Индуцированные плюрипотентные поколение стволовых клеток из клеток крови с помощью вируса Сендай и центрифугирование

Стволовые клетки являются одним из наиболее привлекательных материалов в клинической терапии в течение последних нескольких десятилетий ^1. Привлекательные свойства стволовых клеток плюрипотентности и способность к самообновлению. В 1981 году, первые эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) были выделены из эмбриона мыши ^2. Однако, когда техника была применена к эмбрионов человека, она столкнулась с рядом этических проблем.

В 2006 году , когда доктор Яманака и его команда перепрограммировали первый плюрипотентные клетки от мышей соматических клеток, поле стволовых клеток вновь обрела возможность и интерес был реанимирован ^3. Предоставляя несколько определенных факторов, плюрипотентные стволовые клетки были успешно "индуцированные" из взрослых соматических клеток, и, таким образом, были названы "индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК)." В 2007 году этот метод был применен к клеткам человека ^4, получая клетки с точными характеристиками ЭСК , но ни одна из этических дискуссий. Теоретически, плюрипотентныхCs могут быть получены из любого типа клеток, полученной из любого индивидуума или пациента. Специфическая для пациента иПСК растут как потенциальный инструмент, который может имитировать фенотипа заболевания и эпигенетических условия каждого отдельного пациента. Использование редактирования гена или другие методы , которые могут полностью изменить патогенное состояние, иПСК конкретного пациента , также может быть использован в персонифицированной медицины ^5. Кроме того, иПСК менее связаны с иммунным отторжением , потому что они имеют один и тот же иммунный идентичность в качестве донора, что делает автоматической трансплантации более осуществимыми ^6. Поэтому иПСК стали наиболее перспективной платформой в моделировании заболеваний, скрининга лекарственных средств и регенеративной терапии. С учетом этих преимуществ, улучшенные протоколы, которые могут дать более чистым и более высокие урожаи в наименьшее количество времени от самого маленького источника клеток постоянно находятся в стадии разработки. Одним из главных факторов найти наиболее эффективный протокол для будущего применения является тип первичной ячейкой. Большинство ранних иПСК поколения протосмещ_по_столбцам оптимизированы для адгезивных клеток , так как оригинальные IPSC линии были вызваны из фибробластов кожи ^4. Тем не менее, выделение и получение этих клеток являются трудоемкими. Кроме того, выделение фибробластов кожи включает в себя инвазивных хирургических процедур, которые могут стать одним из основных недостатков для более широкого применения.

Таким образом, для дальнейшего использования ИПСК, источник клеток с удобным приобретением требуется. Кровь рассматривается как идеальный источник клеток , так как она получена через довольно минимально инвазивные процедуры ^7-9. В данном исследовании мы разработали простую модификацию протокола генерации hiPSCs из мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК). Без сложного процесса расширения определенного типа клеток, таких как клетки CD34 +, целые клетки крови или PBMC, серийно высевали на матричных пластинок, покрытых центрифугированием после трансдукции с вирусом Сендай, содержащим Яманака факторы. Этот метод уменьшило время, необходимое дляприсоединение трансдуцированных плавающих клеток и снижение потерь перепрограммировать клетки, которые не смогли прикрепить на свои собственные.