التعرض لteratogens قد يسبب تشوهات خلقية. الزرد مفيدة لتحديد إمكانية ماسخة للمواد الكيميائية. ونحن لشرح فائدة الزرد عن طريق تعريض الأجنة إلى مستويات مختلفة من النتريت وأيضا في أوقات مختلفة من التعرض. وتبين لنا أن النتريت يمكن أن تكون سامة وتسبب تشوهات تنموية حادة.
مستويات عالية من النيترات في البيئة يمكن أن يؤدي إلى عيوب خلقية أو حالات الإجهاض في البشر. ويفترض، ويرجع ذلك إلى تحويل النترات إلى نتريت بواسطة القناة الهضمية والبكتيريا اللعابية هذا. ومع ذلك، في دراسات الثدييات الأخرى، ومستويات عالية النتريت لا تسبب تشوهات خلقية، على الرغم من أنها يمكن أن تؤدي إلى نتائج الإنجابية الفقيرة. وهكذا، فإن إمكانية ماسخة من النتريت ليست واضحة. وسيكون من المفيد أن يكون هناك نظام نموذج الفقاريات لتقييم بسهولة تأثيرات ماسخة من النتريت أو أي مادة كيميائية أخرى ذات اهتمام. هنا، ونحن لشرح فائدة الزرد (دانيو rerio) لفحص المركبات السمية والعيوب الجنينية. يتم تخصيب الأجنة الزرد خارجيا ويكون التطور السريع، مما يجعلها نموذجا جيدا للدراسات ماسخة. وتبين لنا أن زيادة وقت التعرض للنترات يؤثر سلبا البقاء على قيد الحياة. زيادة تركيز النتريت أيضا يؤثر سلبا على البقاء على قيد الحياة، في حين نترات لا. لثا الأجنةر البقاء على قيد الحياة التعرض النتريت، يمكن أن تحدث تشوهات مختلفة، بما في ذلك التامور وصفار ذمة الكيس، والسباحة noninflation المثانة، وتشوه القحفي. وتشير النتائج التي توصلنا إليها الزرد هو نظام ملائم لدراسة إمكانية ماسخة من النتريت. يمكن بسهولة أن تتكيف هذا النهج لاختبار المواد الكيميائية الأخرى لآثارها على التنمية الفقارية المبكرة.
إمساخ هي العملية التي يعطل التطور الطبيعي للجنين أو الجنين عن طريق التسبب في تشوهات دائمة الهيكلية والوظيفية، وتأخر النمو، أو الإجهاض في الحالات الشديدة 1. ويمكن أن تسببها بعض العوامل الطبيعية (teratogens)، التي تتداخل مع التطور الجنيني بطرق متعددة 2. أثناء التطور الجنيني الإنسان، وقد تم الإبلاغ عن teratogens الشائعة مثل الإشعاع، والعوامل المعدية، المعادن السامة، والمواد الكيميائية العضوية أن يسبب تشوهات في طيات فوق المآقي (حظيرة الجلد في الجفن العلوي) وانحراف الأصابع (إصبع المنحني أو أخمص القدمين) من خلال أخطاء التخلق 1.
فهم الآلية الجزيئية من إمساخ هي الخطوة الأولى نحو تطوير العلاج والوقاية. العديد من النماذج الفقاريات مثل أفريقيا عوضت الضفدع (القيطم المورق) والزرد (دانيو rerio) استخدمت لتحديد المسارات الجزيئية تتأثر teratogens. وقد استخدمت الدراسات السابقة الزرد كنموذج لعلم الأوبئة، وعلم السموم وإمساخ 3-7. شولتس وآخرون. تعتبر الزرد بأنه "المعيار الذهبي" لتقييم سمية البيئي. ويرجع ذلك، في جزء منه، إلى الشفافية في الجنين الزرد، الذي يسمح للباحثين لتصور الخلل التنموي كما يحدث 8. ما يقرب من 70٪ من الجينات البشرية لديها orthologues في الزرد، مما يجعل الزرد نموذج الفقاريات مرغوب فيه لدراسة العيوب الإنسان 9.
وقد اقترحت بعض الدراسات الوبائية أن النترات والنتريت والحاضر عادة في الأطعمة الزراعية والمياه، وترتبط مع العيوب الخلقية أو الإجهاض التلقائي 10،11، في حين أن دراسات أخرى لا تدعم هذه الجمعية 12. نترات (NO 3 -) والنتريت (NO 2 -) موجودة بشكل طبيعي في التربة والمياه. وهي مصدر النيتروجين للنباتات وهي جزء من نitrogen دورة 13. الأطعمة مثل الفاصوليا الخضراء والجزر والقرع والسبانخ والبنجر من المزارع التي تستخدم الأسمدة عالية في نترات، زادوا بشكل ملحوظ من مستويات النترات والنتريت 7. الحليب من الأبقار التي تتغذى على الأطعمة عالية من النيترات والسمك في الماء نترات عالية (أساسا من جريان التربة 30) يمكن أن يؤدي إلى البشر تستهلك كميات كبيرة من النترات والنتريت 14. كما تستخدم النترات والنتريت عادة في حفظ الأغذية، مما يزيد بشكل كبير من كمية تناولها من قبل البشر 12.
المستويات المثلى من النترات والنتريت تلعب أدوارا أساسية في العمليات الفسيولوجية مثل التوازن الأوعية الدموية وظيفة، العصبي وآليات دفاع المضيف المناعية 13-15. ومع ذلك، والتعرض لمستويات عالية من النترات والنتريت يمكن أن يؤدي إلى آثار ضارة، خاصة عند الرضع والأطفال 16. نترات بلعها هو أبعد تحويلها إلى نتريت في تجويف الفم من البكتيريا وفي الالبريد الجهاز الهضمي عن طريق الأمعاء الدقيقة 17.
نترات يضع الأطفال عرضة لمخاطر عالية لمتلازمة الطفل الأزرق عن طريق الأكسدة الهيموغلوبين ل methemoglobin، إضعاف الهيموغلوبين من الأكسجين التي تحمل قدرة 18. وهذا يؤدي إلى اللون الأزرق من الجلد الذي يمتد إلى الأنسجة الطرفية في أكثر الحالات الشديدة. الأوكسجين تحول دون نتائج الأنسجة في أعراض أخرى، مما يؤدي أشد إلى الغيبوبة والوفاة 19،20. ولوحظت أعراض مماثلة في الأطفال والبالغين على تركيزات أعلى من نترات 21. مستويات مرتفعة من ميتهيموغلوبين في البالغين بسبب النتائج تسمم النتريت في زرقة، والصداع، واضطرابات التنفس 31، والموت إذا لم يعالج بسبب المضاعفات المتصلة نقص الأكسجة الأنسجة الحيوية 32،33.
نترات تناولها على مستويات أعلى يمكن أن يؤدي إلى مضاعفات صحية مختلفة. مرض السكري في مرحلة الطفولة، والإسهال المتكرر، والتهابات الجهاز التنفسي المتكررةفي الأطفال وقد تم ربط مع ارتفاع النترات تناول 11،17،22. ويرتبط التعرض المزمن لمستوى عال من النترات مع التبول ونزيف الطحال. الحادة التعرض جرعة عالية من النترات يمكن أن يؤدي إلى مجموعة واسعة من الحالات الطبية مثل آلام في البطن، وضعف العضلات، والدم في البراز والبول، والاغماء، والموت 11. وقد ارتبط التعرض قبل الولادة لنترات عند مستويات مرتفعة مع الأنبوب العصبي وخلل العضلات والعظام 11.
وأظهر تقرير صدر مؤخرا إلى أن علاج الأجنة الزرد مع النتريت أدى إلى صفار ذمة SAC، تشوهات الوجه و المحورية، والسباحة المثانة noninflation 5. في هذه الدراسة، ونحن لشرح طريقة لعلاج الأجنة الزرد مع النترات والنتريت لتحديد قدراتهم ماسخة. وتعرض الأجنة إلى نتريت بتركيزات مختلفة وأطوال مختلفة من الزمن. تم استخدام الإيثانول كعنصر تحكم إيجابية، لأنه هو مشوه إنشاء 23. Oأظهر طريقة اور أن كلا من تركيزات عالية ومرات التعرض الطويل لالنتريت كانت وبالا على البقاء على قيد الحياة وأسفرت عن العديد من الظواهر، تتراوح ما بين خفيفة (وذمة) إلى (العيوب التنموية الإجمالية) شديدة. ولذلك، فإن الزرد هو نموذج مفيد لاستكشاف مباشرة آثار ماسخة المحتملة من النترات والنتريت على الأجنة لاستكمال الدراسات الوبائية.
الطريقة الموصوفة هنا يوضح فائدة الزرد في تقييم إمكانية ماسخة من النتريت والنترات. مقارنة الفقاريات الأخرى، الزرد لديها مزايا التي تشمل الخصوبة العالية، والإخصاب الخارجي، والشفافية البصرية، والتطور السريع. المسوخ المتاحة التي تفتقر تصبغ (مثل الزرد كاسبر 36) تس…
The authors have nothing to disclose.
VK was funded by grants from the IUP Department of Biology and School of Graduate Studies and Research (Graduate Student Professional Development). CQD and TWS were supported by the IUP School of Graduate Studies and Research (Faculty Publication Costs/Incidental Research Expenses). We also thank members of the Diep laboratory for maintaining the zebrafish facility.
DREL/2010 instrument | Hach | 26700-03 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
KIMAX glass Petri Dish | VWR | 89001-244 | |
MS-222 | Sigma-Aldrich | E10521 | |
NitraVer 5 Nitrate Reagent | Hach | 14034-46 | |
NitriVer 3 Nitrite Reagent | Hach | 14065-99 | |
Parafilm | Fisher Scientific | 3-374-10 | |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
S6E stereomicroscope | Leica | 10446294 | |
Sodium nitrate | Fisher Scientific | S343 | |
Sodium nitrite | Fisher Scientific | S347 | |
Transfer pipets | Laboratory Products Sales | L320072 | |
Glass vials | Fisher Scientific | 03-338B |