マウスの骨髄からGM-CSF由来肺胞のようなマクロファージや樹状細胞の生成および同定

いくつかのin vitroでの培養方法は、骨髄由来マクロファージ（BMDMs）と1つの成長因子の組み合わせを使用して、骨髄由来DC（BMDCを）を生成することが記載されています。 BMDMsは、マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF）、またはGM-CSF ^1,2のいずれかを使用して骨髄細胞を培養することによって生成することができます。 BMDCのために、骨髄文化へのFLT3リガンドの添加は、培養^3,4で9日後（ ^高およびCD11c ^見よ 、それぞれB220 ⁺ CD11cの^高い / MHCII）非接着古典と形質DCに上昇を与えます。対照的に、GM-CSFと培養7〜10日後に生成された、非接着細胞単独^{5,6-、GM-CSF}およびIL-4 ^7、またはGM-CSFおよびFLT3リガンド^8,9より密接炎症性DCを似たBMDCを生成（ ^高いのCD11c、MHCII ^高のCD11b ^+）10。これらのインビトロ培養は、マクロファージを生成するために使用されている間に各培養物は純粋な集団を生じさせる場合DCは、それは不明です。例えば、GM-CSF培養中の接着細胞は、それらが均質であり、任意の観察された変動がある推定でマクロファージ^5、DCを^6,11-13として使用されるのと同じ培養物からの非付着細胞であることが記載されているものの開発^14,15の異なる段階に起因します。さらに、研究は、 インビボ ^16,17 における肺胞マクロファージの発達のために必須の増殖因子であるGM-CSFを発見し、そして肺胞マクロファージ様^16,17,18を生成するためにインビトロで使用することができます。

付着以外は、GM-CSF処理した骨髄培養物からのマクロファージ及び樹状細胞を生成するための手順は、GM-CSFの骨髄培養物内に存在し得る不均質性を示唆している非常に類似しています。これは、実際に2つの論文は、BMDC培養物の非付着画分におけるBMDMsの存在を報告としてケースのように思われます。 1論文で、彼らはidentifi最も密接に肺胞マクロファージに似ていたし、T細胞^19を活性化する能力が低下していた遺伝子発現特性を発現したCD11c ^+、のCD11b ^{+、MHCII 半ば} 、MERTK ^+、およびCD115 ^+、などの細胞の集団を編。未熟（たCD11c ^{+、MHCII 半ば} 、 ^低 FL-HA）および成熟異なっていた肺胞マクロファージ様人口を識別するために、MHCIIとFL-HAを使用する第二の紙（たCD11c ^{+、 ミッド/ロー} MHCII、FL-HA ^高 ）樹状細胞（のCD11cの^{+、 高} MHCII）、両方の表現型および機能的に^18。これらの論文は、GM-CSF BMDC培養が不均一であることを示してBMDC培養物からのデータを解釈する際には注意すべきであることを示すマクロファージおよびDC集団の両方を含む両方。

このプロトコルは、骨髄、GM-CSFでの培養骨髄細胞を分離し、肺胞マクロファージ様を識別する方法について説明します結合およびMHCII発現FL-HAを使用して、フローサイトメトリーによる骨髄培養における未成熟および成熟DCから人口。 。この手順は^、6ルッツらの確立された手順に基づいており、5生成することができるされている- 10ミリリットルの培養7日目に10×10 ⁶非接着細胞を。文化は日から7〜10に使用可能であり、7日目これが成長し、大量にインビトロ肺胞のようなマクロファージを単離するための簡単な方法を提供するでマクロファージ、未成熟および成熟DC、だけでなく、いくつかの前駆細胞の不均一な集団を生成します。