Prostat Kanseri ve Diğer Yaşa bağlı Patolojilerde veya Metabolik Hastalıklarda bir Biyofiziksel Tetik olarak Bazal Membran Rijitliğinin Eğitim Nasıl

GLA Tedavi Bağlı BM Rijitlik 1.İndüksiyon (Non-enzimatik çapraz bağlanması) 4 ° C'de inkübe edilerek BM matrisi (10 mi) içindeki bir dondurulmuş şişesinden çözülme şişenin içeriği haline kadar sıvı (8-16 saat) (soğuk oda ya da buzdolabında buz üzerinde durmaya bırakılmıştır). Dikkat: soğuk oda / buzdolabı kullanılmazsa, buz ile tüm şişe kapağı. Bu katılaşan gelen BM stok solüsyonu önleyecektir. Gelecekteki deneyler için ve tekrarlanan donma çözülme döngüleri önlemek BM matrisin her yeni 10 ml flakon 25 x 0.4 ml hacimde hazırlamak. üretici tarafından belirtilen son kullanma tarihine kadar -80 ° C'de saklayın flakon. Gerektiğinde, 2 saat süreyle buz üzerinde durmaya 4 ° C'de şişe eritin. buz düz bir yüzey hazırlayın. Kaplama işlemi sırasında, 4 ° C bir sıcaklıkta muhafaza etmek için buz üzerine 8 oyuklu oda cam slayt yerleştirin. 4 ° C 'de BM matrisinin bir şişe çözülme. Not: BM matrisinin bir 0.4 ml hacimli ampullere CoA'ya yeterlidirBütün bir 1 x 8-iyi odasının slayt t. katılaşmasını BM matrisi önlemek için taşıma sırasında buzla kaplı şişeyi tutun. makas kullanılarak 200 ul pipet boşaltım ucunu kesti. 4 ° C'ye kadar kör uçlu 200 ul pipet soğutun ve 200 ul kapasitesi pipetleme yardımına onu koyun. pipet içine soğuk BM matris solüsyon 40 ul alın ve soğutulmuş 8-iyi odasının cam slayt bir kuyuya aktarın. Not: BM çözeltisi 40 ul 0.8 cm2 arasında bir yüzey alanı kapsayacak şekilde yeterlidir. BM çözümünün katılaşmasını önlemek için kaplama işlemi sırasında soğutulmuş pipet uçları tutun. BM matris çözüm içine hava kabarcıkları tanıtmak ve iyi eşit kenarlarında görünür menisküs oluşmadan kaplanmıştır garanti etmez. Gerekli kuyu ve odaların sayısına göre adımı tekrarlayın 1.4. Kaplamadan sonra, polimerizasyonun teşvik etmek için 30 dakika boyunca 37 ° C 'de 8 oyuklu odasına slayt yerDM'nin. Sıvı RBM istenmeyen rahatsızlık önlemek için çok dikkatli bir şekilde inkübatör kapağını kapatın. RBM jel dehidratasyonu önlemek için 30 dakika inkübasyon süresi aşmayın. Not: Elde edilen jel ana yeniden BM (RBM) 'dir. 37 ° C inkübasyon adımı% 5 CO2 gerektirmez. Buna karşın rahatlık açısından 37 ° C ve% 5 (nemlendirme) CO2 ayarlanmış bir doku kültürü kuluçka makinesi içinde, bu adımı gerçekleştirmek. 0.2 M fosfat tampon maddesi (pH 7.8) içinde seyreltilmiş 50 mM glikoladehid (GLA) hazırlayın. 50 ml'lik bir şırınga kullanılarak bir 0.22 mikron bir şırınga filtreden geçirilerek çözelti sterilize edin. 50 mM GLA'nın 250 ul nihai hacim içinde bir çapraz bağlama reaksiyonu için 0.5 M sodyum siyanoborohidrid ya da 100 mM GLA (2x stok), 125 | il 0.2 M fosfat tamponu, 100 | il (pH 7,8-2,5 M aminoguanidin 25 ul ). 50 ml'lik bir şırınga kullanılarak bir 0.22 mikron bir şırınga filtreden geçirilerek stok solüsyonları sterilize edin. Dikkat: Davlumbaz çalışırken bir laboratuvar önlüğü, eldiven, faceshield ve solunum giyen sodyum siyanoborohidrit tutun. polimerize RBM jel kapak ve sert RBM jel üretilmesi için bir yarı-sert bir RBM jel ya da 14 saat üretilmesi için, 6 saat boyunca 37 ° C'de inkübe GLA çözeltisi 250 ul ekle. Not: GLA hacmi polimerize RBM jel kapsamalıdır ilave edildi ve buna uygun olarak ayarlanmalıdır. Farklı GLA inkübasyon süreleri kullanıldığında, RBM jelleri (2.4 Adım bakınız) RBM sertlikteki kat artışı belirlemek için analiz edilmelidir. 37 ° C'de 14 saat süre ile, steril fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) 250 ul bir nativ RBM jel kuluçkalanmasıyla bir negatif kontrol hazırlayın. 50 mM sodyum siyanoborohidrür ya da 250 mM aminoguanidin ilavesiyle, çapraz bağlama reaksiyonu esnasında Schiff baz veya Amadori adükt düzenlenmesi oluşumu engellenir İki ilave kontrol hazırlayın. 1 M glisin e hazırlanmasıPBS içinde seyreltilmiş methyl ester (GEE). 50 ml'lik bir şırınga kullanılarak bir 0.22 mikron bir şırınga filtreden geçirilerek çözelti sterilize edin. Belirtilen inkübasyon süresinden sonra, dikkatli bir şekilde çapraz bağlanmış RBM jellerinden GLA çözüm kaldırmak kontrol nativ RBM jeller kontrol RBM jeller ve PBS inhibitörleri içeren GLA çözeltisi. RBM jeller, tüm Gee çözeltisi 250 ul ilave edin ve 1 saat süreyle 37 ° C'de inkübe edin. Not: Bu adım, çapraz bağlama reaksiyonu söndürür. GLA ve GEE tüm izlerini silmek için 500 ul PBS içinde her RBM köpükler 10 kez yıkayın. bunların su kaybını önlemek için PBS 400 ul, 37 ° C'de gece boyunca RBM jeller inkübe edin. YAŞ birikimi, non-enzimatik çapraz ve viskoelastik özellikleri (Adımlar 2,1-2,4) için RBM jeller analiz edin. onların viskoelastik özelliklerinin reometrik analizi için klonlama halkaları RBM jelleri (2.4 Adım) hazırlar. Hücre kültürü için, RBM köpükler 500 ul kültürü ile 2 kez yıkayın benihücrelerin ekim önce dia (adımları 5 ve 6). Jel yüzeye dokunarak pipet olmadan nazikçe yıkar gerçekleştirin. Olmayan Enzimatik çapraz bağlama ve RBM Sertliği 2. Niceleme GLA ile Tedavi fotometrik Analizi GLA-tedavi AGE birikimini ölçmek ve Maillard reaksiyonu boyutunu belirlemek için fotometrik analizi kullanılarak RBM jeller kontrol edin. Adım 1.11 sonra 8-kuyu oda slaytlar RBM jelleri PBS kaldırmak ve 250 ul buz gibi soğuk çift distile su ekleyin. Matris tamamen sıvılaştırılmış sağlamak için 16-24 saat boyunca 4 ° C'de inkübe edin. Not: Bu çözümde RBM peptidler oto-floresan özellikleri çağlar içerir. 1.5 ml tüp sıvılaştırılmış BM çözeltisini ve bir spektrofotometre (eksitasyon dalga boyu = 370 nm; emisyon dalga boyu = 440 nm) kullanılarak çözeltinin floresan emisyon ölçümü. Siyanojen bromür Peptides SDS-PAGE analizi GLA çapraz bağlanma ve makro elyaf oluşumuna sebep olduğunu teyit etmek için bir poliakrilamid jeli üzerinde, GLA ile muamele edilmiş ve kontrol RBM jeller giderin. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 10,000 x g'de Aşama 2.1.1.2 toplanan sıvılaştırılmış BM çözeltisi santrifüjleyin. 2 g / asetonitril içinde seyreltilmiş siyanojen bromid ihtiva eden bir stok çözelti hazırlayın. Dikkat: Bir laboratuvar önlüğü, eldiven, faceshield ve solunum giyerek her zaman davlumbaz siyanojen bromür anlaştım. +% 70 h / h formik asit, 20 mg / ml siyanojen bromür 500 ul süpernatan, yeniden askıya BM jeli pelet çıkarın ve oda sıcaklığında gece boyunca inkübe edilir. 3.5 kDa kesilmiş bir moleküler ağırlığa sahip bir diyaliz kaseti içine yeniden süspansiyon haline BM jeli pelet transfer etmek için 1 ml tek kullanımlık şırınga kullanın. 500 çift damıtılmış su ilave edildi ve manyetik bir karıştırma çubuğu ihtiva eden 500 ml'lik bir cam kabın içine kaseti daldırın.bir manyetik karıştırıcı üzerine bu yerleştirin ve siyanojen bromür ve formik asidin tüm izlerini silmek için (soğuk bir odada) gece boyunca 4 ° C 'de (16 saat) diyaliz. 1.5 ml tüp içine kaset diyaliz BM çözüm aktarmak için 1 ml tek kullanımlık şırınga kullanın. % 12 h / h poliakrilamid jeli 10,11 her dengeleme örnek 25 ul analiz eder. SDS-PAGE takiben, siyanojen bromür-matris peptidler 13 elektroforetik desen görselleştirmek için poliakrilamid jel 12 gümüş boyama yürütmek. Immünoflüoresan mikroskopi analizi GLA immunofluorescent boyama tedavi gerçekleştirmek ve anti-AGE / pentosidin, anti-kollajen IV ve çapraz RBM biriken yaş ve kollajen IV / laminin lif yapısal yeniden düzenlenmeleri görselleştirmek için konfokal mikroskobu ile takip anti-laminin antikorları 13 jelleri ile RBM jeller kontrol eder. Not: Her zaman enti kapsayacak şekilde yeterli hacim kullanımıpipet ile RBM yüzeyine dokunmadan inkubasyon ve yıkama sırasında RBM jel yeniden. Immünofloresan 3D acininin kültürleri analiz ayrıntılar için referans 6 bakınız ve 3D asini konfokal mikroskopi için başvuru 14 bkz. Yıkama GLA PBS + 300 ul, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca (PBS, 0.1 mM CaCl2 ve 0.5 mM MgCI2 ihtiva eden) ile 8-kuyu oda slaytlar 2 kere muamele edilmiş ve kontrol RBM jeller. PBS + sonra her RBM jel karşılamak için PBS + içinde seyreltilmiş h paraformaldehid (PFA) w /% 4 300 ul çıkarın. RBM bileşenleri gidermek için, oda sıcaklığında 30 dakika süreyle inkübe edilir. PFA solüsyonu w / v% 4 çıkarın. 75 mM NH4CI + 0.5 mM MgCl2 çözeltisi 300 ul ilave edin ve tespit sönmesi için (5x tekrar) oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edilir. HPO 4, 3.5 mM NaH 130 mM NaCl, 7 mM Na 2: steril su içinde aşağıdaki çözümü yaparak İmmünofloresan tampon (tampon IF) hazırlayın2 PO 4, 7.7 mM NaN3,% 0.1 w / v sığır serum albümin,% 0.5 h / h polietilen glikol-tert-oktilfenil eter ve% 0.05 hacim / hacim polietilen glikol sorbitan monolaurat. tamamlamak suretiyle tampon engelleme IF hazırlayın IF% 20 v / v keçi serumu ile tampon. söndürme çözüm çıkarın ve RBM jelleri engelleme tampon spesifik olmayan reaksiyonları önlemek için IF 300 ul ekleyin. bir çalkalama platformu üzerinde, oda sıcaklığında 2 saat inkübe edin. IF Bloklama tamponunu çıkarın ve sulandırılmış birincil antikor 300 ul 4 ° C 'de 16 saat boyunca RBM jeller inkübe bloke edici tampon alınırsa (1: 500, fare anti-pentosidin mAb, 1/250 tavşan anti-kolajen IV pAb 1; / 250 tavşan anti-laminin A / C pAb). Not: daha uzun bir süre 20 saat İnkübasyonlar 4 ° C'de RBM sıvılaştırmak için. bir çalkalama platformu üzerinde oda sıcaklığında IF tampon 300 ul ile 3 kez (10 dk), birincil antikor çıkarın ve yıkayın. IF tamponu çıkarın vebloke edici tampon IF 500: 1 seyreltilmiş bir fluorokrom ile konjüge edilmiş sekonder antikor 300 ul (keçi anti-tavşan veya anti-fare IgG: [H + L]) ekleyin. bir çalkalama platformu üzerinde, oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe edin. ikinci antikorları ayıklamak ve oda sıcaklığında 10 dakika süre ile tampona 300 ul inkübe edin. IF tamponunu çıkarın ve oda sıcaklığında PBS + 300 ul 3 x 10 dakika yıkama. (Basamak 2.3.1.2 ve 2.3.1.3), yukarıda tarif edildiği gibi, saptamak ve ikinci kez gidermek. montaj medya lekeli RBM jeller monte edin ve Epifluorescent veya konfokal mikroskopi kullanılarak ana bileşenleri yoğun demetleri oluşumunu analiz. Not: Immünofloresan 3D acininin kültürleri analiz ayrıntıları referansı 6 görmek ve 3D asini epifluorescent ve konfokal mikroskopi için başvuru 14 için bkz. Reolojik analiz GLA'nın reometrik analizine muamele gerçekleştirmek ve v ölçmek için RBM jeller kontroliscoelasticity (sertlik). 8 mm çapında dairesel bir kalıp içinde 1 mm kalınlığında olan RBM jeller ayarlayın. Bunu yapmak için, 24-çukurlu kültür plakasının bir kuyu içine bir klonlama halkası (8 mm çapında) yerleştirin ve BM Adımlar 1.3-1.6 de tarif edildiği gibi hazırlanan matris çözeltisi ilave edilir. Not: deneyler için kullanılan RBM jeller doğru tekrarlama için reometrik analiz için hazırlanmıştır RBM jeller 8 oyuklu kabinlerde ayarlanan RBM jeller aynı yüzey alanına ve kalınlığı olmalıdır. Şekil 3'te analiz RBM jeller 1 mm kalınlığında ve 8 mm çapında idi. (Basamak 1.11 1.8) yukarıda tarif edildiği gibi 14 saat boyunca 6 saat boyunca PBS, GLA ve GLA ile klonlama halkaları kurulmuş RBM jeller tedavi edin. Sabit bir frekans 1Hz Osilasyon ve 21 ° C'lik bir sıcaklıkta,% 1-3 soyun bir dizi içinde, paralel levha geometrisini tırtıklı bir 8 mm olan bir reometre 8 mm çapında RBM jeller elastikiyet modülüne (E) ölçün. hakkında ek ayrıntılar içinECM jellerin reometrik analiz referansları referans 13,15,16 bkz. Not: E ', aşağıdaki denklem e = 2 * kullanımı yoluyla G oluşan kesilme depolama modülü (G') belirlenir * (1 + V) referans 13,15 tarif edildiği gibi V, 0.5 Poisson oranıdır 16. 3. Kültür ve Normal PEC hattının taşınması, RWPE-1 Büyüme RWPE-1 5 ng / ml, epidermal büyüme faktörü (EGF) ile desteklenmiş keratinosit serumsuz ortamdaki hücreler (KSFM), 50 ug / ml büyükbaş hayvan hipofız bezi ekstraktı (BPB) ve 50 | ig / ml streptomisin, 50 U / ml penisilin ( ) KSFM tamamlayın. Not: epitelial-To-mezenşimal uyarılmasını önlemek için (EMT) -benzeri geçiş serum RWPE-1 hücreleri maruz değildir. Tam KSFM 4 ° C'de depolama çıkardıktan sonra, 30 dakika boyunca oda sıcaklığına ulaşması ve EGF ve BPE inaktive gibi bir 37 ° C su banyosu içinde, sıcak yok izin verin. tam aspireRWPE-1 hücrelerinin konfluent 10 cm2 tabaktan KSFM, önceden ısıtılmış PBS, 5 ml ile yıkayın ve hücreler çözeltisi ile kaplanmıştır sağlamak 5 mi% 0.05 h / h tripsin ekleyin. 5 ila 10 dakika için 37 ° C ve% 5 CO2 (nemlendirme) standart koşullar ayarlanmış bir doku kültürü kuluçka makinesi içinde hücreleri yerleştirin. 5 dakika sonra trypsinization ölçüde kontrol edin ve yavaşça hücreleri ayırmak için kültür plaka dokunun. Not: aynı anda birden fazla iki plaka kolu için tavsiye edilir, böylece RWPE-1 hücreleri, tripsinizasyon ve uzun süre hoş değildir. Klonal seçimi önlemek için plaka tüm hücreleri ayırmak için de önemlidir. Tüm RWPE-1 hücreleri, ilişkisiz sonra, tripsin gidermek için% 2 hac / hac cenin dana serumu (FCS) ihtiva eden sıcak bir 5 ml PBS ilave edin. Yavaşça bir santrifüj tüpüne hücreleri aktarmadan önce hücre agrega kırmak için aşağı yukarı pipet ve. x 125-150 de kopuk hücreleri Santrifüj25 ° C'de 5 dakika boyunca süpernatanı atmak ve tek hücrelerden oluşan bir süspansiyon elde edilene kadar tam KSFM 5 ml hücre pelet yeniden askıya. Aktarım 1 yeni bir tüpe yeniden süspansiyon hücreleri mi ve 1 hücreleri yaymak için tam KSFM 9 ml ekleyin: takip eden deney kullanım için 5 kanalı seyreltme. asinüsü kurmak için bir hemasitometre kullanarak hücrelerin geri kalanını sayın (Bölüm 5.1). Not: Kültür sonra uzun süreli beri 10'dan fazla pasajlar için yapmayın kültür RWPE-1 hücreleri Doğru mimarisi ile asinüsü oluşturmazlar. kültür Ortam EGF ve BPE aktif kalmasını sağlamak için her 48 saat değiştirin. Not: 48 saat ötesine herhangi tedaviler için bu orta değişikliği ekleyin. 4. Kültür ve BPH Hücre Hattı Taşıma, BPH-1 RPMI kültür BPH-1 hücreleri, 1640 ortamında 50 U / ml penisilin ve 50 | ig / ml streptomisin,% 5 v / v FCS ile tamamlanmaktadır. Isınmakültür ortamı, PBS ve% 0.25 w / v kullanımdan önce 37 ° C tripsin 0.53 M EDTA çözeltisi. Not: hücreler,% 2.5 v / v FCS 8 ortam içinde kültive edilebilir. BPH-1 hücrelerinin konfluent 10 cm2 tabaktan kültür ortamı aspire ve tripsin reaksiyonu söndürmek olabilir serumlu kültür ortamı tüm izlerini çıkarmak için PBS 3 ml hücreleri 2 x yıkayın. PBS aspire ve hücreleri kapsayan tripsin-EDTA çözeltisi 3 ml. 5 dakika için 37 ° C ve (nemlendirme)% 5 CO2 ayarlanmış bir kuluçka makinesi içinde plaka koyun. Hücreler yuvarlak ama çanak bağlı kalır zaman tripsin-EDTA çözüm çıkarın. 5 ml PBS ile hücreleri yıkanır. PBS uzaklaştırıldıktan sonra, tek bir hücre süspansiyonu üretmek için aşağı kültür ortamı 5 ml ilave edilir ve yavaşça yukarı pipet ve. 15 ml'lik bir tüpe hücreleri aktarın. tam ortam 8 ml ile yeni bir santrifüj tüpüne hücre süspansiyonu 2 ml alın ve BPH-1 hücreleri plaka ontsonraki deneysel kullanım için 5 pasaj seyreltme: 1 at oa 10 cm 2 kültür plakası. asinüsü kurmak için bir hemasitometre kullanarak hücrelerin geri kalanını sayın (Bölüm 5.2). Not: Uygun bir mimari ile asinüsü oluşturmayan eski BPH-1 hücreleri gibi, geçit sayısının kaydını tutun. Bir geçit sayısı 10'dan fazla arzu edilmez. kültür Ortam her 72 saat değiştirin. Yerli ve Sert RBM üzerinde Prostat Bezi asini 5. 3D Kültürü RWPE-1 hücreleri, asinüsü oluşturan komple KSFM 300 ul içinde aşama 3,5 hazırlanan 5000 hücreleri seyreltilmesi için kullanılıyorsa dengeleme çözeltisi,% 2 h / h ile takviye edilmiştir. BPH-1 hücreleri, asinüsü oluşturan dengeleme çözeltisi,% 2 h / h ile desteklenmiş RPMI 1640 kültür ortamı 300 ul adım 4.5 hazırlanan 2500 hücreleri seyreltilmesi için kullanılıyorsa. Not: BPH-1 hücreleri cul 6 gün sonra asinüs benzer bir dağıtım elde etmek için kullanılır BPH-1 hücrelerinin, böylece daha düşük sayıda RWPE-1 hücreleri daha büyükTure. Yavaşça 37 ° C ve% 5 CO 2 set bir kuluçka kültürlerin yer dikkatle yerli ve AGE-kasıldı RBM üzerine hücreleri tohum ve (nemlendirme) ile kuyudaki ve her hücrenin bölünmesinden büyüyen asini eşit dağılımını sağlamak için bir acina üretmek. Her 2 günde bir hücreleri büyüme faktörleri, normal acina için gerekli olmasını sağlamak için,% 2 h / h BM çözeltisi içeren taze kültür ortamı ile kültür ortamı yerine homeostasis. Aydınlık mikroskopi 13 ile büyüyen kültürlerde asiner morfolojisi izleyin. Not: kültür 3 gün sonra tek tek hücreler> 3 hücrelerinin bir küme oluşturacak ve • bir çapı olan 1 hafta prostat bezi asinüs sonra 50 um gözlemlenecektir. Hücre-matris adezyonlar, hücre-hücre adezyon, apico-bazal polarite ve invaziv 13 markerler için spesifik antikorlar kullanılarak immünofloresans gerçekleştirmek için 2.3 tanımlanan protokol takip edin. <li> 5 dakika boyunca DAPI ile inkübe edilerek, hücre çekirdekleri leke ve PBS + 2 x 5 dakika yıkama 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) ile bir montaj ortamı kullanılması veya (2.3.12) sonra ilave bir adım içermektedir. Yerli ve Sert RBM 6. 3D Kültür Prostat Tümör Hücre Büyüklükleri 50 ug / ml streptomisin,% 10 v / v FCS ve 50 U / ml penisilin içeren RPMI 1640 ortamı içinde kültür PC3 hücreleri. kullanımdan önce, 37 ° C'de kültür ortamı, PBS ve% 0.25 w / v tripsin 0.53 M EDTA çözeltisi ısıtın. PC3 hücrelerinin konfluent 10 cm2 kültür kabı kültür ortamı aspire ve hücreler tripsin reaksiyonu söndürmek için FCS tüm izlerini silmek için PBS 3 ml 2x yıkayın. PBS aspire ve hücreleri kapsayan ve 1 dakika boyunca inkübasyona tripsin-EDTA çözeltisi 3 ml. Hücreler yuvarlak olmak, ama dikkatlice tripsin-EDTA çözeltisi aspire PBS 3 ml ile yıkanır, çanak bağlı kaldığındaTripsin tüm izlerini silmek. PBS uzaklaştırıldıktan sonra, tek bir hücre süspansiyonu üretmek için aşağı kültür ortamı 5 ml ilave edilir ve yavaşça yukarı pipet ve. 15 ml'lik bir tüpe hücreleri aktarın. Yeni bir santrifüj tüpüne PC3 hücre süspansiyonu 1 ml alın ve kültür ortamı 9 ilave edin. Daha sonra, deneysel kullanım için, 10 cm 2 kültür kabı (1:10 seyreltme) ile, hücreler plaka. Bir hemasitometre kullanarak kalan hücre sayımı. kültür bir gradyan jel oluşumuna imkan vermek için BM çözeltisi,% 2 h / h ile desteklenmiş RPMI 1640 kültür ortamı 300 ul içinde aşama 6.6 hazırlanan 2.500 PC3 hücreleri seyreltilir. Yavaşça yerli ve AGE-kasıldı RBM üzerine hücreleri tohum ve dikkatle kuyuda parçacıklarının büyüyen eşit dağılımını sağlamak için 37 ° C ve (nemlendirme) ile% 5 CO 2 set inkübatör içine kültürü yerleştirin. kültür Ortam her 72 saat değiştirin. sert (YAŞ-zengin) RBM etkisini araştırmak içinprostat tümörü hücre göçü, sıcaklık / CO2 kontrol ve nemlendirilmiş bir odasını 17 kullanılarak aydınlık, video time-lapse mikroskopi kullanılarak görüntü PC3 hücreleri üzerinde. Not: PC3 hücreleri yerli RBM üzerinde ipliklerini yetişen ve bir lümen asinüsü formu yok, ama yerli RBM fazla 72 saat büyümeye bırakılırsa onlar 3D parçacıklarının oluşturacaktır. Veri toplama sonra, elle PC3 hücreleri izlemek ve onların göç hızı, şekli (uzama oranı) ve göç 17-19 sürekliliğini hesaplayın. Not: Sebat = oranı D / T, D = mesafe baştan hücre yörünge, hücre yörünge T = toplam uzunluğunun sonuna kadar.