メダカの卵を使用したシルバーナノコロイドの塩分依存毒性アッセイ
Summary
Embryonic stages are the most susceptible to xenobiotics. Although chemical toxicity depends on salinity, no method exists to test the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we describe a new and high-throughput method for determining the salinity dependence of toxicity to aquatic embryos.
Abstract
塩分は水生環境の重要な特徴です。水生生物にとっては、淡水、汽水、海水の生息地を定義します。化学物質や水生生物への生態リスクの評価の毒性のテストは頻繁に淡水で実行されますが、水生生物への化学物質の毒性はpH、温度、および塩分濃度に依存します。何の方法は、水生生物への毒性の塩分濃度依存性を試験するために、しかし、ありません。彼らは淡水、汽水、海水に適応することができますので、ここでは、メダカ（ メダカ）を用いました 。胚飼育培地（ERM）の異なる濃度は、（1倍、5倍、10倍、15倍、20倍、および30倍）が卵をメダカする銀ナノコロイド粒子（SNCが）の毒性を試験するために使用した（1×ERMと30X ERMは、浸透圧相当を持っています）は、それぞれ、淡水と海水へ。 6ウェルプラスチックプレートでは、三連で15メダカの卵は、10mg / L＆でのSNCにさらされました＃8722;暗所でpH7のERMの異なる濃度で1〜25°C。
私たちは、日（セクション4）の孵化に6日目に15秒、眼の直径あたりの心拍数と幼虫のフルボディの長さを測定するために解剖顕微鏡やマイクロメーターを使用していました。胚を孵化または14日目まで観察されました。私たちは、その後、14日（第4章）のために毎日孵化率を数えました。胚における銀の蓄積を確認するために、我々は銀のテスト・ソリューション（第5節）の濃度とdechorionated胚（セクション6）明らかに増加塩分濃度とともに増加したメダカ胚へのSNCの選択図毒性を測定するために、誘導結合プラズマ質量分析法を使用していました。この新しい方法は、異なる塩分中の化学物質の毒性を試験することを可能にします。
Introduction
1979年の試験化学物質のための経済協力開発機構（OECD）の試験のガイドラインについては組織の設立以来、38テストガイドラインはガイドライン、生物的システム1への影響の第2節で公開されています。テストした水生生物のすべては、淡水の生息地、すなわち淡水植物からなっています。藻類;このようなミジンコやユスリカなど無脊椎動物。そして、このようなメダカ、ゼブラフィッシュ、およびニジマスなどの魚。塩水環境と比較して、淡水環境はより直接的に人間の経済・産業活動の影響を受けています。彼らは汚染からリスクが高いので、したがって、淡水環境は、テストのために優先順位付けされています。
河口などの沿岸地域では、塩分は汽水や海水条件の間で変動し、これらの領域は、多くの場合、産業活動2によって汚染されています。沿岸地域とそれに関連する湿地は、時間によって特徴付けられます生態系の生物多様性と生産性IGH。沿岸の生態系は、したがって、化学物質汚染から保護されなければなりません。しかし、汽水、海水の生息地での限られた環境毒性学の研究がなされてきました。
Sakaizumi 3は、日本のメダカの卵中のメチル水銀と塩分との間に毒性の相互作用を研究し、試験溶液の浸透圧を増加させることがメチル水銀の毒性を増強することを見出しました。炭谷ら 4は、埋立地浸出水の毒性を調べるために、メダカの卵を使用。彼らは卵への浸出水の浸透等価が胚形成中に異常を誘発するための鍵であることがわかりました。また、柏田5は、プラスチック製のナノ粒子（直径39.4 nm）と簡単に塩気の条件の下でメダカ卵の漿膜（15X胚飼育培地（ERM））を透過していることを報告しました。
典型的な小魚モデル、日本のメダカ（ メダカ </emは>）基礎生物学および生態毒性6で使用されてきました。日本のメダカは、その高度に発達した塩化セル7の淡水から海水までの条件で生きることができます。したがって、それらは、塩分の広い範囲の条件で試験するために有用である可能性があります。
Protocol
Representative Results
Discussion
メダカは、海水に対して非常に寛容である淡水魚です。よくこの魚の本来の自然の生息地は、日本の沿岸6オフ海水だったことは知られていません。したがって、メダカは塩化セル7よく発達してきました。このユニークなプロパティは、魚の単独種のみを使用して、塩分（海水への淡水）の関数として、環境中の化学物質の毒性を試験するための新しい方法で科学者を提供し?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We are grateful to Ms. Kaori Shimizu and Mr. Masaki Takasu of the Graduate School of Life Sciences, Toyo University, for their technical support. This project was supported by research grants from the Special Research Foundation and Bio-Nano Electronics Research Centre of Toyo University (to SK); by the Science Research Promotion Fund of the Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan (to SK); by the New Project Fund for Risk Assessments, from the Ministry of Economy, Trade and Industry (to SK); by a Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (award 23651028 to SK); by a Grant-in-Aid for Scientific Research (B) and (C) (award 23310026 and 26340030 to SK); and by a Grant-in-Aid for Strategic Research Base Project for Private Universities (award S1411016 to SK) from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology of Japan.
Materials
| Silver nanocolloids | Utopia Silver Supplements | ||
| NaCl | Nacalai Tesque, Inc. | 31319-45 | For making ERM |
| KCl | Nacalai Tesque, Inc. | 28513-85 | For making ERM |
| CaCl2·2H2O | Nacalai Tesque, Inc. | 06730-15 | For making ERM |
| MgSO4·7H2O | Nacalai Tesque, Inc. | 21002-85 | For making ERM |
| NaHCO3 | Nacalai Tesque, Inc. | 31212-25 | For making ERM |
| AgNO3 | Nacalai Tesque, Inc. | 31018-72 | |
| pH meter | HORIBA, Ltd. | F-51S | |
| Balance | Mettler-Toledo International Inc. | MS204S | |
| medaka (Oryzias latipes) orange-red strain | National Institute for Environmental Studies | ||
| medaka flow-through culturing system | Meito Suien Co. | MEITOsystem | |
| Artemia salina nauplii eggs | Japan pet design Co. Ltd | 4975677033759 | |
| aeration pomp | Japan pet design Co. Ltd | non-noise w300 | |
| Otohime larval β-1 | Marubeni Nissin Feed Co. Ltd | Otohime larval β-1 | Artificial dry fish diet |
| dissecting microscope | Leica microsystems | M165FC | |
| micrometer | Fujikogaku, Ltd. | 10450023 | |
| incubator | Nksystem | TG-180-5LB | |
| shaker | ELMI Ltd. | Aizkraukles 21-136 | |
| 6-well plastic plates | Greiner CELLSTAR | M8562-100EA | |
| aluminum foil | AS ONE Co. | 6-713-02 | |
| stopwatch | DRETEC Co. Ltd. | SW-111YE | |
| 3-kDa membrane filter | EMD Millipore Corporation | 0.5-mL centrifugal-type filter | |
| 50-mL Teflon beaker | AS ONE Co. | 33431097 | |
| Custom claritas standard | SPEXertificate | ZSTC-538 | For internal standard |
| Custom claritas standard | SPEXertificate | ZSTC-622 | For external standard |
| ultrapure nitric acid | Kanto Chemical Co. | 28163-5B | |
| hydrogen peroxide | Kanto Chemical Co. | 18084-1B | for atomic absorption spectrometry |
| ICP-MS | Thermo Scientific | Thermo Scientific X Series 2 | |
| hot plate | Tiger Co. | CRC-A300 | |
References
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