Une méthode rapide et efficace pour la purification des cellules endoderme Généré à partir d'embryons humains Cellules souches

Les cellules souches pluripotentes telles que des cellules souches embryonnaires (CSE) ont la capacité de se différencier en pratiquement tout type de corps humain de la cellule. Ainsi, les protocoles de différenciation in vitro peuvent être utilisés pour produire de nombreux types cellulaires adultes , tels que des cardiomyocytes ^{1, 2,} hépatocytes cellules bêta ^{3, 4} épithéliale pulmonaire ou des cellules neuronales ^5. Cela rend CES un outil précieux pour le traitement potentiel de diverses maladies dégénératives ^3.

La différenciation in vitro des CES vers les tissus adultes du poumon, du foie et du pancréas nécessite une pseudo-gastrulation dans des cellules qui rappellent l'endoderme définitif (DE) ^6. Etant donné que la différenciation en aval vers les types de cellules somatiques ci – dessus est nettement moins efficace, une différenciation endoderme optimale est considérée comme limitant la vitesse ^7. Les cellules qui se sont engagés envers la lignée endoderme subissent chachangements racteristic dans leur profil d'expression génique. Gènes régulateurs maîtres pluripotent sont régulés à la baisse, tandis que l'expression d'autres facteurs de transcription tels que FOXA2, Sox17, HNF1B, les membres de la famille GATA et le récepteur de surface de CXCR4 est fortement régulée à la hausse ^{6, 8, 9.} CXCR4 est connu pour être transactivé par SMAD2 / 3, en aval de la signalisation Nodal / TGF-β et Sox17 due à des sites de liaison spécifiques dans la région promotrice ^10. Il est donc un marqueur très approprié utilisé dans un certain nombre de rapports ^{6, 8, 11-13.} Ces changements d'expression reflète un événement pseudo-gastrulation, dans lequel les CES acquièrent première caractéristiques d'une population de cellules de série comme primitive et engagent ensuite dans la couche de germe de endoderme ^6.

Cependant, les protocoles de différenciation sont rarement efficaces à 100% en quelques cellules peuvent résister au processus de différenciation ou de se différencier vers d' autres lignées ¹⁴ non souhaitées. Ces cellules peuvent Influe négativementnce autre différenciation. En outre, des cellules indifférenciées résiduelles abritent de grands risques pour les expériences de transplantation ultérieures et peuvent donner lieu à des tératomes ^15-17.

Pour supprimer ces cellules indésirables précoce sur le marqueur CXCR4 de surface peut être utilisé pour la purification de cellules qui se sont engagés vers le DE ^18. Ici, nous décrivons une méthode pour la sélection positive des cellules CXCR4 + provenant de Cultures de différenciation. Pour cela, le marqueur de surface de CXCR4 est liée par un anticorps qui se lie à son tour à des microbilles magnétiques. Contrairement aux conditions sévères au cours de tri FACS, les cellules telles que le document DE-magnétiquement marquées peuvent ensuite être facilement purifiées dans un format de paillasse en utilisant un procédé de purification délicat. Ce protocole fournit une méthode simple pour l'élimination des populations de cellules qui a résisté au processus de différenciation DE.