Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil
Summary
The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.
Abstract
Influenza A virüs hızla domuz toplumlarda gelişir ve yeni suşlar ortaya çıkmaya devam ediyor, çünkü domuz influenza A virüsleri için Gözetleme insan ve hayvan sağlığına için çok önemlidir. Domuz onlara çıkması ve yeni influenza A virüsünün bakımı suşları için önemli ana yapım influenza A virüsünün farklı soy tarafından enfekte edilmesi mümkün bulunmaktadır. Böyle ticari domuz çiftlikleri, tarım fuarları ve canlı hayvan pazarlarında gibi çeşitli ortamlarda domuz Örnekleme halen IAV suşları dolaşan kapsamlı bir görünüm sağlamak için önemlidir. Bu domuzların fiziksel kısıtlama gerektirdiğinden güncel altın standart ante-mortem örnekleme tekniği (burun bezlerden yani toplama) emek yoğundur. Burun mendiller hayvanın hiçbir kısıtlama minimal ile domuz burnu genelinde kumaş parçasını ovuşturarak barındırır. Burun prosedürü gerçekleştirmek için basit ve profesyonel veteriner veya hayvan taşıma eğitimi ile personel gerektirmez silin. Wnazal bezlerden biraz daha az duyarlı hile, virüs algılama ve izolasyon oranları nazal düşük stres örnekleme yöntemleri gerektiğinde bireysel domuz örnekleme için bir alternatif mendil yapmak için yeterli. Işlem protokolü uygulanabilir bir nazal toplamak için gerekli adımlar tek bir domuz silin özetliyor.
Introduction
Grip A virüsleri (IAV) evcil kuşlar, domuz ve insan da dahil olmak üzere pek çok türde, solunum hastalıklarına neden olur. Nedeniyle oluşabilir parçalı IAV genom hızlı viral evrim reassortment ve yeni IAV suşları sık sık ortaya çıkar. Domuz yaygın Kuzey Amerika domuz (H1N1, H1N2, H3N2) arasında dolaşan IAV üç ana alt tipi bulunmamaktadır. 1 birden çok ana türden iAVS yeniden yapılanması için bir karıştırma kabı olarak hizmet edebilen bir türün, ancak insan çoklu IAV tanıtımlar sahip Bu alt tipleri içinde yaygın IAV çeşitliliğe yol açtı. domuz bulaşmasını iAVS 2 Hızlı evrimi, insan, kuş ve domuz virüslerinin gen segmentleri içeren üçlü reassortant IAV 3 ABD'de domuzlar arasında yaygınlaşan 1998 yılından beri belirgin olmuştur. 4 dahili gen Bu üçlü reassortant IAV gelen segmentleri şu anda domuz bulaşmasını iAVS arasında oldukça yaygın kalır. 5
"> Dünya, IAV tipik klinik bulgular ateş, iştahsızlık, uyuşukluk, öksürük dahil olduğu domuz solunum hastalığı önemli bir nedenidir, burun akıntısı ve kilo alımının yetersiz hapşırma, nefes darlığı. IAV nerede üreme çiftlikleri ekmek özellikle pahalıya mal olabilir nedeniyle IAV kaynaklı ateş ve zayıf doğumlu domuz yavrusu başarısızlık belgelenmiştir. 6,7 Amerika Birleşik Devletleri içinde IAV yaygın ticari domuz sürüleri ve IAV bulaşmasını domuz arasında yaygın antijenik ve genomik çeşitlilik ve sürekli evrim tespit edildiğinde, bu kontrol engel olan Virüs. 8-11Üçlü reassortant Kuzey Amerika domuz soy ve Avrasya kuş-benzeri domuz soyundan gelen gen segmentleri içeren bir domuz-soy IAV dünya çapında bir salgın nedeniyle zaman 2009 yılında gerçekleşmiştir domuzlarda reassortment kaynaklanan bir salgın IAV soyunun ortaya çıkışı hakkında halk sağlığı kaygıları İnsanlarda. 12 pandemik virüs (A (H1N1) pdm09) beri varendemik domuz ile reassorted IAV 13,14 suşları ve bu yeni reassorted suşların bazı insanlara geri ahiren paylaşılmıştır. 15 reassorment olaylar ve pandemi potansiyeli olan yeni IAV suşlarının ortaya çıkması domuz zorunlu olarak IAV virüs dolaşımdaki aktif sürveyans yapar sıklığı, özellikle domuz-insan arayüzünde.
Domuz-insan arayüzü IAV çift yönlü türler arası iletimi için önemlidir. Insan-to-domuz ticari domuz üretiminde ortaya çıkan iletim domuz popülasyonda anda mevcut IAV çeşitlilik büyük miktarda sorumludur. Tarım fuarları ABD'de insanların domuz comingling için büyük ayarları ve bir varyant H3N2 IAV salgını sırasında, IAV zoonotik iletimi için siteler. 2012 yılında 15-21 bilinmektedir, vakaların% 93 katılımın bildirdi günlerde bir tarım fuarı hastalığın başlangıcında önce. 15 Genomik analizzoonotik iletim doğruladı insan izolatlar ile karşılaştırıldığında sergi domuzların viral izolatların. IAV ile enfekte 21 Sergi domuz genellikle doğrudan tanısal testler için ihtiyaç gösteren hastalık, 21-23 klinik belirtilerini göstermez.
Gözle görülür hasta domuz Örnekleme yalnız başarıyla domuzlarda IAV yaygınlığını tespit olmaz ve domuz arasında çıkan IAV yeni suşları belirlemek için dayanıyordu olamaz. Aktif sürveyans IAV ortaya çıkan suşlar domuzlarda ve domuz ve halk sağlığı hem de kendi tehdidi değerlendirmek tespiti için kesinlikle gereklidir. Çoğu IAV gözetim faaliyetleri gönüllü ve bu nedenle minimal yıkıcı yöntemlere ihtiyaç vardır vardır. IAV domuz bulaştırdıkları için üç önemli ölüm öncesi numune toplama prosedürleri vardır: Burun bezlerden, sözlü sıvılar ve burun mendil. IAV listesine sentetik elyaf sokulmasını algılamak için bireysel domuz örnekleme için akım tavsiyeler tercih edilen yöntem olarak burun deliklerine bezlerden uçluburun salgıları ve epitel hücreleri toplamak için. 24,25 domuz ya elle ya da bir tuzak hayvanın büyüklüğüne bağlı olan domuz dizginlemek gerekir bu prosedürü, eğitimli personel bir ekip önlemek için deneyebilirsiniz çünkü. 26 emniyet süreci için zahmetli personel ve domuzlar için stresli. Bir yarışma hayvan eklenen stres algısı gözetim çabalarına sahipleri dirençli yapabilirsiniz Ayrıca, sergi domuz genellikle fuarda birden yarışmalarda katılıyor.
80-100 den% IAV enfekte sürüler arasında değişen IAV algılama olasılıkları ile sözlü sıvılar domuzların popülasyonlarında IAV moleküler tespiti için bezlerden burun popüler bir alternatif haline gelmiştir. 27,28 Ayrıca, ağız sıvıları daha geniş bir pencere sağlayabilir İlk enfeksiyonu takiben nazal bezlerden daha IAV algılama. Ancak, ağız sıvılardan IAV izolasyon virus izolasyonu girişimleri sadece% 50'si IA ile sonuçlanan sorunlu olmuşturV kurtarma. 29
Domuzlarda IAV gözetim sırasında burun bezlerden yerine burun mendil kullanarak yukarıda açıklanan sınırlamalarının üstesinden gelir. Nazal mendiller bir yasaklama tuzak kullanımını gerektirmeyen ve prosedürün hayvan veya tanıkları zorlamadan yapılabilir. Minimal teknik eğitim gözetim örnekleri toplamak için, domuz sahipleri de dahil olmak üzere sivil veteriner profesyonelleri, izin verir burun mendil, toplamak için gereklidir. Burun silme bezleri, daha önce A virüsü 30 ve örnekleme bu invazif olmayan bir yöntem için ayrıntılı bir protokol, aşağıda tarif edilmiştir algılama ve grip izolasyonu için burun bezlerinde karşılaştırılmıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Polyester uçlu nasal swapları ile domuz örnekleri toplanması IAV gözetim yürütülmesi yararlı olduğu kanıtlanmıştır; Ancak, nazal sürüntü prosedürünün kullanılması kısıtlama için tuzak gerekli kullanımı nedeniyle gözetim çabalarını engellemektedir. Burun mendil numune toplama sırasında insanlar ve domuzlar üzerinde stresi en aza indirmek için mevcut domuz örnekleme teknikleri bir arıtma temsil etmektedir. Yöntem için geliştirilen ve sergi domuz ayarlarında valide edilmiş olsa da …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.
Materials
| BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicillin G Sodium Salt | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
| Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Gentamicin Solution | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Amphotericin B Solution | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
| Kanamycin Sulfate | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Nalgen Diagnostic Bottles | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE with white PP closure |
| Dermacea Gauze Sponge, 8 ply | Covidien | 441211 | 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) |
| Nitrile Exam Gloves | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
References
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: new perspectives on the human-animal interface. Trends Microbiol. 23, (2015).
- Zhou, N. N., et al. Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs. J. Virol. 73 (10), 8851-8856 (1999).
- Webby, R. J., et al. Evolution of swine H3N2 influenza viruses in the United States. J. Virol. 74 (18), 8243-8251 (2000).
- Vincent, A., et al. Review of influenza A virus in swine worldwide: a call for increased surveillance and research. Zoonoses Public Health. 61 (1), 4-17 (2014).
- Karasin, A. I., Olsen, C. W., Anderson, G. A. Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana. J. Clin. Microbiol. 38 (6), 2453-2456 (2000).
- Zhou, N. N., et al. Emergence of H3N2 reassortant influenza A viruses in North American pigs. Vet. Microbiol. 74 (1-2), 47-58 (2000).
- Corzo, C. A., et al. Active Surveillance for Influenza A Virus among Swine, Midwestern United States, 2009-2011. Emerg. Infect. Dis. 19 (6), 954-960 (2013).
- Lorusso, A., et al. Genetic and antigenic characterization of H1 influenza viruses from United States swine from 2008. J. Gen. Virol. 92 (Pt 4), 919-930 (2011).
- Loving, C. L., et al. Efficacy in pigs of inactivated and live attenuated influenza virus vaccines against infection and transmission of an emerging H3N2 similar to the 2011-2012 H3N2v. J. Virol. 87 (17), 9895-9903 (2013).
- Vincent, A. L., et al. Efficacy of inactivated swine influenza virus vaccines against the 2009 A/H1N1 influenza virus in pigs. Vaccine. 28 (15), 2782-2787 (2010).
- Smith, G. J., et al. Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic. Nature. 459 (7250), 1122-1125 (2009).
- Vijaykrishna, D., et al. Reassortment of Pandemic H1N1/2009 Influenza A Virus in Swine. Science. 328 (5985), 1529 (2010).
- Ducatez, M. F., et al. Multiple Reassortment between Pandemic (H1N1) 2009 and Endemic Influenza Viruses in Pigs, United States. Emerg. Infect. Dis. 17 (9), 1624-1629 (2011).
- Jhung, M. A., et al. Outbreak of variant influenza A(H3N2) virus in the United States. Clin. Infect. Dis. 57 (12), 1703-1712 (2013).
- Vincent, A. L., et al. Characterization of an influenza A virus isolated from pigs during an outbreak of respiratory disease in swine and people during a county fair in the United States. Vet. Microbiol. 137 (1-2), 51-59 (2009).
- Killian, M. L., et al. Simultaneous Infection of Pigs and People with Triple-Reassortant Swine Influenza Virus H1N1 at a U.S. County Fair. Zoonoses Public Health. 60 (3), 196-201 (2013).
- Wong, K. K., et al. Outbreak of influenza A (H3N2) variant virus infection among attendees of an agricultural fair, Pennsylvania, USA, 2011. Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1937-1944 (2011).
- Bowman, A. S., et al. Molecular evidence for interspecies transmission of H3N2pM/H3N2v influenza A viruses at an Ohio agricultural fair, July 2012. Emerg. Microbes. Infect. 1 (10), e33 (2012).
- Wells, D. L., et al. Swine influenza virus infections. Transmission from ill pigs to humans at a Wisconsin agricultural fair and subsequent probable person-to-person transmission. JAMA. 265 (4), 478-481 (1991).
- Bowman, A. S., et al. Swine-to-human transmission of influenza A(H3N2) virus at agricultural fairs, Ohio, USA, 2012. Emerg. Infect. Dis. 20 (9), 1472-1480 (2012).
- Bowman, A. S., Nolting, J. M., Nelson, S. W., Slemons, R. D. Subclinical influenza virus A infections in pigs exhibited at agricultural fairs, Ohio, USA, 2009-2011. Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1945-1950 (2012).
- Gray, G. C., et al. Influenza A(H1N1)pdm09 Virus among Healthy Show Pigs, United States. Emerg. Infect. Dis. 18 (9), 1519-1521 (2012).
- Van Reeth, K., Brown, I. H., Olsen, C. W., Zimmerman, J. J. Ch. 40, Influenza virus. Diseases of Swine. , 557-571 (2012).
- Culhane, M. R., Detmer, S. E., Spackman, E. Ch. 21, Sample types, collection, and transport for influenza A viruses of swine. Methods in Molecular Biology. Animal Influenza Virus, 259-263 (2014).
- Sheldon, C. C., Sonsthagen, T., Topel, J. A. . Animal Restraint for Veterinary Professionals. , (2006).
- Detmer, S. E., Patnayak, D. P., Jiang, Y., Gramer, M. R., Goyal, S. M. Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples. J. Vet. Diagn. Invest. 23 (2), 241-247 (2011).
- Goodell, C. K., et al. Probability of detecting influenza A virus subtypes H1N1 and H3N2 in individual pig nasal swabs and pen-based oral fluid specimens over time. Vet. Microbiol. 166 (3-4), 3-4 (2013).
- Romagosa, A., Gramer, M., Joo, H. S., Torremorell, M. Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs. Influenza Other Respir. Viruses. 6 (2), 110-118 (2012).
- Edwards, J. L., et al. Utility of snout wipe samples for influenza A virus surveillance in exhibition swine populations. Influenza Other Respir. Viruses. 8 (5), 574-579 (2014).
- Zhang, J., Harmon, K. M., Spackman, E. Ch. 23, RNA extraction from swine samples and detection of influenza A virus in swine by real-time RT-PCR. Animal Influenza Virus. , 277-293 (2014).
- Zhang, J., Gauger, P. C., Spackman, E. Ch. 22, Isolation of swine influenza virus in cell cultures and embryonated chicken eggs. Animal Influenza Virus. , 265-276 (2014).
- Bowman, A. S., et al. The Inability to Screen Exhibition Swine for Influenza A Virus Using Body Temperature. Zoonoses Public Health. , (2015).
- Prickett, J. R., Kim, W., Simer, R., Yoon, K. J., Zimmerman, J. Oral-fluid samples for surveillance of commercial growing pigs for porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus type 2 infections. J. Swine Health Prod. 16 (2), 86-91 (2008).
- Prickett, J., et al. Detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in porcine oral fluid samples: a longitudinal study under experimental conditions. J. Vet. Diagn. Invest. 20 (2), 156-163 (2008).
- Pepin, B., Liu, F. F., Main, R., Ramirez, A., Zimmerman, J. Collection of oral fluid from individually housed sows. J. Swine Health Prod. 23 (1), 35-37 (2015).
