マウスの小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

小腸の主なタスクは、しばしば、栄養素¹の消化吸収であると考えられます。この代謝機能が明らかに必須であるが、小腸内腔²内に見られる環境抗原の継続的な弾幕からホストを保護するのに等しく重要な役割を担っています。腸管外の世界を分離する（ 例えば 、管腔抗原）のみの単一細胞層の厚さである上皮層を持つホストの内部環境から。このように、小腸免疫系は、病原体の侵入に対して強固な応答を実装しながら、食事や共生微生物からの外来抗原があれば、最小限の、免疫応答と粘膜を入力することができ、反応性についてそのしきい値をバランスの手ごわい課題を有しており、その他の「有害な」抗原。これらの抗原に対する過剰または不適切な免疫応答は、病理学的疾患（ 例えば 、inflammaにつながることができます保守党腸疾患、I型糖尿病、多発性硬化症）と^3-6を避けなければなりません。

全体的に、消化管は、すべて抗体分泌細胞⁷ 70％以上含有し、体内で最大の免疫器官を表すと考えられています。粘膜固有層（LP）、上皮内層、およびパイエル板（PPS） – -小腸免疫系は、主に3つの区画で構成され、それぞれが、リンパ球²の独特のグループが含まれていること。 LPリンパ球（LPLs）は、主〜20％のB細胞と^TCRαβ+ T細胞です。上皮内リンパ球（IELs）は^TCRαβ+ T細胞よりも^TCRγδ+ T細胞と非常に少数のB細胞が含まれています。そして小腸壁に埋め込まれた二次リンパ器官であるPPSは、〜80％のB細胞を含みます。これらの解剖学的領域のそれぞれはわずかに異なる機能と存在論的基盤を有しているが、彼らはああで機能します病原性の侮辱からホストを保護するためにファッションをarmonized。

さらに、微生物は、特定の微生物および特定の細胞系譜^8,9の個体発生の間の同族関係の増加の認識で、腸管免疫系の開発のための重要な決定因子であることが成長の感謝があります。また、腸管免疫系の教育は、解剖学的に離れた部位（ 例えば 、関節炎、多発性硬化症、肺炎）で免疫応答に影響を与えることを考えると、それは以前に^10を認識よりも、腸の免疫システムの開発は、より疾患プロセスに関連していることが明らかになってきました^-12。同様にそのようなものとして、定量的に腸管免疫系を評価する上での関心は今ホスト共生相互作用を含むように宿主 – 病原体相互作用を超えて拡張しており、多くの全身性疾患の病因。

で現在の方法の変動性を考えます腸管リンパ球の分離、必要な時間のバランスを取ることはますます重要である一方で、収率、生存性、および一貫性のために最適化された方法。パーコール勾配が可変収量と生存率を¹³につながる、時間と労働集約的でヒューマンエラーへの潜在的になりやすいです伴うプロトコル。ここで、我々はすべての3小腸免疫コンパートメントからのリンパ球の単離および特徴付けのために最適化されたプロトコルを提供します。さらに、粘膜免疫系における微生物誘発性の変化関心の高まりを考えると、我々はこれらの変化を定量的に腸管免疫系にどのように影響するかを評価するためのマウスとの間の微生物の水平方向の伝送を可能にするために使用することができるステップが含まれます。