Acoustofluidicデバイスは、操作に集中懸濁マイクロ・ナノスケールのエンティティを分離するためにマイクロ流体チャネル内に超音波を使用します。このプロトコルは、シース流体の助けを借りずに中央流線中の粒子を集中するバルク音響定在波をサポートするようなデバイスの製造および動作について説明します。
Acoustophoresisは、音響エネルギーの方向の力に応答して、懸濁したオブジェクトの変位を意味します。典型的に横切るマイクロメートルの数十〜数百である懸濁オブジェクトは音の入射波長および流体チャネルの幅よりも小さくなければならないことを考えると、acoustofluidicデバイスは、典型的には、メガヘルツの範囲内で高い周波数で脈動する圧電変換器から発生する超音波を(使用します)。デバイスの幾何学的形状に依存する特性周波数では、バルク流内の所望の流体の流線に沿って粒子を集中することができる定在波の形成を誘導することが可能です。ここでは、一般的な材料とクリーンルーム機器からacoustophoreticデバイスの製造方法が記載されています。私たちは、定在波の圧力ノードや腹に向かって移動する正または負の音響コントラスト因子を有する粒子の集束のための代表的な結果を示し、respectivエリー。これらのデバイスは、正確サイトメトリーから組み立てまでのアプリケーションのための静止または流動する液体中の微視的なエンティティ( 例えば 、細胞)を大量に位置決めするための巨大な実用性を提供します。
Acoustofluidicデバイスは、静止流体または層状flowstreams内のそれらの濃度、アライメント、アセンブリ、閉じ込めまたは分離するための顕微鏡実体( 例えば 、粒子または細胞)に指向性の力を発揮するために使用されている。1デバイスのこの広範なクラスの中で、力がバルクから生成することができます音響定在波、音響定在波(ららぽーとスキードームSSAWS)2または音響進行波を表面。3我々はバルク音響定在波をサポートするデバイスの製造および操作に焦点を当てながら、ららぽーとスキードームSSAWSをサポートするデバイスが原因で正確に細胞を操作する能力に最近多くの注目を集めています表面に沿って4と急速には、連続流路内のセルを並べ替える。5デバイスのバルク音響定在波が、しかし、マイクロ流体中で定在波を励振する圧電変換器によって生成されたデバイスの壁の機械的振動に基づいて粒子を再配置支援します幾何学的に定義された共振周波数において空洞。これはSSAW装置と比較してより高い圧力振幅を生成するための可能性を可能にし、微小エンティティのため、高速acoustophoretic輸送6
これらの定在波は、圧力が時間的に振動するような位置に固定されている圧力ノードと腹の空間的に周期的なセットで構成されています。粒子は流体に比べて粒子の機械的特性に応じて、圧力ノードや腹に移行することにより、定在波に対応し、これは、音響コントラスト因子によって説明されています。
変数ρおよびβは、密度と圧縮率と添字pを表し、ƒそれぞれ、中断したオブジェクト( 例えば 、粒子または細胞)および流体を表します。正の音響コントラスト因子を保有する7事業体( すなわち 、ɸ> 0)の圧力ノード(複数可)に移行します。 7。負の音響コントラスト因子を保有する事業体( すなわち 、ɸ<0)の圧力腹に移行し、一方、合成材料( 例えば 、ポリスチレンビーズ)および細胞の大部分が正の音響コントラスト、シリコーン系から製造されたエラストマー粒子を示すが材料は、8脂肪分子9または他の高弾性成分は、水中で負の音響コントラストを示します。 acoustofluidic装置におけるエラストマー粒子は、小分子10と差別選別のために合成粒子11またはセル12を制限する手段としてを単離することができる。13
Acoustofluidicデバイスは、通常のsuに十分な剛性を持っている標準的な材料( 例えば 、シリコンやガラス)から製造されています音響定在波をPPORT。 (本明細書で示されたデバイスを含む)多くのacoustofluidicデバイスにおいて、機械的な波は、マイクロチャネルの幅にわたる半波長の定在波から構成され、最も低い高調波モードで共振するように設計されています。この構成は、チャネルの周囲に沿ってチャネルと圧力腹の中央に圧力ノードを持っています。これらのシステムは、チップベースのサイトメトリーのアプリケーション14-16、細胞の捕獲からの細胞の濃度の範囲の用途に使用することができることが以前に示されている。17,18
私たちは、製造、使用のための方法およびバルク音響定在波をサポートacoustofluidicデバイスの代表的なパフォーマンス能力のプロセスを説明します。このデバイスは、1つのフォトリソグラフィ工程、1エッチング工程と恒久的にエッチングされたシリコン基板にガラス "ふた"を結合する1溶融工程を必要とします。我々は、他のacoustofluidiに注意してくださいバルク音響定在波をサポートするCデバイスは、他の場所に記載されている圧電変換器に結合されたガラス又は石英キャピラリーから作製することができる。19,20シリコンベースのデバイスは一緒にを可能にする流路幾何学上のロバスト性と制御の利点を提供します粒子と細胞の懸濁液を含む試料の処理の多くのタイプ。デバイスは、再利用可能な(バッファや洗剤でデバイスをフラッシュすることによって、 すなわち )彼らは正しく使用の間に洗浄されて提供されています。
Acoustophoresisは、流体力学的フォーカシングのアプローチで使用されるシース流体を必要とせずに正確に流体マイクロチャネル内の微視的な実体を配置する簡単かつ迅速なアプローチを提供しています。24これらのデバイスは、粒子または細胞操作の他の方法に比べていくつかの利点を提供する( 例えば 、磁気泳動、25,26誘電泳動27又は高い磁化率、電気分極又は狭いサイズ分散せずに、エンティティを処理する能力)28を強制的に慣性。また、音響定在波の焦点ノードがアーンショーの定理に従って静磁界や電界によっては不可能である何かである励起源から遠くに配置することができます。29追加の利点は、音響機器は全体の粒子を集中することができるということです適用される流量および装置の股関節では不可能であり、流れ方向の独立した広範囲のtが28を効率的に 、このようなフローサイトメトリーや粒子サイズなどのアプリケーションのために強化された異物検査用の粒子または細胞を輸送する手段を提供し、集束するため慣性力に依存している。30,31デバイス製造及び操作の容易さを直接類似の実装を可能にすることができますフォーカシング、分別を集中し、流体中に懸濁したオブジェクトをソートするための装置。32
我々は、音響定在波によって生成される最も強い力である一次放射力、1を 10ml /単一オリフィスの設計のための時間を超える流量でマイクロ流体チャネルを流れる微粒子を集中することができることを示しています。 100μL/ minの固定流速のために、我々は我々のデバイスが狭い流線に粒子を集中することができることを示している( すなわち 、50μmの全体の)20 Vピーク・ツー・ピークの低 電圧での任意のシース流体なしで、低を可能にします千万パルティのフォーカシングバッチ式のため-power方法クル/分の例として、高密度に濃縮された溶液( 例えば 、6×10 8粒子/ ml)を、処理するとき。さらに、このスループットは劇的に平行なノードのセットを生成するように高調波を用いて作動されるマルチオリフィスacoustofluidicチップまたはチャネルを作製することによって増加させることができる。33
デバイスは、従来の微細加工に使用される材料および方法を必要とし、我々は、同様の装置を構築するために使用することができる他の技術の一握りであることを強調し、本明細書に示されているが、このアプローチの利点は、19,34,35およびその単純さを含みます最終的なデバイスの耐久性。
これらのデバイスの製造に重要なステップはfluorescenによる観察のために透明な「蓋」にシリコンを溶融するためにシリコンと陽極接合にチャネルを形成するために、反応性イオンエッチングをマイクロチャネルの形状を定義するためのフォトリソグラフィを含みますCE顕微鏡。これらの工程の全ては、装置内に埃やゴミの収集を回避するために、クリーンルーム設備を必要とします。これらの手順が完了したら、しかし、PZT変換器と流体ポートとを接合することは比較的簡単であり、クリーンルームの外で実行することができます。
しかし、装置の適切な治療は、その長寿のために不可欠です。これは、(1)各実験後に界面活性剤を用いて残留物の蓄積及び(2)フラッシング装置からチャネルを保護するために、各実験の前に不活性化試薬( 例えば 、ポリ(エチレングリコール)シラン)でデバイスをインキュベート含みます。デブリの蓄積は、音響定在波の忠実度を損なうことができ、効率的に装置内の粒子又は細胞の焦点を合わせる能力を減少させることができます。また、これらのデバイスは、定在波の大きさの半分に近づいてエンティティを含む高多分散サンプルまたはサンプルに適していないことに注意してください。
AcoustofluiDICのデバイスは、分離、細胞およびフローサイトメトリーにコロイドアセンブリから及ぶ様々な用途に多大なユーティリティを提供します。シース流体を分配するための余分な試薬は、大きなサンプルボリュームまたは嵩高機器のコストを削減しながら、高流量で精度の生物学的サンプルを処理する能力は、これらのマイクロ流体デバイス増加スループットの能力を可能にすることができます。 acoustofluidicデバイスを作るために必要な製造方法は簡単であり、その動作に必要な手順は、ユーザーフレンドリーです。私たちは、これらの手順は、材料科学、バイオテクノロジー、医療全体のアプリケーションのための研究の新たな分野を触媒するために同様のデバイスの広範な開発を奨励願っています。
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the National Science Foundation (through grants DMR-1121107, CMMI-1363483 and Graduate Research Fellowships (GRF-1106401) to C.W.S., D.F.C. and K.A.O.) and the National Institutes of Health (R21GM111584). The authors have no conflicts of interest.
Silicon wafers | Addison Engineering, Inc. | 3P1 | 6” mechanical grade silicon wafer <111> |
AZ® 9260 photoresist | MicroChemicals GmbH | AZ9260-Q | Positive photoresist |
AZ® 400K developer | MicroChemicals GmbH | AZ400K CONC-CS | Dilute 1 part AZ 400k in 4 parts deionized H2O |
H2O2 | Sigma Aldrich, Co. | 216763 | 30 wt.% in H2O |
H2SO4 | Sigma Aldrich, Co. | 320501 | ACS reagent, 95.0-98.0% |
1165 Photoresist Remover | Dow Chemical, Co. | DEM-10018073 | 1-methyl-2-pyrrolidinone based |
Acetone | Sigma Aldrich, Co. | 320110 | ACS reagent, ≥99.5% |
Isopropyl alcohol | Sigma Aldrich, Co. | W292907 | ≥99.7%, FCC, FG |
Methanol | Sigma Aldrich, Co. | 322415 | Anhydrous, 99.8% |
Borosilicate glass (Nexterion glass B) | Schott AG | 2098576 | Size: 120×60 ±0.1 mm, Thickness: 1 ±0.005 mm |
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Thickness: 1 | |||
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Drill bit for glass and ceramic | McMaster-Carr, Inc. | 2954A1 | Drill bit size: 1/8” Overall length: 2 3/16” Shank diameter: 7/64” |
Overall length: 2 3/16” | |||
Shank diameter: 7/64” | |||
Polydimethylsiloxane (PDMS) kit | Sigma Aldrich, Co. | 761036 | Dow Corning, Co.; Sylgard 184®; 10 g clip-pack |
Biopsy punch | Ted Pella, Inc. | 15078 | Harris uni-core Tip ID: 3.0 mm Tip OD: 3.40 mm |
Tip ID: 3.0 mm | |||
Tip OD: 3.40 mm | |||
Lead zirconate titanate (PZT) transducer | APC International, Ltd. | Custom order, (841 WFB) | Length: 30.0 mm, Width: 5.0mm, Freq.: 2.46 MHz, 2.0 mm end wrap for leads |
(841 WFB) | Width: 5.0mm | ||
Freq.: 2.46 MHz | |||
2.0 mm end wrap for leads | |||
Silicone tubing | Cole Parmer Instrument, Co. | 07625-22 | 0.6 mm I.D. |
Polystyrene beads | Thermo Fischer Scientific, Inc. | F-8836 | 10 µm yellow-green fluorescence |