Sicherheitsvorkehrungen und Betriebsverfahren in einem (A) BSL-4-Labor: 2. Allgemeine Practices

Als Sicherheit von Hoch Folge Erregern Laborpersonal Handhabung (keine Infektion Prophylaxe noch existieren Behandlungsmöglichkeiten) an erster Stelle steht, hat das US Department of Health and Human Services Richtlinien festgelegt für Anlagenbau und Best Practices für die sichere Durchführung von Arbeiten mit Krankheitserregern in der biomedizinischen und klinische Laboratorien aus einer Biosicherheit Perspektive ^1. Durch Gesetze und Vorschriften, haben viele der Praktiken und Verfahren verbindlichen Anforderungen werden, die für die Arbeit mit diesen Erregern befolgt werden müssen. In den USA, Krankheitserreger, die sich leicht von Mensch zu Mensch übertragen werden, führen zu hohen Letalitätsraten und / oder das Potenzial für große öffentliche Gesundheit auswirken und Bioterrorismus haben, werden als National Institute of Health / National Institute of Allergy kategorisiert und Infektions Krankheit (NIH / NIAID) Priorität A Pathogene und oder Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Bioterrorismus Kategorie A Agents ^2. Zusätzlich hIGH-Folge Krankheitserreger werden als Tier – 1 – Agenten auswählen klassifiziert , wenn diese Erreger potenzielle Bioterrorismus Mittel sind, haben das Potenzial für Massenanfall von Verletzten oder verheerende Auswirkungen auf die Wirtschaft, die kritische Infrastruktur oder das Vertrauen der Öffentlichkeit ^3.

BSL-4-Operationen, einschließlich des Zugangs zu den Instituten mit BSL-4 Laboratorien sind höher gesteuert als BSL-2/3-Schaltungen. Zum Beispiel ist es wesentlich schwieriger, Zugang zu einem BSL-4 Labor zu gewinnen im Vergleich zu einem BSL-2 oder BSL-3 Labor aufgrund erheblicher Anzug Ausbildungsanforderungen, umfangreiche mentorship Anforderungen und zusätzliche medizinische Biosicherheit Voraussetzungen. Darüber hinaus gibt es typischerweise mehrere physische Sicherheitssperren in einem BSL-4 – Anlage im Vergleich zu einem BSL-2 oder BSL-3 – Anlage ^4-6. Wie bereits in unserem ersten Artikel über BSL-4 Ein- und Ausstieg beschriebenen Verfahren, durchlaufen Laborpersonal eine umfassende Ausbildung und psychologische Screening für den Eintritt in den BSL-4 Labor ⁷ zu qualifizieren. Within der BSL-4 Labor, Infektionsrisiko und Fehler werden vermieden oder durch folgende etablierten Verfahren gemildert. Die Forschung muss sorgfältig und bewusst mit minimaler Multitasking oder Ablenkungen gehen. Bücken im Überdruckanzüge ist schwierig, und der Gesichtsschutz Verfahren beschränken, wie Mikroskopie. Sperrige Handschuhe behindern die Leistung der Feinmotorik Aufgaben, wie Umgang mit kleinen Gegenständen oder Kennzeichnung Rohre. Zur Zeit verbrachte in BSL-4 Laboratorien zu minimieren, sollten Laborspezialisten Arbeitsabläufe überprüfen Schritte zu identifizieren, die vor uns in einem BSL-2 Labor durchgeführt werden kann und transportieren dann diese Materialien in die BSL-4 Labor für die Durchführung der Aufgabe (n). Wenn Materialien für die Weiterverarbeitung in BSL-2 Labor entfernen, werden die Materialien festgelegt und von der BSL-4-Labor in einem abgedichteten zweiten Behälter entfernt wird. Beispiele von Proben, die umfassen können entfernt werden müssen: Festplatten oder Rohre aus infiziertem Material, das durch enzyme-linked analysiert werden immunosorbent-Assay (ELISA), Immunfluoreszenztest (IFA), oder die Polymerase-Kettenreaktion (PCR).

Neben der besseren physikalischen durch persönliche Schutzausrüstung auferlegten Beschränkungen erforderlich BSL-4 Laboratorien im Vergleich zu denen in BSL-2 Laboratorien, Verfahren zur Inaktivierung von Hoch Folge Pathogenen in Zellkulturplatten und Entsorgung sind strenger als die für weniger pathogenen Viren benötigt in einem BSL-2 Labor untersucht. Zumindest sollten diese Verfahren CDC Anforderung zu erfüllen. Beispielsweise kontaminierte Zellkulturplatten und anderen Materialien, können mit chemischen Reagenzien, wie neutral-gepuffertem Formalin inaktiviert werden. Behandelten Zellkulturplatten oder Rohre sind in Heißsiegelbeutel gelegt werden, die Formalin und entfernt vom Labor über einen dunk Tank mit einem flüssigen Desinfektionsmittel gefüllt ist. Abfall Eimer mit Desinfektionslösungen gefüllt und Spray Desinfektionsmittel eingesetzt werden zur vorübergehenden Abfall während des Experiments und für disi erzeugt Empfangnfecting Handschuhe, Reinigung Biosicherheitsschrank Flächen und Instrumenten sind. Quartären Ammoniumdesinfektionslösung in der Konzentration aufgeführt ist der Goldstandard für alle US-BSL-4 Laboratorien (Barr J, persönliche Mitteilung, 2015) betrachtet. Feste Abfälle aus einem Abfallbehälter autoklaviert Potential für Verunreinigung zu beseitigen.

In einer Anstrengung, um visuell den Arbeitsablauf und die Grenzen der allgemeinen BSL-4-Verfahren zu demonstrieren, verwendeten wir eine Standard viralen Plaque-Assay als ein Beispiel für eine häufig verwendete virale Verfahren. Während der viralen Assay-Verfahren im Allgemeinen beschrieben wird, betonen wir die Biosicherheit Verfahren Sicherheit des Laborpersonals in diesem Protokoll verwendet, um sicherzustellen. Bitte beziehen sich auf frühere klassische Plaque – Assay – Visualisierungen für zusätzliche Hintergrund auf dem Plaque – Assay – Technik ^8,9.

Die Verfahren präsentiert hier folgen Sie den BMBL umrissenen Spezifikationen von CDC ^1. Jedoch sind die vorgestellten Protokollespezifisch für das IRF-Frederick. Jede BSL-4-Anlage verfügt über verschiedene Standardarbeitsanweisungen (SOPs) und Methoden der Operation, die die Durchführung von Experimenten in der BSL-4 Labor auswirken. Alternative Verfahren für die Abfallstrom-Management und Durchführung von Plaque-Assays können auf die Verwaltung und den Betrieb dieser Labors, unterschiedlich sein. Dennoch wird ein allgemeines Verständnis für den Aufbau eines BSL-4-Anzug Labor und Verfahren für die Durchführung der Arbeit mit der Klasse II Schränke im Inneren des BSL-4-Umgebung den Wissenschaftlern helfen, die Einschränkungen und Auswirkungen auf die Sicherheit verstehen, wenn Studien mit hohem Risiko Krankheitserreger betrachten. Eine stärkere Sensibilisierung der externe Mitarbeiter der Schwierigkeiten in einem BSL-4 Labor umgebende Arbeit kann bei der Entwicklung von medizinischen Gegenmaßnahmen in der Forschungsgemeinschaft angepassten Erwartungen und größerer Leichtigkeit führen.