Селективный Заготовка Marginating-легочными Лейкоциты

Лейкоциты , прилипшие к капиллярам легких (т.е. marginating-легочная (МП) лейкоциты) ¹ было показано, проявляют отчетливую состав лейкоцитов и уникальной активностью по сравнению с лейкоцитами из других иммунных отсеков (например, циркуляционной, селезенку, костный мозг) ^{2- 4.} Например, МР-лейкоциты проявляют более высокую природные клетки-киллеры (NK) клетки, цитотоксичность в отношении различных опухолевых клеток, по сравнению с циркулирующими и селезеночной NK-клеток, а также дифференцированы информационной РНК (мРНК уровней) и повышенной секрецией про- и противовоспалительных цитокинов. Состав клеток также отличается от циркулирующих лейкоцитов, как MP-лейкоциты имеют более высокое отношение врожденной / адаптивного иммунитета по сравнению с циркулирующими лейкоцитами (50% против 30%, соответственно). Цель метода, изложенного в настоящем документе, для того, чтобы селективного сбора урожая МП-лейкоциты, чтобы изучить эту важную и уникальную иммунную отделение (популяцией клеток) и elucIDATE влияние различных манипуляций (например, активация иммунной системы ) на этих специфических клеток.

Для того, чтобы понять значение этого уникального населения, важно отметить , что иммунная система может контролировать циркулирующих опухолевых клеток, микрометастазов и остаточной болезни с помощью функций в естественных условиях клеточного иммунитета (CMI). Эта способность проявляется , несмотря на провал прецедент иммунной системы для контроля первичной опухоли, и поддерживается в естественных условиях достаточно доказательств , у онкологических больных и животных моделях ^5. Важно отметить, что эти результаты часто несовместимы с ин витро и исследований исключая виво, которые сообщают о том , что большинство аутогенные опухолевые клетки устойчивы к цитотоксичности путем циркулирующих лейкоцитов в образцах крови от человека и животных (измеряется цитотоксичность) ^6,7. Это несоответствие может быть связано с наличием в естественных условиях различных популяций лейкоцитов, таких как AFOREМП вышеупомянутый лейкоцитарной населения, и в частности , ее субпопуляции активированных клеток NK ^3. Действительно, сингенных опухолевые клетки (MADB106), которые были найдены , чтобы быть устойчивым к циркулирующим и селезеночной лейкоцитах, было показано , что лизировать клетками МП-NK ^3,8. Таким образом, как утверждается, «NK-устойчивые" MADB106 клетки, которые метастазируют в легкие fischer344 (F344) крыс контролируются клетками MP-NK, но не за счет циркуляции или селезеночных клеток NK, которые обычно изучали с учетом их легкость доступа.

Очищенные и активные MP-лейкоциты недоступны через стандартные методы уборки лейкоцитов из легких, которые основаны на измельчении легочной ткани или биологической деградации ^9. Наш подход имеет два основных преимущества по сравнению с подходами к обработке тканей. Во-первых, перфузия подход выборочно собирает MP-лейкоциты, отделяя их от других клеток, которые происходят из паренхимы легких, интерстициальная и бронхо-альвеолярной COMPARtments. Во-вторых, метод перфузии лучше сохраняет целостность и физиологическую среду МП-лейкоциты, в отличие от измельчения и биологической обработки подходов, которые повреждают клетки, изменяют их морфологию, и индуцируют выработку и выделение различных факторов, которые модулируют иммунную активность и, в частности подавляют NK цитотоксичность ^10.

Легкие являются основным органом-мишенью для метастазирования рака и различных инфекционных заболеваний. Все циркулирующие злокачественные клетки и инфицированные клетки проходят через капилляры легких, где они должны деформироваться и взаимодействовать с капиллярных эндотелиальных клеток и лейкоцитов резидентов. В этих условиях, циркулирующие клетки могут быть легко мишенью резидентных MP-лейкоцитах. Таким образом, представляется биологически выгодно иметь активированные лейкоциты в этом иммунном отсеке, и важно, чтобы изучить этот уникальный MP-население в различных биологических, экспериментальных и клинических условиях. Стоит отметить, что SYstemic активация иммунной системы с помощью различных биологических-реакция модификаторов (например, полиинозиновая-полицитидиловая кислоты (поли I: С) или С-типа CpG олигодезоксинуклеотиды (CPG-С ODN)) было показано , чтобы активировать MP-лейкоциты более циркулирующих лейкоцитах ^{3, 8,11.}