen Test 20 durchgeführt wird .
Die Haut ist ein komplexes, mehrschichtiges Material, aufgeteilt in drei Hauptschichten: die Epidermis, Dermis und Hypodermis 4. Die mechanischen Eigenschaften von Hautgewebe haben 4 vor kurzem unter Verwendung von in vivo – Beurteilungen bewertet. Allerdings können Protokolle Zugprüfung verwendet werden , um die Haut Biomechanik der Haut herausgeschnitten 4 zu verstehen. Solche Tests können Informationen liefern Spannungs-Dehnungs – Beziehungen zu modellieren, da die Randbedingungen 4 definiert werden. Typischerweise in vitro Anwendung Prüfregimes hohen Belastungen des Materials zum Scheitern zu charakterisieren, während in vivo – Systemen Verwendungspannungsarm Bereiche 4. Wenn biomechanischen Werte für exzidiert Haut in Spannung verglichen wird , gibt es eine große Variabilität zwischen verschiedenen Studien, von 2,9 bis 150 MPa im Bereich 4. Große Unterschiede zwischen den Fächern sind durch natürliche biologische Variabilität erwartet, aber Unterschiede in Protokoll Regime können auch diese natürlichen biologischen Unterschiede Verbindung. Zum Beispiel Unterschiede in der Belastungsgeschwindigkeiten zwischen den Protokollen wird Variation verursachen, da größere Beladungsraten weniger Zeit Ursache für die Flüssigkeit herausfließen kann, in einer höheren Steifigkeit ergibt. Die Vorbereitung, Exzision und Handhabung Protokolle des Hautgewebes wird auch Unterschiede verursachen in den mechanischen Eigenschaften 4. Dieses Protokoll zum Testen der Haut gezeigt stellt eine alternative Methode für die Forscher Hautgewebe zu charakterisieren. Es bietet einige Vorteile, einschließlich der Fähigkeit, die elastischen und viskoelastischen Eigenschaften von Hautgewebe in einem mechanischen Test zu identifizieren, für ein besseres Verständnis der Haut ermöglichtin kürzester Zeit. Ferner kann der gleiche Test auf Tissue-Engineering-Ersatz angewandt werden Konstrukte mit ähnlichen biomechanischen Eigenschaften wie natives Haut herzustellen.
Eindringprüfung bietet eine attraktive Option im Vergleich zu beschränken Druckprüfung für das Verständnis der Biomechanik des Knorpels 21. Eindrückung hat die Fähigkeit, die physiologische Struktur des Knorpels zu erhalten, und somit enthält Werte, die denen von einer klinischen Umgebung nachahmen. Verwendung Einbuchtung ist es auch möglich, den Knorpel zu testen, während sie noch an dem darunterliegenden Knochen befestigt. Indentation ermöglicht auch physiologische Tests von Knorpel in vivo. Wenn zwei Knorpeloberflächen einander nähern, die Kontaktfläche "Beule" durch Wasser unter dem Kontaktbereich die Kanten seitlich wobei umgebenden verschoben nach Druckverformung 17 auftritt, 21. Cartilage Einbuchtung muss mit einem in durchgeführt werdenDGeben mit einem kleineren Radius als der Knorpelprobe ähnlich Ausbeulen zu ermöglichen. Die Größe des Eindringkörpers sollte auch mindestens 8 mal die Probengröße , um sicherzustellen, dass der Knorpel reagiert , als ob sie Teil einer unbestimmten Probe 22 waren. Mit Hilfe eines Eindringkörpers viel kleiner ist als der Radius des Probendurchmesser der Probenerstellung keine Randeffekte vorhanden eliminiert. Darüber hinaus vermeidet Einzug möglich experimentelle Fehler, verursacht durch durch Probenextraktion beschädigte Knorpeldefekten testen. Einrückung mit sich bringt auch nicht tief Probenvorbereitung, wie beschränkte Kompression, so dass kleine, dünne Knorpelstücke 17 getestet werden, 21. Darüber hinaus bedeutet die zerstörungsfreie Methode des Eindrucks, dass es eine mögliche Anwendung in der klinischen Einstellung hat als ein Diagnose-Tool nach der Validierung und Verifizierung Studien durchgeführt wurden.
Es gibt Schlüsselannahmen mit Vertiefung, die der Benutzer für geeignet f muss sicherstellen,riate Ergebnisse. Eine kritische Randbedingung in Vertiefung Belastung erfordert eine ständige Kontakt zwischen dem Eindringkörper und der Knorpeloberfläche (dh , dass die Oberfläche von der Eindringkörper nicht weg verformen) 23, 24. Indentation Laden umfasst auch die angenommene Grenzbedingung , dass der Kontakt zwischen der Knorpeloberfläche und dem Eindringkörper ist zerstörungsfrei ( das heißt, dass die Eindringkörper in Kontakt mit der Oberfläche ist , sondern geht nicht durch die Oberfläche, die Knorpeloberfläche nicht unter der ausfällt Eindringkörper) 25-26. Studien haben gezeigt , dass diese Randbedingung durch die Verwendung von Druckfarbe überprüft werden kann Indien, die beschädigten Bereiche zu färben , wenn 25 an die Knorpeloberfläche aufgebracht, 26. Eine weitere Randbedingung angenommen, dass der Eindringkörper den Knorpel senkrecht zur Oberfläche der Probe komprimiert. Die senkrechte Ausrichtung der Kompression ist eine wichtige Grenze condition, weil in einem Winkel zu komprimieren, vor allem, wenn zyklische Belastung verwendet wird, kann Schlupf verursachen, die Komponenten Scher induzieren kann und die mechanische Belastung ändern. Diese Bedingung kann sichergestellt werden durch eine sorgfältige Testausrüstung eingerichtet.
Nachdem die zusammengefassten Protokolle für das weiche Gewebe von Interesse optimiert worden, wäre es sinnvoll sein, für die Forscher in die dynamische Prüfung des Gewebes von Interesse zu suchen. Geeignete zyklische Belastung von Proben sollten normalen physiologischen Grenzen und Verhalten, wie imitiert Gehen oder andere sich wiederholende Bewegungen nachahmen 27. Zusammenfassend zeigt dieser Bericht eine einfache mechanische Testprotokolle menschlichen Geweben zu bewerten. diese Protokolle Implementierung werden die wichtigsten Informationen über die biomechanischen Eigenschaften von Gewebe bieten, Tissue-Engineering-Konstrukte ermöglicht besser das native Gewebe nachahmen.
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank the funding from Medical Research Council and Action Medical Research, which provided MG with a clinical fellowship, GN 2339, to conduct this work.
Digitial Vernier Calipers | Machine Mart | 40218046 | Digitial vernier caliper is used to measure sample thickness. |
Water Bath | Cole Parmer | UY-12504-94 | StableTemp Digital Water Bath Flask Holder used to defrost tissues samples if they are frozen. |
Mach-1 Material Testing Machine | Biomomentum | V500c | Mechanical Testing Machine used to test the mechancial properties of the tissues. |
Scalpel Blade | VWR | 233-5335 | Scalpel blades using to cut and dissect the tissues. |
Forceps | VWR | 470007-554 | Forceps used to dissect the tissues. |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.2 | Life Technologies | 20012019 | PBS is used to hydate the tissue samples |