リパーゼ及びホスホリパーゼ候補者のための基質特異性を定義します

このようなトリアシルグリセロールおよび（グリセロ）リン脂質のグリセロールベースの脂質は、重要な、おそらく最もよく知られている脂質クラス^1を構成^しています。トリアシルグリセロール（タグは）したがって、ポテンシャルエネルギーや炭素源として油脂、通常、貯蔵脂質として機能する、としています。タグは、頻繁に外部タグを消化し、炭素源としてそれらを使用できるようにするために産生する生物によって分泌されるリパーゼによって分解することができます。また、リパーゼは広く、それらの重要なバイオテクノロジー用途²に長年にわたって研究されてきました。

それらの両親媒性の性質とその近円筒形状、（グリセロ）リン脂質を呈する膜形成特性と、通常二層膜³の主要な脂質成分を構成します。このような細菌、大腸菌 、3つだけの主要な頭部基変種、ホスファチジルグリセロール（PG）、カルジオリピン（CL）、およびphosphatidのような単純な微生物では、一つは、それらの一つ一つがかなりのSNで異なる脂肪酸アシル鎖の数-1またはSNで置換することができることに注意する必要がありますが、ylethanolamine（PE）は、検出された-2位置が異なる分子種⁴の多数を生じさせます。他の細菌は、他のリン脂質に加えて、またはその代わりを持っている可能性があります。例えば、マメ科植物アルファルファ（ アルファルファ ）と窒素固定根粒共生を形成することが可能であるシノリゾビウム・メリロティ 、土壌細菌は、第二の両性イオン性リン脂質をPEに加えて含んで、ホスファチジルコリン^（PC）5。また、リンまたはグリセロールを含まない脂質は両親媒性であると細胞膜の一部を形成するかもしれません。例えば、リン制限増殖条件時、S.でメリロティは 、（グリセロ）リン脂質は、主としてリンを含まない膜脂質、 すなわち、スルホ脂質、オルニチン脂質、およびdiacylglyceryl trimethylhoによって置き換えられています^{moserine（DGTS）6。}細菌では、DGTSは2段階経路⁷にジアシルグリセロール（DAG）から形成されたが、DAGの生成のためのソースが明確ではなかったされています。パルスチェイス実験は、PCは、我々はリン制限条件下で形成され、DAGとホスホコリンにPCを変換できるC（PLCP、SMc00171）ホスホリパーゼを識別することができDGTS ⁸の前駆体であることと、この原稿に記載の方法を用いて、可能性を示唆しました^8。

別の研究では、我々はそのアシルCoAシンテターゼ（FADD）Sの欠損変異体を発見しました成長⁹の定常期に入るとき根粒かの大腸菌は、遊離脂肪酸を蓄積しました。これらの脂肪酸は、膜脂質に由来すると思われたが、遊離脂肪酸またはそれらの遊離酵素（群）の正確な供給源が知られていませんでした。ここでも、（、2パタチンのような^10（ホスホ）リパーゼを、この原稿で概説した戦略を採用S.中の遊離脂肪酸の形成に寄与しSMc00930とSMc01003） 根粒 ^11は、予測されました。驚くべきことに、SMc01003は、モノアシルグリセロール、最終的にはグリセロールと遊離脂肪酸¹¹に変換する基板としてDAGを使用しました。したがって、SMc01003はDAGリパーゼ（DGLA）です。

アルゴリズムの数を潜在的（リン）を予測するために存在するが^12,13は 、リパーゼ、それらの正確な機能と生理的役割は、通常知られていません。ここでは、クローンを作成する、プロトコルの概要を説明し、予測又は電位（ホスホ）リパーゼを過剰発現します。この原稿は、酵素アッセイを開発し、人工的な発色基質を使用することにより過剰発現（ホスホ）リパーゼのために最適化する方法について説明します。私たちは、最適化された酵素アッセイで、実際の（ホスホ）リパーゼ基質に遭遇することができ、どのようにこれらの知見は、微生物生理学の我々の理解を豊かにする方法の例を提供します。