We beschrijven een snelle, moleculair-gebaseerde Influenza A en B assay. De Influenza test detecteert elk doel binnen 15 minuten door het gebruik van isotherme amplificatie met influenza-specifieke primers, gevolgd door detectie van targets met moleculaire beacon sondes. De Influenza A en B test is gebruiksvriendelijk en vereist een minimale hands-on tijd om te presteren.
Is een besmettelijke ziekte van de luchtwegen veroorzaakt door influenzavirussen A en B bij mensen en veroorzaakt een aanzienlijke hoeveelheid van morbiditeit en mortaliteit jaarlijks. De Influenza A en B-test was de eerste-CLIA afgezien moleculaire snelle grieptest beschikbaar. Het Influenza A en B test werkt door toepassing van isotherme amplificatie met influenza-specifieke primers gevolgd door target detectie met moleculaire beacon probes. Hier zijn de prestaties van het Influenza A en B assay op bevroren, gearchiveerd nasofaryngeaal uitstrijkje (NPS) specimens opgeslagen viraal transportmedium (VTM) werden vergeleken met een respiratoire panel-assay.
De prestatie van het Influenza A en B test werd geëvalueerd door de resultaten van de luchtwegen referentiepanel methode. De gevoeligheid voor de totale influenzavirus A was 67,5% (95% CI (CI), 56,6-78,5) en de specificiteit was 86,9% (CI, 71,0-100). Voor influenzavirus B-testen, de gevoeligheid en specificiteit was 90,2% (CI, 68,5-100) En 98,8% (CI, 68,5-100), respectievelijk.
Dit heeft het voordeel van een aanzienlijk kortere testtijd dan enige andere momenteel beschikbare moleculaire assay en eenvoudige, pipet-vrije procedure uitgevoerd op een volledig geïntegreerde gesloten, kleine footprint systeem. Kortom, het Influenza A en B assay geëvalueerd in dit onderzoek heeft het potentieel om te dienen als een point-of-care influenza snelle diagnostische test.
Influenzavirusinfecties resulteren in een significante hoeveelheid van morbiditeit en mortaliteit jaarlijks 1, 2, 3. Ongecompliceerde influenza wordt gekenmerkt door constitutionele en respiratoire symptomen zoals koorts, myalgie, hoofdpijn en niet-productieve hoest 4, 5. Oudere mensen, jonge kinderen, immuungecompromitteerde patiënten en patiënten met onderliggende comorbiditeit zijn op een hoger risico op ernstige complicaties zoals longontsteking, myocarditis, het centrale zenuwstelsel en vaatziekten, of de dood 6, 7.
Influenza-infectie is uniek ten opzichte van andere respiratoire virussen in die snelle toediening van antivirale therapie binnen 48 uur van het begin van de symptomen kan de ernst van de ziekte en de lengte 8 te verminderen. Snelle identificatie van influenza is ookaangetoond dat het gebruik van antibiotica onnodige 9, 10 te verminderen. Verder moet in het ziekenhuis opgenomen patiënten met influenza-infecties in geïsoleerde lokalen met passende infectie controle voorzorgsmaatregelen worden geplaatst. Echter, ademhalingsziekten veroorzaakt door niet-influenzavirussen moeilijk klinisch onderscheiden van influenza. Daarom, snelle en nauwkeurige diagnostische testen voor influenza van groot belang voor de klinische behandeling van de patiënt.
Verschillende assays zijn beschikbaar voor de detectie en identificatie van influenzavirussen. Rapid influenza-antigeen opsporingstests (RIDTs) worden veel gebruikt in de klinische praktijk als point-of-care testen, omdat ze zijn eenvoudig te gebruiken en zorgen voor resultaten binnen 15 tot 30 min 11, 12; echter, hun gevoeligheden variëren sterk (10-80%) afhankelijk van de fabrikant en de te testen populatie en het type influenza en subtype 13, 14, 15. Direct fluorescentie assays (DFA) bieden superieure gevoeligheden boven RIDTs, maar de doorlooptijd is groter (~ 3 uur) en moeten worden ingevuld door ervaren technici 16, 17. Viruskweek is de gouden standaard voor influenza diagnostiek en heeft gevoeligheid over zowel RIDTs en DFA 18 verbeterd. Echter, influenza viruskweek overal mee naartoe nemen 2-14 d te voltooien, het teruglopen van het nut ervan in het helpen behandeling van de patiënt 19. Tenslotte hebben nucleïnezuuramplificatie testen (NAAT) kweektechnieken vervangen als de nieuwe gouden standaard in influenza diagnostiek. NAAT worden beschouwd als de grootste gevoeligheid voor het detecteren van influenza in een paar uur te hebben. Echter, NAAT zijn de duurste assays en vereisen gespecialiseerde apparatuur en technologen uit te voeren 5 <sup>, 20, 21, 22, 23, 24, 25.
De influenza A en B-test hier beschreven is de eerste CLIA afgezien moleculaire snelle griep test die beschikbaar is. Deze test werkt door het gebruik van een knikken Endonuclease amplificatiereactie (NEAR) die isotherme amplificatie met influenza-specifieke primers, gevolgd door detectie van targets met moleculaire beacon sondes gebruikt. Deze test onderscheidt influenza A uit B, werkt op 2 minuten op te zetten en te verwerken één monster, en vereist een totaal van 15 minuten in beslag.
Hier presenteren we het protocol voor de Influenza A & B-test. Daarnaast bieden wij een sample dataset vergelijken van de prestaties van het Influenza A en B assay op gearchiveerde nasofaryngeale swab (NPS) specimens opgeslagen in viraal transportmedium (VTM) een ander respiratoir pathogeen panel-assay.
Influenzavirussen significante wereldwijd oorzaken van morbiditeit en mortaliteit. Snelle en nauwkeurige diagnose van influenza is een van de belangrijkste sleutels te beheren griep uitbraken tijdens respiratoire seizoen. Andere antigeen gebaseerde tests zijn snel en eenvoudig uit te voeren; echter zij lage gevoeligheden 13. Anderzijds hebben traditionele moleculaire tests verbeterde gevoeligheid, maar vereisen meer ervaren laboratoriumtechnologen te voeren en duurder. Het Influenza A en B assay …
The authors have nothing to disclose.
We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).
Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
200 µL precision pipette | |||
200 µL disposable pipette tips | |||
Viral transport medium | Remel | M4-RT |