Расшифровка и визуализации патогенез и запи-<em> Микобактерии abscessus</em> У эмбрионов данио рерио

Mycobacterium abscessus является новым патогеном, который вызывает широкий спектр клинических синдромов у человека. Они включают в себя кожные инфекции, а также тяжелые хронические легочные инфекции, в основном, с которыми сталкиваются в ослабленным иммунитетом и при муковисцидозе пациентов ^1,2,3,4. М. abscessus также рассматривается в качестве основного быстрорастущих видов микобактерий, ответственных за внутрибольничными инфекциями и ятрогенных в людях. Кроме того, несколько последних докладах подчеркивается возможность, что М. abscessus может пересечь гематоэнцефалический барьер и вызывают важные поражений в центральной нервной системе (ЦНС) ^5,6. Несмотря на то, быстрое садовод, М. abscessus экспонаты также несколько патогенных особенности, связанные с тем, микобактерий туберкулеза, в том числе способность хранить молчание в течение многих лет в гранулематозных структур и генерировать казеозной поражений в легких. ⁷ Еще более тревожным является низкая сенательность М. abscessus к антибиотикам, что делает чрезвычайно трудным для лечения приводит к значительному терапевтическому отказов ^8,9 эти инфекции. Важно угроза этого вида, в основном, его внутреннее сопротивление к антибиотикам, что серьезную озабоченность в учреждениях здравоохранения ¹⁰ и противопоказания к трансплантации легких ^11.

M. abscessus отображает гладкие (S) или грубой (R) колонии морфотипов, которые приводят к различным результатам. Клинических В отличие от штамма S, R бактерии имеют тенденцию к росту конца в конец, что приводит к тросу или шнура, как структура, ^12,13. Несколько независимых исследований, основанных на клеточных либо или животных моделей выявлены гипер-вирулентность фенотип R морфотипом ^14,15. Из эпидемиологических исследований, наиболее тяжелых случаях М. abscessus легочные инфекции, кажется, связаны с R варианты ^{16, которые} только что вариантБыло видно, чтобы сохраняться в течение многих лет в инфицированном ^3. Разница морфотип полагается на наличие (в S) или убыток (в R) поверхностно-связанный glycopeptidolipids (GPL) ^12. Тем не менее, из-за ограничений, присущих имеющихся в настоящее время моделей сотовых / животных используются для изучения М. abscessus инфекция, наши знания о патофизиологических событий в R или S вариантов остается неясным. Заражение иммунокомпетентных мышей с помощью внутривенных или аэрозольных маршрутов приводит к транзиторной колонизации, препятствуя использованию мышей для изучения стойких инфекций и для в естественных условиях лекарственной чувствительности тестирования ^17. Таким образом, разработка моделей животных поддающиеся манипуляции принимающей ответ является серьезной проблемой. В этом контексте модели не млекопитающих инфекции были разработаны недавно, в том числе дрозофилы ^18, который предлагает несколько преимуществ, таких как стоимости, скорости и этическую приемлемость OVer модель мыши. Данио (Danio rerio) модель инфекции также были изучены для визуализации, по неинвазивной визуализации, прогрессии и хронологии М. abscessus инфекции в живого животного ^19. Важно отметить, что доказательство концепции было также установлено, чтобы продемонстрировать свою пригодность для естественных антибиотиков в оценках против М. abscessus ^17,20.

Данио были широко используется в течение последних двух десятилетий, чтобы изучить взаимодействие между различными возбудителями и иммунной системы хозяина ^21. Увеличение Успех этой альтернативной модели позвоночных опирается на крупных и уникальных возможностей, которые мотивированы и проверенных использовать его для лучшего понимания многочисленных вирусных и бактериальных инфекций ^{19,22,23,24,25,26,27,28,29.} В отличие от большинства других животных моделях, эмбрионы рыбок данио оптически прозрачны, что позволяет неинвазивным флуоресценции изображений ^30. Это гаы привело к изучению М. abscessus инфицированных эмбрионов данио с беспрецедентными деталей, кульминацией с описанием внеклеточного Перетяжка, которые представляют пример бактериальной морфологической пластичности. Кординг представляет собой новый механизм подрывной деятельности иммунной системы и ключевую механизм, способствующий патогенеза острого М. abscessus инфекции ^19.

Этот отчет описывает новые инструменты и методы, используя данио эмбриона, чтобы расшифровать патофизиологические черты М. abscessus инфекции и изучать интимные взаимодействия между бацилл и иммунной системы. Во-первых, Подробный протокол микроинъекции, который включает обработку бактериального инокулята, подготовки эмбриона, и инфекции как таковой, представлена. Методы адаптирован для оценки M. abscessus вирулентности путем измерения различных параметров, таких как выживание хозяина и бактериальной нагрузки, представлены. Особое внимание уделяется, какконтролировать, в пространственно-временном уровне, судьбу и развитие инфекции и иммунного ответа к М. abscessus с использованием видео-микроскопии. Кроме того, для изучения вклада и роли макрофагов при М. abscessus инфекции, методы получения макрофаги обедненного эмбрионов (используя либо genetically- или химически основе подходов), описанные. Наконец, протоколы для визуализации конкретных взаимодействия с макрофагами или нейтрофилами, используя фиксированные или живущих эмбрионов документально.

Целью данного отчета является стимулирование дальнейших исследований, чтобы пролить новый свет на М. abscessus механизмы вирулентности и, в частности роль сь в создании острого и неконтролируемой инфекции. процесса