The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.
مراقبة لفيروسات الأنفلونزا A في الخنازير أمر بالغ الأهمية لصحة الإنسان والحيوان بسبب فيروس الانفلونزا يتطور بسرعة في السكان الخنازير وسلالات جديدة آخذة في الظهور باستمرار. الخنازير قادرة على أن تصاب الأنساب متنوعة من فيروس إنفلونزا أي جعلها تستضيف مهم لظهور وصيانة أنفلونزا رواية A سلالات الفيروس. أخذ العينات الخنازير في إعدادات متنوعة مثل المزارع التجارية الخنازير، المعارض الزراعية، وأسواق الحيوانات الحية مهم لتوفير رؤية شاملة لتعميم حاليا سلالات IAV. وقبل الوفاة تقنية أخذ العينات الحالية معيار الذهب (أي جمع مسحات الأنف) هي العمل المكثفة لأنه يتطلب ضبط النفس الجسدي من الخنازير. مناديل الأنف تنطوي على فرك قطعة من القماش عبر خطم الخنزير بدون أدنى درجات ضبط النفس من الحيوان. الأنف مسح إجراء بسيط لأداء و لا يتطلب موظفين ذوي البيطرية المهنية أو التدريب التعامل مع الحيوانات. While قليلا أقل حساسية من مسحات الأنف، ومعدلات الكشف عن الفيروسات والعزلة كافية لجعل الأنف مناديل بديل قابل للتطبيق لأخذ عينات الخنازير الفردية عندما يطلب الضغط المنخفض طرق أخذ العينات. ويحدد البروتوكول إجراءات والخطوات اللازمة لجمع الأنف قابلة للحياة مسح من خنزير الفردية.
فيروسات الانفلونزا (IAV) تسبب أمراض الجهاز التنفسي في كثير من الأنواع، بما في ذلك الطيور الداجنة والخنازير والبشر. بسبب إعادة التشكيل من مجزأة IAV الجينوم الفيروسي التطور السريع يمكن أن يحدث وسلالات IAV جديدة تظهر في كثير من الأحيان. الخنازير هي الأنواع التي يمكن أن تكون بمثابة وعاء خلط لإعادة التشكيل من IAVs من الأنواع المضيفة متعددة. 1 يوجد حاليا ثلاثة أنواع فرعية رئيسية من IAV المتداولة عادة بين الخنازير في أمريكا الشمالية (H1N1، H1N2، H3N2)، ولكن مقدمات IAV متعددة من البشر لها أدى إلى تنوع IAV واسعة النطاق داخل تلك الأنواع الفرعية. وقد 2 التطور السريع لIAVs تصيب الخنازير واضحا منذ عام 1998 عندما متفارز الثلاثي IAV التي تحتوي على أجزاء من جينات من الفيروسات البشرية والطيور والخنازير 3 أصبح واسع الانتشار بين الخنازير في الولايات المتحدة. 4 الجين الداخلي ولا تزال شرائح من أن متفارز IAV الثلاثي واسع الانتشار بين IAVs اصابة حاليا الخنازير. 5
"> جميع أنحاء العالم، IAV هو سبب كبير من أمراض الجهاز التنفسي في الخنازير التي تشمل العلامات السريرية النموذجية الحمى وفقدان الشهية والخمول، والسعال وصعوبة التنفس والعطس ورشح الأنف وعدم زيادة الوزن. IAV يمكن أن يكون مكلفا ولا سيما لزرع المزارع حيث الإنجابية وقد تم توثيق فشل بسبب الحمى التي يسببها IAV والخنازير ضعيفة المولد. 6،7 داخل الولايات المتحدة، تم الكشف عن IAV عادة في قطعان الخنازير التجارية والتنوع الجيني الأنتيجين واسعة والتطور المستمر بين IAV تصيب الخنازير أعاق السيطرة على هذه فيروس 8-11شواغل الصحة العامة عن ظهور سلالة IAV الوبائية الناتجة عن الاندماج تلك في الخنازير تحققت في عام 2009 عندما IAV الخنازير النسب التي تحتوي على مقاطع جينية من الثلاثي متفارز أمريكا الشمالية النسب الخنازير ومثل أنفلونزا الطيور، نسب الخنازير الأوراسي تسبب وباء عالمي في البشر. 12 باء فيروس (A (H1N1) pdm09) منذ ذلك الحينreassorted مع الخنازير المتوطنة IAV سلالات 13،14 وبعض هذه السلالات reassorted حديثا قد أحيلت إلى البشر. 15 تواتر الأحداث بوادر ظهوره وظهور سلالات جديدة IAV مع القدرة على إحداث جائحة يجعل المراقبة النشطة للفيروسات IAV في الخنازير الضروري، وخاصة في واجهة الخنازير البشري.
واجهة-الخنازير البشري مهم للثنائي الاتجاه بين الأنواع انتقال IAV. من الانسان الى الخنازير انتقال تحدث في إنتاج الخنازير التجاري هو المسؤول عن كمية كبيرة من IAV التنوع الموجودة حاليا في عدد السكان الخنازير. المعارض الزراعية هي أكبر إعدادات comingling من الناس والخنازير في الولايات المتحدة، ومواقع لنقل الحيوانية من IAV. 15-21 وفي عام 2012 عرفت، خلال اندلاع البديل H3N2 IAV، ذكرت 93٪ من الحالات حضور خلال المعرض الزراعي في الأيام التي سبقت ظهور المرض. 15 تحليل الجينوممن العزلات الفيروسية من الخنازير معرض مقارنة مع العزلات بشرية مؤكدة انتقال الحيوانية. الخنازير المعرض 21 مصاب IAV في كثير من الأحيان لا تظهر العلامات السريرية للمرض، 21-23 تشير إلى الحاجة إلى اختبارات تشخيصية مباشرة.
أخذ عينات من الخنازير سوء واضح وحدها لا تحدد بنجاح انتشار IAV في الخنازير ولا يمكن الاعتماد على تحديد سلالات جديدة من IAV الناشئة بين الخنازير. المراقبة النشطة ضرورية للغاية للكشف عن سلالات الناشئة من IAV في الخنازير وتقييم تهديدهم لكل من الخنازير والصحة العامة. معظم أنشطة المراقبة IAV طوعية، وبالتالي هناك حاجة الأساليب التخريبية الحد الأدنى. إجراءات جمع العينات الثلاث الرئيسية السابقة للوفاة لIAV تصيب الخنازير هي: مسحات الأنف والسوائل عن طريق الفم، وتقضي على الأنف. التوصيات الحالية لأخذ عينات الخنازير الفردية للكشف عن قائمة IAV ادراج الاصطناعية الألياف يميل مسحات في فتحتي الأنف كما الأسلوب المفضللجمع الإفرازات الأنفية والخلايا الظهارية. 24،25 لأن الخنازير قد يحاول تجنب هذا الإجراء، قام فريق من الموظفين المدربين يجب كبح جماح الخنازير إما يدويا أو مع فخا تبعا لحجم الحيوان. 26 عملية ضبط النفس هي شاقة لل الموظفين، والمجهدة للخنازير. بالإضافة إلى ذلك، وغالبا ما تشارك المعرض الخنازير في مسابقات متعددة في معرض ذلك التصور مزيد من التوتر على حيوان المنافسة يمكن أن تجعل أصحاب مقاومة للجهود المراقبة.
مع احتمالات الكشف IAV تتراوح 80-100٪ في IAV قطعان المصابة، أصبحت السوائل الفموية شعبية بديلة لالأنف مسحات للكشف الجزيئي للIAV في السكان من الخنازير. 27،28 بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن توفر السوائل الفموية نافذة أوسع من كشف IAV من مسحات الأنف بعد الإصابة الأولية. ومع ذلك، فقد كان IAV بمعزل عن السوائل الفموية إشكالية مع 50٪ فقط من فيروس محاولات العزل مما أدى إلى IAV الانتعاش. 29
باستخدام مناديل الأنف بدلا من مسحات الأنف أثناء الترصد IAV في الخنازير يتغلب على القيود المذكورة أعلاه. مناديل الأنف لا تتطلب استخدام فخا الزجرية ويمكن أن يؤديها من دون مشددا على الحيوانات أو الشهود من هذا الإجراء. هناك حاجة إلى التدريب التقني الحد الأدنى لجمع مناديل الأنف، الذي يسمح للمهنيين غير للطب البيطري، بما في ذلك أصحاب الخنازير، لجمع عينات المراقبة. مناديل الأنفية وقد سبق بالمقارنة مع مسحات الأنف للكشف وعزل الإنفلونزا يوصف فيروس (30) وبروتوكول مفصلة لهذا الأسلوب غير الغازية لأخذ العينات أدناه.
جمع عينات من الخنازير باستخدام مسحات أنفية ذات الرؤوس البوليستر وقد ثبت مفيدة في إجراء المراقبة IAV. ومع ذلك، فإن استخدام الإجراء مسحة الأنف يعيق جهود المراقبة بسبب استخدام المطلوبة فخا لضبط النفس. مناديل الأنف تمثل صقل التقنيات الحالية أخذ العينات الخنازير لتقليل ا?…
The authors have nothing to disclose.
This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.
BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
Penicillin G Sodium Salt | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
Gentamicin Solution | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
Amphotericin B Solution | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
Kanamycin Sulfate | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
Nalgen Diagnostic Bottles | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE with white PP closure |
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply | Covidien | 441211 | 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) |
Nitrile Exam Gloves | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |