En Vivo evaluación cuantitativa de la estructura miocárdica, la función, perfusión y viabilidad Usando computarizada micro-tomografía cardiaca
Summary
This method outlines the use of Quantum Micro-Computed Tomography (MicroCT) to assess cardiac morphology, function, perfusion, metabolism and viability with iodinated contrast agent in mice with experimentally-induced myocardial ischemia. The technique can be applied for non-destructive high-throughput longitudinal in vivo imaging of various animal models of human heart disease.
Abstract
The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that MicroCT provides quantitative high-resolution three-dimensional (3D) anatomical data non-destructively and longitudinally. Most importantly, with the development of a novel preclinical iodinated contrast agent called eXIA160, functional and metabolic assessment of the heart became possible. However, prior to the advent of commercial MicroCT scanners equipped with X-ray flat-panel detector technology and easy-to-use cardio-respiratory gating, preclinical studies of cardiovascular disease (CVD) in small animals required a MicroCT technologist with advanced skills, and thus were impractical for widespread implementation. The goal of this work is to provide a practical guide to the use of the high-speed Quantum FX MicroCT system for comprehensive determination of myocardial global and regional function along with assessment of myocardial perfusion, metabolism and viability in healthy mice and in a cardiac ischemia mouse model induced by permanent occlusion of the left anterior descending coronary artery (LAD).
Introduction
La cardiopatía isquémica (IHD) sigue siendo la principal causa de morbilidad y mortalidad para los hombres y las mujeres en todo el mundo 1. Debido a la complejidad y las interrelaciones que existen entre los órganos y sistemas a nivel de organismo, el uso de todo el animal como un modelo de la CI sigue siendo relevante no sólo para nuestra mejor comprensión de la fisiopatología de la enfermedad, sino que también permite la evaluación de nuevas estrategias preventivas y terapéuticas . Los modelos de ratón, en particular, han contribuido a nuestro conocimiento del desarrollo cardíaco, patogénesis del infarto de miocardio, hipertrofia de miocardio, miocarditis y lesiones aneurismáticas 2-7. Los parámetros que determinan el rendimiento cardíaco y son útiles en términos de pronóstico y la elección de la intervención terapéutica son la masa cardíaca y la geometría, la función global y regional, la distribución espacial del flujo sanguíneo miocárdico y la viabilidad miocárdica.
Sin embargo, la mayoría de TRADICIONAl métodos de investigación utilizados en modelos de ratón de la enfermedad cardíaca implican medidas invasivas que requieren horas para la finalización de este modo, el animal no puede ser utilizado para mediciones repetidas, o el método de sacrificar animales requerirán 8-12. Por ejemplo, para medir la perfusión miocárdica regional, microesferas marcadas radiactivamente o fluorescentemente se utilizan cuando se detectan señales fluorescentes recuento radiactivo o en un corazón diseccionado físicamente o en situ 13,14.
Del mismo modo, la evaluación del tamaño del infarto en modelos animales de infarto de miocardio se realiza más comúnmente por el cloruro de trifeniltetrazolio tinción (TTC), y con el fin de determinar el curso temporal de la evolución del infarto y el efecto de las intervenciones terapéuticas, esta técnica requiere que los animales necesitan ser sacrificado por examen histopatológico del corazón en diversos puntos temporales 15. Como tales, no destructivas técnicas y humanas que permitan quantitativE y el análisis longitudinal de la morfología cardiaca, la función, el metabolismo y la viabilidad son de suma importancia. En este contexto, las imágenes preclínica es de gran relevancia. Entre las técnicas de imagen disponibles actualmente de imágenes por resonancia magnética (MRI) y la ecocardiografía son los más comúnmente utilizados 16,17,18.
Sin embargo, ya pesar del hecho de que la IRM se considera la modalidad de referencia tanto en el trabajo clínico y preclínico, el alto costo de adquirir y mantener sistemas de RM de animales pequeños dedicados, así como la complejidad de esta tecnología para los usuarios no avanzados para operar , hacer que la RM prohibitivamente caro para el uso rutinario. Con respecto a la ecocardiografía, existen desventajas significativas a la forma en que se mide la función cardíaca. Los datos producidos por la mayoría de los exámenes ecocardiográficos son de dos dimensiones, y con el fin de obtener los volúmenes, las suposiciones geométricas deben hacerse 19. Además, la mala repr intra e inter-observadoroducibility es otra limitación importante de esta técnica. Radioisótopos de imágenes por tomografía de emisión de fotón único (SPECT) y tomografía por emisión de positrones (PET) se utilizan principalmente para la evaluación de la perfusión miocárdica y el metabolismo 17,20,21. Sin embargo, la resolución espacial limitada de estas modalidades de imagen hace que la imagen cardiaca en ratones desafiantes.
Por otra parte, con el advenimiento de la tecnología de detector de panel plano que permite una mejor sensibilidad de rayos X y los tiempos de lectura más rápidos, el estado actual de la técnica sistemas de MicroCT ahora pueden proporcionar cardiorrespiratoria cerrada en tres dimensiones (3D) y de cuatro dimensiones ( 4D) imágenes de resonancia magnética de la calidad de grado. Son los costes de mantenimiento prácticamente libre y fácil de manejar por los usuarios no avanzados. Así, tales instrumentos MicroCT pueden ser muy adecuado para el examen de rutina de los pequeños animales como modelos de enfermedad humana. Lo más importante, con el desarrollo de un nuevo agente de contraste yodado preclínica, sevaluación funcional y metabólica imultaneous del corazón se hizo posible 22-24.
Este agente de contraste contiene una alta concentración de yodo (160 mg / ml), produciendo un fuerte contraste de sangre de la piscina después de su administración intravenosa que permite imágenes in vivo de la vasculatura y las cámaras del corazón. Al cabo de una hora después de la administración, un aumento continuo de contraste de miocardio asociado con su absorción metabólica se puede observar, por lo tanto el mismo agente de contraste se puede utilizar para la evaluación de aturdimiento miocárdico y viabilidad.
El objetivo de la técnica descrita en este manuscrito es permitir a los investigadores a utilizar el sistema microTC de alta velocidad con intrínseca compuerta cardiorrespiratoria, en conjunción con la sangre de la piscina agente de contraste yodado, para determinar la función global y regional del miocardio, junto con la perfusión miocárdica y viabilidad en ratones sanos y en un modelo de ratón de isquemia cardiaca inducida por la oclusión permanentede la arteria descendente anterior coronaria (LAD). Mediante el uso de esta técnica modelo animal y de formación de imágenes, una rápida evaluación de los parámetros cardíacos más importantes se puede realizar de forma repetitiva con una sola modalidad de imagen y sin la necesidad de procedimientos invasivos o la necesidad de sacrificar los animales. La técnica se puede realizar para evaluar nuevas estrategias preventivas y terapéuticas.
Protocol
Representative Results
Discussion
En los últimos años se ha convertido en MicroCT la modalidad de muchas investigaciones considerados para la caracterización de la estructura y la función cardíaca en animales pequeños 26-29,30. Sin embargo, los instrumentos utilizados en el trabajo previo fue construida ya sea personalizado o ya no está disponible comercialmente. Como tal, este estudio tiene como objetivo proporcionar un protocolo sencillo y completo para el uso del sistema de microTC de alta velocidad con intrínseca compuerta cardio-respiratoria para determinar la función global y regional cardiaca junto con la perfusión miocárdica y viabilidad en pequeños animales como modelos de corazón humano enfermedad.
Uno de los requisitos más importantes para el estudio de la estructura y función del corazón es la capacidad del escáner para dar cuenta de los movimientos del corazón fisiológicas. Con este fin, ECG-basan técnicas de activación periódica prospectiva y retrospectiva se pueden utilizar. Sin embargo, prospectivo (paso y disparar) gating se basa en un intervalo de pre-especificada del ciclo cardiaco, para el examenPLE durante la diástole, cuando el movimiento del corazón es menos. Con este enfoque sólo se obtiene una imagen por ciclo cardiaco y sólo una fase del ciclo cardiaco puede ser reconstruido. Como tal, además de ser mucho tiempo para generar, reconstrucciones prospectivamente cerradas producen sólo un conjunto de datos, que está privado de información funcional. gating retrospectivo, por otra parte, permite la reconstrucción de múltiples conjuntos de datos en cada parte del ciclo cardíaco, lo que permite el análisis funcional ventricular izquierda global y regional.
El trabajo actual emplea reconstrucciones cardiorrespiratorias con la sincronización retrospectiva intrínseca. Sincronización retrospectiva intrínseca utiliza el software basado en imágenes patentada para reconstruir fases cardíacas telediastólico y telesistólico, sin necesidad de que respiratoria dedicado y dispositivos de monitorización cardíaca 29,31,32. Un excelente acuerdo de sincronización retrospectiva retrospectivo y extrínseca ECG dependientes intrínseco para studyila función cardíaca ng en ratones y ratas se demostró por Dinkel et al. 29. Durante el presente trabajo, intrínseca sincronización retrospectiva no sólo minimiza significativamente el tiempo necesario para configurar la exploración, sino que también elimina la dependencia del hardware de supervisión, tales como derivaciones de ECG y sensor neumático respiratoria, así como las habilidades del operador adicional para configurar correctamente hacia arriba.
Después de la reconstrucción, la calidad de la imagen de ambos telediastólico y telesistólico conjuntos de datos se encontró satisfactoria para el análisis cardiaco. Durante el examen de las imágenes, se prestó especial atención a los artefactos de movimiento que pueden ocurrir durante un nivel inadecuado de la anestesia, rayar los artefactos que pueden ocurrir como resultado de las proyecciones que faltan en los animales con artefactos de alta velocidad de respiración, baja atenuación que son comúnmente causados por estructuras óseas y puede imitar los defectos de perfusión, y artefactos de anillo que pueden surgir de errores de calibración o el fallo de uno o más ele detectormentos.
La capacidad de MicroCT para producir información estructural y funcional cardíaco depende también de la disponibilidad de agente de contraste intravascular adecuado. La mayoría Actualmente contrastes MicroCT disponibles en el mercado en general se puede subdividir en macrófagos no metabolizable de partículas específico y polidispersos contrastes yodados metabolizable 23,33-36. Aunque los agentes de partículas ofrecen una mayor opacificación de rayos X debido a su mayor número atómico (de bario, Z = 56; y oro, Z = 79), no pueden ser utilizados para la evaluación metabólica. Además, estos agentes son vistos como nocivo para el organismo y eliminados por los macrófagos del hígado (células de Kupffer), las células que limpian del sistema reticuloendotelial (RES). Debido a su naturaleza no metabolizable, estos agentes inducen cambios en la microcirculación hepática concomitante con daño hepático 37.
contrastes a base de yodo metabolizable, por otra parte, no son targeted para la eliminación RES-específicas, por lo que debe ofrecer un mejor perfil de seguridad y evitar la toxicidad hepática. Además de su mejor perfil de seguridad, estos contrastes son absorbidos por los tejidos metabólicamente activos, por lo tanto puede ser utilizado para la evaluación de la viabilidad 22,23. Con este fin, se seleccionó agente de contraste yodado para el presente estudio. El contraste se administró a una dosis de 5 o 10 l por gramo de peso corporal del animal como una inyección intravenosa única en bolo. Aunque ambas dosis produjeron resultados satisfactorios de mejora, se observó un aumento dependiente de la dosis en ventricular izquierda y los niveles miocárdicos de contraste cuando se inyectó 10 l / g del contraste. De interés, con la mayor dosis, la duración de la acumulación de sangre fue prolongado y el pico de captación de contraste de miocardio se retrasó. Un animal (ratón 1) Se realizó un seguimiento de 10 semanas después de la cirugía y durante este período fue fotografiada cada dos semanas. A partir de la experiencia, no hay efectos adversos relacionados con el contraste (un total de 5 eninyecciones) o relacionados a la exposición de rayos X (un total de 10 exploraciones MicroCT) se observaron en este ratón durante el período de monitoreo. Uno de los más frecuentes efectos adversos de la exposición a largo plazo de yodo es la perturbación de la glándula tiroides que no se observó macroscópicamente en los exámenes post mortem. Mannheim et al. Estudiaron los niveles de tiroxina después de 3 administraciones consecutivas de contraste y no encontraron ninguna diferencia cuando los niveles se compararon con los controles 37. Con el uso de los mismos MicroCT conjuntos de datos, no se detectaron signos de fibrosis pulmonar inducida por la radiación en este animal (datos no mostrados), conformando la seguridad del procedimiento.
La evaluación de la función cardíaca ventricular global y regional se considera el factor más determinante del rendimiento cardíaco e importante en cuanto al pronóstico y la elección de la intervención terapéutica 38,39. Los índices de función ventricular global son el volumen diastólico final del ventrículo izquierdo (VTDVI), el volumen del ventrículo izquierdo de fin de sístole (VTS), el volumen de eyección del ventrículo izquierdo (LVSV), fracción de eyección ventricular izquierda (FEVI) y el gasto cardíaco (CO). Estudios anteriores MicroCT confirmaron que la evaluación cuantitativa de la función cardíaca global es factible en modelos murinos de enfermedad cardiovascular y que pronunciada disminución de la función cardíaca global tiene lugar poco después de la oclusión de la arteria LAD. Estos resultados están de acuerdo con los informes anteriores en que la marcada reducción en LVSV, FEVI, y CO ya se produjeron en el día 1 después de la oclusión 29,40-43. Es digno de mención que el rendimiento funcional cardiaca depende del tipo y grado de la anestesia, por lo tanto para las medidas exactas de la frecuencia cardíaca durante la adquisición de la imagen debe ser lo más fisiológica posible 44.
La evaluación cuantitativa de la masa miocárdica del ventrículo izquierdo (LVMM) es importante para la evaluación de la hipertrofia ventricular izquierda y se realizó principalmente usando MRMe 11,43,45,46. LVMM a menudo se corrigió para el peso corporal y se presenta como el índice de masa del ventrículo izquierdo del miocardio (LVMMI) para permitir la normalización del peso cardiaco entre los ratones de diferentes edades y habitus. Estimación precisa de estos parámetros es importante, ya que los ratones con infarto de miocardio desarrollan significativa hipertrofia VI 47. Evaluación de la geometría LVMM, LVMMI, y LV es también importante para el diagnóstico de la hipertrofia cardíaca y la displasia 11. Como tal, la determinación de estos parámetros será adicionalmente beneficiosa para diferenciar condiciones tales como la hipertrofia concéntrica, hipertrofia excéntrica, o remodelación concéntrica. En el presente trabajo, tanto los valores LVMMI LVMM y se determinaron en ratones sometidos a ligadura de la arteria LAD y en el animal con operación simulada. Posteriormente, se identificó el tamaño del infarto de miocardio y se utiliza para calcular el porcentaje del tamaño del infarto. Aunque durante la cirugía de la ligadura de la arteria coronaria LAD era applied en el mismo nivel, la oclusión generada infartos con cierta variabilidad: 13,3%, 15,8% y 22,4% (Tabla 1). Una posible explicación de esta variabilidad puede emanar de las diferencias en la anatomía de las arterias coronarias y de su suministro de sangre territorial entre los animales, y de acuerdo con los informes anteriores 48. La forma más común de evaluación tamaño del infarto en un modelo de ratón de infarto de miocardio es por tinción ex vivo de trifenil tetrazolio cloruro de (TTC), la técnica que no permitiría la vigilancia longitudinal de la enfermedad en el mismo animal. En el contexto de un trabajo anterior de Ashton et al. 22 y de esta presente, es de destacar que MicroCT en conjunción con el agente de contraste yodado puede proporcionar un método alternativo y no destructivo para determinar el tamaño del infarto longitudinalmente.
Una ventaja adicional de la técnica MicroCT radica en la determinación muy precisa de la isquemia regional. Like en los seres humanos la arteria coronaria izquierda de las divisiones de ratón en una arteria descendente (LAD) y una rama septal (LCX). Sin embargo, en ratones, la anatomía de los manojos laterales de la DA y la CX difiere considerablemente entre los animales 48. Grandes manojos de la LCX a veces son muy similares a la LAD y desde las arterias coronarias de ratones son intra-miocárdica y, por tanto, no visible, los apoyos laterales de la LCX son a veces accidentalmente, pero inevitablemente incluidos en la oclusión coronaria durante el procedimiento de ratón-infarto. Como tal, el mapa polar circumferentional obtenido después de MicroCT se puede utilizar para determinar exactamente que las arterias coronarias se ocluyen, ya que la captación de perfusión y el contraste en los sectores 2, 3, 8 y 9 están afectadas por la LCX mientras que los sectores 7, 10, 11, 12 , 13, 15, 16 y 17 son suministrados por la LAD. De acuerdo con ello, el mapa polar es de gran beneficio para la determinación precisa de las arterias ocluidas y, en consecuencia ayuda importante en la correcta interpretación de los efectos de la myocamiocardio rdial de la función cardiaca y la progresión de la enfermedad.
El modelo de infarto de miocardio de ratón utilizado altamente imita la situación clínica humana, cuando los recipientes coronarias se ocluyen pronto como resultado de una ruptura de la placa y, como tal, es de gran beneficio para estudiar el desarrollo de la enfermedad del corazón infartado 49. Mientras que en el tratamiento de los países occidentales desarrollados de los pacientes que sufren de infarto de miocardio está destinada a restablecer rápidamente la recirculación del vaso coronario, en muchas ocasiones, sobre todo en los países económicamente menos desarrollados, donde la incidencia de infarto de miocardio está aumentando rápidamente, la oclusión no puede ser anulado en tiempo de 1,50. Esto induce en los infartos grandes ventriculares que más a menudo dará lugar a la insuficiencia cardíaca crónica y son una enorme carga para la salud pública. En consecuencia, los métodos de diagnóstico no invasivos longitudinales utilizando un modelo de infarto de miocardio con una arteria coronaria permanente OCClusion y un infarto ventricular grandes son de gran importancia para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento contra esta enfermedad.
de imágenes de perfusión miocárdica La TC es una técnica rápida evolución que permite la evaluación cuantitativa de anomalías regionales flujo sanguíneo coronario y su relevancia para la función del corazón y la viabilidad. Los estudios más recientes pequeños animales reducen la brecha entre microTC y SPECT, la modalidad de elección para la perfusión y la viabilidad de evaluación 22. Con el objetivo de evaluar el grado de deterioro del flujo sanguíneo regional causada por la oclusión de la arteria coronaria LAD, también se evaluaron los datos MicroCT para obtener información de perfusión miocárdica. La arteria LAD ligado se conoce proporcionar el suministro de sangre a la pared libre, que forma parte del tabique, y la región apical del ventrículo izquierdo. defectos de perfusión miocárdica (áreas) de ratón hypoenhanced 1 se muestran en un sistema polar de coordenadas y evidente a mediados de anterior, media-inferolateral, a mediados de anterolateral, apicalanterior, y segmentos laterales apicales, los resultados son consistentes con la misma distribución coronaria (Figura 3). No hay diferencia entre los defectos de perfusión derivados de las imágenes telediastólico y telesistólico se encontró en homosegments. Los perfusión miocárdica polares visualización de mapas telediastólico y telesistólico del animal con operación simulada se muestran en la Figura 4. Las pequeñas diferencias en el flujo sanguíneo del miocardio entre los segmentos de los animales de control no son significativas en ambas representaciones telediastólico y telesistólico . Curiosamente, las áreas de hypoenhancement se puede ver visualmente en las imágenes de sección transversal axial corta (Figura 1) y se puede cuantificar fácilmente, como se muestra en la Figura 3. Esto no era posible en el estudio de Befeda et al., Y puede explicarse por mayor ruido del instrumento utilizado microTC 22. Con el fin de discernirse visualmente, las diferencias de señal deben ser de al menos tres a cinco veces mayorque el ruido (desviación estándar) en la imagen 51. Bajo nivel de ruido de la MicroCT utilizado en este estudio permitió la detección de una pequeña diferencia de señal entre el miocardio alterada y normalmente perfundido (127HU ± 23HU vs. 217HU ± 29HU), lo que permite la evaluación satisfactoria de los defectos del patrón de perfusión miocárdica.
Una de las principales ventajas del uso de agente de contraste yodado es la capacidad de evaluar la viabilidad miocárdica y el metabolismo debido a la mejora de miocardio relacionadas con contraste. Para nuestro conocimiento, la capacidad del contraste para mejorar miocardio fue descrito primero por Detombe et al. 23 y su primer uso para formación de imágenes de infarto de miocardio se informó por Ashton et al. 22. Aunque el grupo indicó que el miocardio perfundido en los ratones con infarto de miocardio mostró realce similar a los controles, y que el miocardio infartado no mostró ninguna mejora, la evaluación cuantitativa de la segmental e infartonhancement no se informó. Para investigar más si la mejora de miocardio se puede evaluar cuantitativamente, todos los ratones se ha creado una imagen utilizando el mismo protocolo de formación de imágenes 3 – 4 horas después de la administración de contraste, cuando la mejora del miocardio en relación con la cavidad fue máxima.
Defectos de captación de contraste de miocardio se observaron visualmente en las imágenes de corte transversal axial corto telediastólico y telesistólico de un corazón de ratón con infarto de miocardio (Figura 5), pero no en el animal con operación simulada (Figura 6). La captación miocárdica se evaluó cuantitativamente en cada segmento del miocardio de ambos reconstrucciones telediastólico y telesistólico y se presenta en un sistema de coordenadas polares (Figura 7 y 8). Los valores homosegmental telediastólico y telesistólico obtenidos del mismo animal no fueron diferentes. Sin embargo, los diagramas polares periféricas mostraron anomalías del segmento específico (Figure 7) con patrones similares a los que se muestran en los mapas de perfusión miocárdica (Figura 2). No hay defectos de captación de contraste fueron vistos en los diagramas polares circunferenciales del ratón operación simulada (Figura 8). Los datos de absorción de miocardio eran de suficiente calidad para llevar a cabo el análisis funcional global y la evaluación cuantitativa de la masa miocárdica del VI y el tamaño del infarto (no mostrados). Aunque no es pertinente para el modelo utilizado en la actualidad con LAD permanente oclusión de la arteria coronaria, creemos que la extracción de infarto de contraste se puede ver no sólo con alteraciones en el flujo sanguíneo miocárdico regional, sino también a la situación de los cardiomiocitos (por ejemplo, cicatrices, aturdido y el miocardio hibernado) . Para probar esta hipótesis, el trabajo futuro empleará el modelo con isquemia miocárdica temporal y reperfusión.
contracción activa de los resultados de miocardio en movimiento de la pared miocárdica y engrosamiento que sirven como importantes marcadores de f sistólicaunción y la viabilidad miocárdica. La evaluación de la movilidad regional de la pared, el engrosamiento y la fracción de eyección ayuda a discernir movimiento de la pared sistólica pasiva de la contracción miocárdica activa. A fin de permitir la cuantificación estandarizada de la extensión y gravedad de la lesión, movimiento de la pared, engrosamiento de la pared, y la fracción de eyección regionales se asignan comúnmente en los mapas polares. Las anormalidades del movimiento de la pared ventricular regional son importantes marcadores de isquemia miocárdica que se evalúan con mayor frecuencia por la RM 52. El movimiento de la pared del VI, espesantes y fracción de eyección regional puntuaciones para cada segmento de un ratón con y sin infarto de miocardio se presentan en la Figura 9 y Figura 10. Como se esperaba, la ligadura de la arteria coronaria LAD resultó en un marcado descenso de los índices funcionales regionales LV ( la Figura 9), mientras que no se observó ningún efecto en el ratón con operación simulada (figura 10). Estos resultados están en concordancia condatos de informes anteriores.
En conclusión, este trabajo ha demostrado la primera utilización con éxito de un sistema microTC de alta velocidad para la determinación completa de los parámetros funcionales globales y regionales de miocardio junto con la evaluación de la perfusión miocárdica y viabilidad de saludable y en un modelo de ratón de infarto de miocardio. Este trabajo se puede extender más hacia la caracterización de otros modelos de enfermedad cardiovascular, lo que permite una evaluación precisa y no destructiva de los cambios funcionales y fisiopatológicos cardíacos, y para la evaluación de nuevas estrategias preventivas y terapéuticas.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Stichting Lijf en Leven, proyecto dilatar frente estenosante enfermedad arterial.
Materials
| Quantum FX MicroCT Imaging System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Micro Computed Tomography System | |
| XGI-8 Anesthesia System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Cat. No. 118918 | Gas Anesthesia System |
| Analyze 12.0 Software | Analyze Direct, Overland Park, KS, USA | Visualization and Analysis Software for Imaging | |
| eXIA160 MicroCT Contrast | Binitio Biomedical, Ottawa, ON, CANADA | Cat. No. eXIA160-01; eXIA160-02; eXIA160-03; eXIA160-04; eXIA160-05 | Iodine based Radiocontrast for MicroCT Imaging |
| Isoflurane | Pharmachemie BV, Haarlem, Netherlands |
Cat. No. 45.112.110 | inhalation anesthesia |
| 1/2CC U-100 28G1/2 Insulin Syringe | Becton Dickinson and Company, USA |
Cat. No. 329461 | Insulin syringes with sterile interior |
| Leica microscope type M80 | Leica Microsystems BV, Eindhoven, Netherlands | Stereo zoom microscope |
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