Summary

التي تعتمد على ملوحة سمية الفحص من الفضة Nanocolloids عن طريق الميداكا البيض

Published: March 18, 2016
doi:

Summary

Embryonic stages are the most susceptible to xenobiotics. Although chemical toxicity depends on salinity, no method exists to test the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we describe a new and high-throughput method for determining the salinity dependence of toxicity to aquatic embryos.

Abstract

الملوحة هي من أهم خصائص البيئة المائية. للكائنات المائية أنها تحدد موائل المياه العذبة والمياه المالحة، ومياه البحر. في كثير من الأحيان يتم إجراء اختبارات السمية للمواد الكيميائية وتقييم المخاطر البيئية على الأحياء المائية في المياه العذبة، ولكن سمية المواد الكيميائية للكائنات المائية يعتمد على درجة الحموضة، ودرجة الحرارة، والملوحة. لا توجد طريقة، ومع ذلك، لاختبار الاعتماد ملوحة السمية بالنسبة للكائنات المائية. هنا، كنا الميداكا (Oryzias latipes) لأنها يمكن أن تتكيف مع المياه العذبة والمياه المالحة، ومياه البحر. تركيزات مختلفة من متوسطة تربية جنين (ERM) (1X، 5X، 10X، 15X، 20X، و30X) كانوا يعملون لاختبار سمية الجسيمات nanocolloidal الفضة (الرسائل الوطنية الثانية) لالميداكا البيض (1X ERM و30X ERM ديك الضغوط الأسموزية أي ما يعادل على المياه العذبة ومياه البحر، على التوالي). في لوحات ستة جيدا البلاستيكية، تعرضت 15 بيضة الميداكا في ثلاث نسخ إلى الرسائل الوطنية الثانية في 10 ملغم / لتر و# 8722؛ (1) في تركيزات مختلفة من إدارة مخاطر المؤسسات في الرقم الهيدروجيني 7 و 25 درجة مئوية في الظلام.

كنا المجهر تشريح وميكرومتر لقياس معدل ضربات القلب في 15 ثانية والعين قطر يوم 6 و طول الجسم الكامل للاليرقات على الفقس اليوم (القسم 4). وقد لوحظت الأجنة حتى الفقس أو 14 يوما. نحن ثم عد معدل الفقس كل يوم لمدة 14 يوما (المادة 4). لنرى تراكم الفضة في الأجنة، استخدمنا إضافة بالحث البلازما الطيفي لقياس تركيز الفضة من الحلول اختبار (القسم 5) والأجنة dechorionated (المادة 6). وسمية الرسائل الوطنية الثانية لأجنة الميداكا زيادة الواضح مع زيادة الملوحة. هذا الأسلوب الجديد يسمح لنا لاختبار سمية المواد الكيميائية في درجات الملوحة المختلفة.

Introduction

منذ إنشاء منظمة التعاون الاقتصادي والمبادئ التوجيهية للاختبار التنمية (OECD) للمواد الكيميائية الاختبار في عام 1979، تم نشر 38 المبادئ التوجيهية للاختبار في القسم 2 من المبادئ التوجيهية، تأثيرات على الأنظمة الحيوية 1. جميع الكائنات الحية المائية اختبارها كانت من موائل المياه العذبة، وهي محطات المياه العذبة؛ الطحالب. اللافقاريات مثل الغار والهاموش. والأسماك مثل الميداكا، الزرد، وتراوت قوس قزح. بالمقارنة مع بيئات المياه المالحة، وبيئات المياه العذبة أكثر المتضررين مباشرة من الأنشطة الاقتصادية والصناعية الإنسان. ولذلك، فقد تم ترتيب أولوية بيئات المياه العذبة لاختبار لأنهم أكثر عرضة من التلوث.

في المناطق الساحلية، بما في ذلك مصبات الأنهار، الملوحة تختلف بين أوضاع المياه ومياه البحر المالحة، وغالبا ما لوثت هذه المناطق حسب النشاط الصناعي 2. تتميز المناطق الساحلية والأراضي الرطبة المرتبطة بها التي كتبها hالتنوع البيولوجي البيئي IGH والإنتاجية. ولذلك يجب أن النظم الإيكولوجية الساحلية تكون محمية من التلوث الكيميائي. ومع ذلك، هناك كان محدودا البحوث السمية البيئية في موائل المياه ومياه البحر المالحة.

Sakaizumi 3 درس التفاعلات السامة بين ميثيل الزئبق والملوحة في البيض الميداكا اليابانية، ووجدت أن زيادة الضغط الاسموزي لمحلول الاختبار تعزيز سمية ميثيل الزئبق. . Sumitani آخرون 4 يستخدم البيض الميداكا للتحقيق سمية العصارة المكب. وجدوا أن معادلة الاسموزية للالعصارة إلى البيض هو المفتاح لإحداث تشوهات خلال مرحلة التطور الجنيني. وبالإضافة إلى ذلك، ذكرت Kashiwada 5 أن الجسيمات النانوية البلاستيك (39.4 نانومتر في القطر) تغلغلت بسهولة من خلال المشيمه الميداكا البيض في ظل ظروف شديدة الملوحة (15X الجنين تربية المتوسطة (ERM)).

نموذج سمكة صغيرة نموذجية، والميداكا اليابانية (Oryzias latipes </eم>) وقد استخدمت في البيولوجيا الأساسية والسمية الإيكولوجية 6. يمكن الميداكا اليابانية يعيشون في ظروف تتراوح من المياه العذبة إلى مياه البحر بسبب كلوريد الخلايا المتقدمة جدا على 7. وهم بالتالي من المحتمل أن تكون مفيدة لاختبار في ظروف مع مجموعة واسعة من الملوحة.

Protocol

تم علاج الميداكا اليابانية المستخدمة في هذه الدراسة إنسانية وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية للجامعة تويو، مع إيلاء الاعتبار الواجب للتخفيف من القلق والانزعاج. 1. الفضة Nanocolloids (الرسائل الوطنية الثانية) <l…

Representative Results

وكان تأثير الملوحة على سمية SNC اضح جدا: كان تحريض تشوه أو موت الملوحة تعتمد (الشكلان 1 و 2). قمنا بقياس المؤشرات الحيوية المظهرية (معدل ضربات القلب، وحجم العين، طول كامل الجسم، ومعدل الفقس) في SNC (10 ملغ / لتر -1) الأجنة -exposed. وكشفت ه?…

Discussion

الميداكا هو أسماك المياه العذبة التي هي متسامح للغاية لمياه البحر. ليس من المعروف جيدا أن الموائل الطبيعية الأصلية لهذه الأسماك والمياه المالحة قبالة الساحل الياباني 6. وبالتالي، الأسماك الميداكا وضعت بشكل جيد خلايا كلوريد 7. هذه الخاصية الفريدة توفر الع…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

We are grateful to Ms. Kaori Shimizu and Mr. Masaki Takasu of the Graduate School of Life Sciences, Toyo University, for their technical support. This project was supported by research grants from the Special Research Foundation and Bio-Nano Electronics Research Centre of Toyo University (to SK); by the Science Research Promotion Fund of the Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan (to SK); by the New Project Fund for Risk Assessments, from the Ministry of Economy, Trade and Industry (to SK); by a Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (award 23651028 to SK); by a Grant-in-Aid for Scientific Research (B) and (C) (award 23310026 and 26340030 to SK); and by a Grant-in-Aid for Strategic Research Base Project for Private Universities (award S1411016 to SK) from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology of Japan.

Materials

Silver nanocolloids Utopia Silver Supplements
NaCl Nacalai Tesque, Inc. 31319-45 For making ERM
KCl Nacalai Tesque, Inc. 28513-85 For making ERM
CaCl2·2H2O Nacalai Tesque, Inc. 06730-15 For making ERM
MgSO4·7H2O Nacalai Tesque, Inc. 21002-85 For making ERM
NaHCO3  Nacalai Tesque, Inc. 31212-25 For making ERM
AgNO3 Nacalai Tesque, Inc. 31018-72
pH meter HORIBA, Ltd. F-51S
Balance Mettler-Toledo International Inc. MS204S
medaka (Oryzias latipes) orange-red strain  National Institute for Environmental Studies
medaka flow-through culturing system Meito Suien Co. MEITOsystem
Artemia salina nauplii eggs Japan pet design Co. Ltd 4975677033759
aeration pomp Japan pet design Co. Ltd non-noise w300
Otohime larval β-1 Marubeni Nissin Feed Co. Ltd Otohime larval β-1 Artificial dry fish diet
dissecting microscope Leica microsystems M165FC
micrometer Fujikogaku, Ltd. 10450023
incubator Nksystem TG-180-5LB
shaker ELMI Ltd. Aizkraukles 21-136
6-well plastic plates Greiner CELLSTAR M8562-100EA
aluminum foil AS ONE Co. 6-713-02
stopwatch DRETEC Co. Ltd. SW-111YE
3-kDa membrane filter EMD Millipore Corporation 0.5-mL centrifugal-type filter
50-mL Teflon beaker AS ONE Co. 33431097
Custom claritas standard SPEXertificate ZSTC-538 For internal standard
Custom claritas standard SPEXertificate ZSTC-622 For external standard
ultrapure nitric acid Kanto Chemical Co. 28163-5B
hydrogen peroxide  Kanto Chemical Co. 18084-1B for atomic absorption spectrometry
ICP-MS Thermo Scientific Thermo Scientific X Series 2 
hot plate Tiger Co. CRC-A300

References

  1. . . OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems. , (2015).
  2. . . National Coastal Condition Report. , (2001).
  3. Sakaizumi, M. Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes. J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).
  4. Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites. J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).
  5. Kashiwada, S. Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes). EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).
  6. Iwamatsu, T. . The Integrated Book for the Biology of the Medaka. , (2006).
  7. Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes. Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).
  8. . . XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B – 121 9590. , (2007).
  9. Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions. ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).
  10. Iwamatsu, T. Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes. Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).
  11. Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos. Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).
  12. Shannon, R. D. Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides. Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).
  13. Wakamatsu, Y. . Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , (2015).

Play Video

Cite This Article
Kataoka, C., Kashiwada, S. Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs. J. Vis. Exp. (109), e53550, doi:10.3791/53550 (2016).

View Video