Cryomilled 포유 동물 세포에서 단백질 단지 선호도 캡처
Summary
여기에서는, 극저온 온도에서 고체 밀링에 의해 포유류 세포를 파괴 얻어진 세포 분말로부터 세포 추출물을 제조하고, 항체의 결합 마이크론 스케일 상자성 비드에 친 화성 포획하여 관심 단백질 복합체를 분리하는 프로토콜을 기술한다.
Abstract
선호도 캡처 추가 연구를 위해 내인성 단백질 복합체를 분리하는 효과적인 기술이다. 항체와 함께 사용하는 경우,이 기술은 종종 면역이라고한다. 선호도 캡처 벤치 규모에서 높은 처리량 컨텍스트에서 적용될 수있다. 단백질 질량 분광법과 결합 할 때, 상호 작용 체는 친 화성 포획 분석의 주력이 입증되었다. 관련된 여러 단계를 실행하는 잠재적으로 여러 가지 방법이 있지만, 다음과 같은 프로토콜은 우리의 선호하는 방법을 구현한다. 두 가지 특징은 특유하다 : 친 화성 매체로서 세포 추출물 및 항체 결합 상자성 비드를 생산하는 세포 cryomilled 분말의 용도. 많은 경우에, 우리는 더 많은 기존의 친 화성 캡처 관행을 얻은 우수한 결과를 얻었다. Cryomilling 셀 파손 다른 형태와 관련된 많은 문제점을 회피한다. denat 피하면서 그것은 재료의 효율적인 파손을 제공합니다가열 또는 발포와 관련해서 만들었 문제. 그것은 거대 분자 분리 완화, 추출 지점에 천연 단백질 농도를 위로 유지합니다. 이 추출 된 단백질 유해 효소 활성을 제한 용액에 보내는 시간을 감소시키고, 이는 친화 매체에 의해 단백질의 비특이적 흡착을 감소시킬 수있다. 마이크론 규모의 자기 친 화성이 매체는 점점 전통적인 agarose- 및 파로스 기반 미디어를 교체, 지난 몇 년 동안 더 일반화되고있다. 자기 매체의 주 이점은 통상 하부 비특이적 단백질 흡착을 포함한다; 단백질 복합체가 결합하기 때문에 어떤 크기 배제 한계 대신 모공 내에보다 비드 표면에 발생; 및 조작의 용이성과 자석을 사용하여 처리.
Introduction
제시된 절차의 일반적인 응용 프로그램은 interactomic 특성 1에 대한 관심의 내인성 단백질 복합체의 높은 수율과 순도를 안정 획득하는 것입니다. 주로 단백질로 구성 모두 안정적 일시적 관련된 고분자 복합체의 동적 네트워크는 셀룰러 프로세스 2,3 조율 것으로 이해된다. 단백질 – 단백질 상호 작용을 확인하기위한 다수의 실험 방법이 있지만, 친화 캡처 단리 생리 단백질 복합체 4-6 해부 가장 널리 사용되는 방법 중 하나이다. 또한,이 기술은 판독 데이터 포인트뿐 아니라 물리적 엔티티와 같은 거대 분자 복합체를 수득하는 이점이있다; 바람직하게는, 상기 얻어진 복합체 따라서 추가적인 하류 생화학 적 효소 및 구조 분석 7-9의 호스트로 사용할 수있다. 제시된 프로토콜 PROTEI 매핑 할 필요에 응답하여 개발되었다N – 단백질 상호 작용 네트워크는 세포 생물학의 이펙터 분자로서의 역할 고분자 복합체를 특성화. 그들은 조직 배양에서 성장한 포유류 세포에 대한 애플리케이션에 대해 자세히 설명되어 있지만, 해당 시스템 관련 비틀기 주어진 생물학적 시료의 넓은 범위에 동등하게 적용 가능하다.
선호도 캡처의 역사는 최초의 면역 크로마토 그래피 실험을 다시 20 세기 초에 뻗어 – 일반적으로 면역 침전으로 요즘라고 무엇을 닮은 (IP) – 1950 년대 초에 의해 문헌에 등장. 기술의 주류 사용은 또한, 본 10-13이 세기의 전환기를 통해 개발했다. 다양한 세포 및 분자 생물학적 연구는 적어도 지난 사십년 14-19를위한 저온에서 분쇄하여 세포의 기계적 파손을 활용 한; 및 (슈퍼) 상자성 구슬을 이용하여 분자 분리는 벡이지난 20 년 20 점차 일반화 오메. 스스로 제작 작업의 확장 체와 넓은 연구 커뮤니티에 의해 입증 상승적 단백질 복합체의 친 화성 포획 실험 1에서 얻을 수있는 결과를 향상시키기 위해 제공되었다 이러한 다양한 기술을 결합 7,9,11,18,19,21 -23. 지원 결과는 그림 1에 제시되어있다.
주의 사항 및 효과적인 친화 캡처 실험을 실행에 적용되는 고려 사항의 컬렉션 참조 1에서 찾을 수 있습니다. 즉, 관심의 단백질의 인터랙를 카탈로그 지금까지 알 수없는 copurifying 단백질 (탐색 적 분석)를 식별하는 단백질 질량 분석 (MS)를 사용 (I) : 일반적으로이 방법은에 가장 적합한 특정의 상호 작용 파트너의 존재 (II) 분석, 즉,에 의심되는 단백질은 특정 단백질 또는 제한된 세트를 검출하는 MS 또는 웨스턴 블롯을 사용하여관심 (가설 테스트)의 단백질 teract; 또는 (III) 추가 기술에 의해 추가 연구 (예비 정밀 검사)에 대한 관심의 단백질을 포함 내생 조립 단백질 복합체를 준비합니다. 친 화성 포획 실험 체계에 착수하기 전에 대상 단백질 주목 원시 표적 단백질에 대해 또는 융합 단백질에 첨부 된 태그에 대해 통상적으로 IP 능이있는 항체에 결합하는 고품질의 화성 시약이 절대적으로 필요하다. 모든 일반적으로 선호도 캡처와 함께 사용되어, 서부 블롯 및 단백질 MS (예 : 쿠마 블루, Sypro 루비, 또는은, 다음의 SDS-PAGE 등) 일반적으로 단백질 염색 :이 곳에서 실험 판독 적절한 방법을하는 것도 중요하다 1. 제시된 프로토콜은 선호도 매체로서 항체 복합 자석 구슬을 사용한다. 반면 친 화성 배지의 기능은 처음에 몇 실험 파라미터들을 이용하는 실험에서 검증 할 수각 실험은 경험적 1,11,24을 최적화해야 최상의 결과를 얻었다. 프로토콜은 세 개의 독특한 단계로 분리되어 고정 된 셀 재 (1)의 제조; (2) 저온에서 고체 밀링 세포 파괴; 및 (3) 단백질 추출 및 항체 결합 상자성 비드를 사용한 친 화성 포획.
Protocol
Representative Results
Discussion
이러한 세 가지 프로토콜은 (1) cryomilling 의해 고체 파손 셀을 제조, (2), 유성 볼밀의 파손을 달성하고, (3) 복잡한에 포착하는 목적 단백질의 친 화성 세포 분말 추출물을 제조 탠덤 작동 생리 학적 인터랙. 많은 다른 세포 용해 기술은 분쇄 충격, 전단 및 / 또는 압력을 이용하는 기계 / 물리적 접근뿐만 아니라 화학적 / 효소 접근법 다른 장단점 49,50 각각 포함하여 존재한다. 각 연구자는 세포 파손 및 단백질 추출에 대한 선택 방법 (아래 설명) 경험 최적화를 필요로 바이어스 (51, 52)을 소개하는 가능성을 염두에두고, 그들의 분석에 가장 적합한 방법을 탐구하도록 권장된다. 기계 방법은 단백질 복합체를 방해 할 수 있습니다 높은 열 및 / 또는 전단력을 생성 할 수있다. Cryomilling는 t 샘플의 LN 2 냉각을 채용 한 덕분에 발열 효과를 방지공정의 그 기간. 유성 볼밀이 미분화 (53, 54)의 성분으로서, 전단 응력을 포함 충격 및 마찰의 힘에 의존하는 것으로 이해된다. 설정에서 우리는 단백질 복합체의 변성을 관찰하지 않은 보도했다. 실제로 우리는 추출과 '부드러운'세제 기반 용해 7을 사용 제제보다 높은 특정 활성을 나타내는 분명히 그대로 ~ 50 MDA 핵 기공 단지 (11)와 효소 활성 레트로 트랜스포존을 검색했습니다. 세포 용해의 화학 / 효소 적 방법은 셀의 내용물을 시험 관내 환경 세포막 구조적 고분자의 중단을 지원하지만 단백질 복합체의 무결성을 유지하기에 적합하지 않을 것 (ES로 방출되는 것을 제한 고통 ) 관심. 종종 둘 복합체의 성분 관심의 단백질을 형성하지 않고 조건 대상 착체는 안정 필요미리 알고. 고체 밀링의 주요 이점은 파손 추출 원료를 허가, 비결이다 첨가 액체없이 제조 (이하 -80 ° C에서) 저장 축적하고 편리 주문형 실험에 대해 검색 할 수 있다는 점이다; 예를 들면, 친 화성 캡처를위한 시험관 조건에서 최적화 탐험. 단백질 상호 작용 따라서 추출 용매의 양이 생리 학적 작용을 보존하는 것이 유리할 수있다 최소화 고농도 (55, 56)에서 가장 안정하다. 한편, 실제적인 고려있다 – 단백질 복합체의 친 화성 배지 표적 복합체를 섞는하기 위하여, 세포로부터 불용성 응집체없는 비 점착성 수성 상에 분배 될 필요가있다. 또한, 시험 관내 환경 (PH, 염 농도 등)를 통해 일부 표준화 제어 시스템화 및 재현성이 필요하다. 우리는이 홍보를 추출 발견의 희석 범위에서 oduced 1 : 4-1 : 9 (w : v)의 품질의 결과를 산출 실용적이고 이론적 인 문제를 만족시킨다. 또한, 중간 요구 친 화성 세포 추출물의 최적의 비율이 결정된다. 이는 친화력 매체의 다양한 양으로 추출물을 적정하여 실험적으로 수행되며, 아래에 더 논의 된 실험의 신호 대 잡음비를 검출 가능한 효과를 가질 수있다. 표적 단백질의 우수한 붕괴는 일반적으로 표적 단백질의 가용성 분획의 ≥70 %이지만,> 90 %가 바람직하다 및 추출 조건에주의 파라미터로 달성 될 수있다. 이러한 많은 실제적인 고려 사항 참조 1에 설명되어 있습니다. 집에서 만든 대안이 가능한 있지만 상자성 비드, 전문 microcentrifuge 관 홀더에 네오디뮴 자석을 사용하여 조작된다. 상기 홀더 내에 배치 할 때, 비드는 자기장의 영향 하에서 상기 튜브의 측면에 모은다. 솔루션은 디없이 제거 될 수있다구슬을 sturbing.
여기에 사용되는 유성 볼밀 개발되게 cryomilling 프로토콜의 하나의 한계는, (재료의 표 참조), 소재의 최소량 효과적으로 밀에 필요하며,이 장치 (> 1g)를 사용하여 셀 분말 회복된다는 것이다. 이러한 양은 용이하게 많은 미생물 세포주 및 모델 유기체 수득되고, 또한 종종 실험실 동물에서 절제된 조직을 달성 할 수있다. 그러나, 특정 세포주 부족 일 수있다 풍부한 동물 조직에서 성장하는 것은 매우 어려울 수있다. 재료의 소량을 비교적 달성 분말 섬도 희생 비록 잠재적으로 작은 컨테이너를 이용하여 다른 장치를 사용하여 분쇄 할 수있다. 또한, 기계식 분쇄 장치의 비용 일부 실험실 매우 고가 일 수있다. 해충을 사용하여 손으로 가장 저렴 포함한 대안 14-19 설정들을 사용하여 달성 될 수 Cryomilling제작과 박격포, 파손 효율이 상당히 떨어진다 않는다. 선호도 캡처 프로토콜은 일반적으로 최대 따라서 단백질 용액으로 추출하고, 표적 단백질 복합체의 캡쳐를위한 최대 가능성을 용이하게하기 위해 세포 용해의 높은 효율을 목표로한다. 한편,이 시험 관내에서 접합 효모 입증되었다가 최대 용해 시험 관내 생화학 적 활성의 최대 57, 58와 동등하지 않을 수 있음을 추출한다. 우리는 우리가 지금까지 테스트 한 시스템에서 이러한 문제를 관찰하지 않은, 그리고 cryomilling 경우에 따라서 의도적으로 우리의 세포 파괴를 제한하지 않습니다. 체외 효소 분석을 위해 최적화 할 때 그럼에도 불구하고, 이러한 가능성을 염두에 두어야한다. cryomilling 세포를 파괴하기위한 매우 효과적인 방법이지만 불균일 한 응집체가 종종 육안으로 관찰 할 수 있기 때문에, 초음파의 제한된 양들은 포유 동물 조직으로부터 생산 균질 전체 세포 추출물 혜택 : 일반적추출 조건에 소금 (100-300 밀리미터) 및 비 이온 세제 (0.1 %의 v / v)의 농도를 완화하기 위해 낮은 사용. 우리는 이러한 응집체의 존재는 후속 연관 캡처의 수율 및 / 또는 품질을 감소시킬 수 있음을 관찰 때문에, 정기적으로 (그들이 육안으로 관찰되지 않는 경우에도)을 분산시키는 초음파를 구현한다. 응집체는 분쇄 이전 효모 추출물 58에보고 된 것과 유사한 응집 막 단편과 일치한다. 초음파는 그러나이 프로토콜에 적용되는 초음파의 정도는 단편 DNA 상당히하지 않는, DNA 전단 및 솔루션에 염색질 조각을 해방 일부 프로토콜에 사용됩니다. 관심있는 특정 단백질에 대한 우수한 친 화성 리간드 또는 항체의 제한된 가용성 (또는 높은 비용)은 또 다른 장애물이 될 수있다. 시중에서 판매하는 친 화성 시약의 다양한는 모델 생물은 게놈 태그 또는 그럴 의무가있을 때 활용 될 수있다친 화성 태그로서 관심 융합체 단백질의 발현을 허용 이소성 발현 벡터와 ansfection. 그러나, 정의 된 항체의 제조는 점차 실현되고있다 모두 폴리 클로 날 및 모노클로 날 항체는 친 화성 포획 용도로 양호하게 수행 할 수있다. 이러한 많은 고려 사항도 참조 1에 더 자세히 설명되어있다.
화성 매질의 세포 용해 방법 및 선택 결과에 영향을 줄 수있는 방법의 예는도 1에 도시되어있다. 다른 추출 용매에 의해 가해지는 영향의 예는 참조 1,11,24에서 볼 수있다. 이들 및 다른 실험 파라미터 어려운 FPS를 구별 할 수있게, 친 화성 포획의 품질에 영향을 줄 수 있기 때문에, "비드 프로테옴"및 계산 방법의 저장소가 비 특정 오염물 FPS 40-43 식별을 지원하기 위해 개발되고있다 제거한다. 그럼에도 불구하고, 이러한 접근 방식 만 substit제한도 59에 최적의 샘플 준비를위한 UTE. 모범 사례를 관찰하고 경험적으로 선호도 캡처 실험, 다운 스트림 분석에 대해 더 논의 최고 품질의 샘플을 제공 할 것입니다 최적화. 샘플 순도를 향상시킬 수 있습니다 쉽게 구현 방법은 기본 용출이다. 고유 용출은 더욱 자주 실험용 그대로 친 화성 절연 단백질 복합체를 얻기 위해 사용된다; 그것은 종종 시료의 순도를 향상으로하지만, 또한 단독 이러한 이유로 사용될 수있다. 도 1 패널 II에서 설명하지만, 시료의 순도를 개선하기위한 고유 용출의 능력은 세포 추출액에서 목적 단백질의 풍부 친화력 매체의 양을 정확 적정에 의존 할 수있다 – 상기 매체가 초과되면 , 빈 paratopes는 기본적으로 용출 분획에서 관찰 FP 단백질의 오프 – 타겟 축적을 허용 할 수있다. 여기에 설명 된 시약 및 절차를 사용하면, 시간우리의 경험이었다 우리의 실험에 FPS의 하나의 큰 기여를 한 번 살아있는 세포의 맥락에서 제거 된 태그 단백질 그 자체입니다. (도. 1.II도. S1). 이러한 경우에, 항원의 부재하에 무관 프로테옴을 수득 부모 세포주 제어없이 실제 값이고; 마찬가지로 표적 항원하지만 아무것도없는 상태입니다 태그 전용 또는 스파이크에 컨트롤. 따라서, 직접 정량적 MS를 사용하는 이후 용해 단백질 상호 작용의 축적을 측정하는 I-7,38 DIRT을마다 실제 구현. 프로토콜의 단계 3.2.7에서 설명 된 바와 같이, 고유 용출 절차 사용한 친화 시스템의 세부에 따라 다를 것이다. 고유 용출은 가장 일반적으로 친 화성 매체로부터 단지 해제 태그의 태그 단백질 복합체 또는 단백질 분해 절단의 경쟁 변위에 의해 달성된다. 작은 에피토프 태그 이루어진 여러 친화 시스템은 fo를 존재R 에피토프 자체는 태그 단백질 복합체 (60)의 경쟁 용출 유용 펩타이드로 사용할 수있다. 마찬가지로, 여러 프로테아제는 융합 단백질 (61)는 특히 전략적으로 친 화성에 배치 동족 사이트를 절단 할 수 태그가 지정됩니다. 선택된 선호도 시스템의 특성에 따라 적절한 용출 방식을 채용 할 수있다.
일반적으로, 얻어진 결과의 품질이 크게 샘플 제조의 품질에 의해 영향을받을 것이다. 관심과 정밀도를 유지하면서 가능한 빨리 이러한 프로토콜의 각 단계를 신중하고 정확하게 일을하고하는 것이 중요합니다. 각 조작의 효율을 이해하는 각 단계를 통해 관심있는 단백질의 분할을 추적하는 것이 바람직하다. 예를 들어 문제의 세포 또는 조직에 대한 관심의 단백질은 얼마나 풍부하다? 아마도 연구 (및 단지)에서 단백질은 질량 특성에 도전 할 것이다낮은 풍부에 의한 분석. 정제 된 복합체 (약 나노 그램 범위) 일반 단백질 염색으로 검출하는 경우, 질량 분석은 성공할 가능성이 높다. 관심의 단백질 포착에만 민감한 향상된 화학 발광 웨스턴 블 롯팅 (약 피코 그램 범위)에 의해 검출 될 수 있다면, 질량 분석 효과가 어렵다. 관심의 단백질이 세포 풍부하더라도, 세포 추출액에 얼마나 풍부한 생산? 용액에 단백질 파티션 않거나 펠릿에? 후자의 경우, 새로운 추출 용액 회복을 향상시킬 것을 고안 할 수있다. 세포 추출액은 친화력 매체와 결합되면, 어떻게 효과적으로 단백질 포착? 단백질은 이후의 세척을 통해 결합 상태를 유지 하는가? 어떤 다른 copurifying 단백질은 어떻습니까? 프로토콜의 적절한 단계에서 각 샘플의 분취 량을 저장하여 이러한 질문에 쉽게 관심의 단백질에 서부 블로 팅에 의해 일반적으로 대답 할 수있다또는 일반 단백질 염색하지만, 다른 분석도 적합 할 수있다. 트레이드 오프가 하나의 속성 또는 다른 극대화를 만들 수있을 수도 있지만, 각각의 단계를 최적화하면, 캡처 된 복합체의 수율 및 순도를 향상시킬 것이다.
많은 연구자 친 화성 포획 전형적인 애플리케이션은 관심 단백질의 소수에 대한 생체 내에서 인터랙 후보를 식별하는 것; 이 후보는 일반적으로 물리적 인 인터랙의 생물학적 중요성을 입증하기 위해 생체 내에서 직교 방식에 의해 검증을 실시한다. 선호도 캡처 또한, (거의) 프로테옴 전체 기초 관찰 단백질 copurifying 생체 복합체의 추정 연산에 관한 추론을 용이리스트를 생성하는 높은 처리량의 연구에 의해 사용된다. 이러한 연구의 많은 예는하기 문헌에서 찾을 수있다. 이 방법은 탐구하는 사람에 찬성 특정 대상에 대해 캡처의 조건의 최적화를 포기합니다y를 대상; 같은 추론 단지 스스로는 거의 주어진 샘플에서 완전히 손상 및 고순도 검색되지 않습니다. 오히려, 다수의 별개의 친 화성 포획 샘플 사이 관찰 조성물의 부분 오버랩 추론 (42)의 기초로 사용된다. 두 가지 접근법은 상호 작용 체에 대한 우리의 이해에 중요한 데이터를 기여한다. 그럼에도 불구하고, 친 화성 포획 한 주요 이점은 자주 손상과 고순도 노력이 절차를 최적화하기 위해 제조되어 제공되는 복합체를 얻을 수있는 기회를 제공 않는다는 것이다. 우리는 접근의 미래는 생리 인터랙 및 하류 생화학, 효소 학적으로 더 자주 사용 및 구조 연구의 영역의 더 정확한 평가를 위해 용이성과 내인성 단백질 복합체 (11)의 캡처를 최적화의 효율성을 증가에 달려 있다고 생각 예를 들면, 7,9,23를 참조합니다.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 우수한 기술 지원에 대한 자신의 귀중한 MS 계측에 대한 조언, 지원 및 액세스뿐만 아니라 미스 켈리 R. Molloy의에 대한 교수 브라이언 T. Chait 감사합니다. 우리는 복사 편집에 지원 씨 켈리 맨 손으로 감사합니다. 이 작품은 NIH 보조금 P41GM109824, P41GM103314 및 P50GM107632에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
| Growth media & cell culturing implements | For producing frozen cells (I) | ||
| 500 cm^2 culture dishes | Corning | 431110 | For producing frozen cells (I) |
| Large beaker (1-2L) | For producing frozen cells (I) | ||
| Rectangular ice pan | Fisher Scientific | 13-900-747 | For producing frozen cells (I), & cryomilling (II) |
| Phosphate buffered saline (PBS) | For producing frozen cells (I) | ||
| Large cell scrapers | Fisher Scientific | 08-100-242 | For producing frozen cells (I) |
| Liquid nitrogen | For producing frozen cells (I), cryomilling (II), & affinity capture (III) | ||
| 50 ml conical tubes | Corning | 352098 | For producing frozen cells (I), & cryomilling (II) |
| 20 ml Luer lock syringe | For producing frozen cells (I) | ||
| Leur lock syringe caps | www.dymax.com | T11182 | For producing frozen cells (I) |
| Refrigerated centrifuge | For producing frozen cells (I) | ||
| 50 ml tube rack, 4 position | For producing frozen cells (I), cryomilling (II), & affinity capture (III) | ||
| Styrofoam box | For producing frozen cells (I), cryomilling (II), & affinity capture (III) | ||
| Planetary ball mill, PM 100 | Retsch | 20.540.0001 | For cryomilling (II) |
| Stainless steel milling jar, 50 ml | Retsch | 01.462.0149 | For cryomilling (II) |
| Stainless steel milling balls, 20 mm Ø | Retsch | 05.368.0062 | For cryomilling (II) |
| Lid gasket: PFA encapsulated spring energized seal, 2.62 mm 44.63 mm | www.marcorubber.com | T1044-2.62×44.63 | For cryomilling (II) |
| mini-LN2 decanter | homemade | see Ref 19 | For cryomilling (II) |
| 250 ml PTFE jar insulator (optional) | Retsch | custom order | For cryomilling (II) |
| PTFE puck insulator (optional) | homemade | The Rockefeller University | For cryomilling (II); can be produced by The Rockefeller University High Energy Physics Instrument Shop, or design blueprints provided, upon request. |
| 5 bar/500 KPA pressure relief valve (optional) | http://www.leeimh.com/ | 558 series check valve | For cryomilling (II) |
| 1.5 – 2 ml microfuge tubes | For affinity capture (III) | ||
| Extractant | For affinity capture (III) | ||
| cOmplete EDTA free protease inhibitor cocktail tablets | Roche Applied Science | 11873580001 | For affinity capture (III) |
| Vortex mixer | For affinity capture (III) | ||
| Ice bucket | For affinity capture (III) | ||
| Microtip sonicator, Q700 | Qsonica | Q700 | For affinity capture (III) |
| low intensity 1/16” microtip probe | Qsonica | 4717 | For affinity capture (III) |
| Bench-top refrigerated microcentrifuge | For affinity capture (III) | ||
| Dynabeads M-270 Epoxy | Thermo Fisher | 14302D | For affinity capture (III) |
| Antibody or affinity ligand coupled to Dynabeads | homemade | For affinity capture (III); see reference 19 | |
| Sample rotator | For affinity capture (III) | ||
| Neodymium magnet | Life Technologies | 123-21D | For affinity capture (III) |
| SDS-PAGE sample buffer (no reducing agent) | For affinity capture (III) | ||
| DTT | For affinity capture (III) | ||
| SDS-PAGE system | For affinity capture (III) | ||
| SDS-polyacrylamide gel | For affinity capture (III) | ||
| Protein Stain | For affinity capture (III) |
References
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