Ultrasonic vocalizations (USVs) in mice differ depending on age, sex, condition, and genetic background. Using two ultrasound emitters broadcasting simultaneously in different locations, this two-choice test can evaluate murine recognition and preference responses to different characteristics of USVs.
Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, sex, condition, and genetic background of the emitting animal. Although many studies have characterized these differences, whether receiver mice can discriminate among objectively different USVs and show preferences for particular sound traits remains to be elucidated. To determine whether mice can discriminate between different characteristics of USVs, a playback experiment was developed recently, in which preference responses of mice to two different USVs could be evaluated in the form of a place preference.
First, USVs from mice were recorded. Then, the recorded USVs were edited, trimmed accordingly, and exported as stereophonic sound files. Next, the USV amplitudes generated by the two ultrasound emitters used in the experiment were adjusted to the same sound pressure level. Nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitters were used to play the USVs back. Finally, to investigate the preference of subject mice to selected USVs, pairs of two differing USV signals were played back simultaneously in a two-choice test box. By repeatedly entering a defined zone near an ultrasound emitter and searching the wire mesh in front of the emitter, the mouse reveals its preference for one sound over another. This model allows comparing the attractiveness of the various features of mouse USVs, in various contexts.
Molti animali usano vocalizzazioni per la comunicazione intraspecifica. Nel topo Mus musculus, uno importante tipo di segnale di comunicazione è vocalizzazioni ultrasoniche (USV), che hanno frequenze superiori a 20 kHz. USV emessi dai topi sono considerati una componente di riconoscimento sociale in maschio-femmina 1-4, femmina-femmina 1, 5, e maschio-maschio 1, 6 interazioni. USV vengono emessi anche da cuccioli quando sono isolate dalla loro madre, che aumenta il suo comportamento-pup recupero, e di conseguenza la sopravvivenza Pup 7. Anche se molti studi hanno analizzato e classificato USV del mouse 8, 9, le risposte comportamentali e meccanismi neurali dell'animale ricevente sono stati meno documentati 10, 11. Quest'ultimo è necessario per chiarire il significato biologico delle diverse caratteristiche di USV. Per rivelare questi meccanismi, l'esperimento di riproduzione è un metodo efficiente. Studi di riproduzione recenti hanno rivelato che femminilei topi sono attratti da USV 12, e che preferiscono USV da maschi che sono diversi dai loro genitori 13, 14.
Questo articolo spiega il test di riproduzione utilizzato per valutare USV preferenza nei topi. Una scatola test a due scelta è stata sviluppata in cui due USV differenti possono essere riprodotte contemporaneamente in due compartimenti di un contenitore di prova, come illustrato in Figura 1. Questo tipo di scatola di prova impedisce la contaminazione suono dividendo l'area di prova in tre sottocamere , con muri di piombo. Gli emettitori di ultrasuoni si trovano al di fuori di ogni stanza. Nel muro tra le camere e emettitori di ultrasuoni sono buchi coperti di rete metallica. Topi può muoversi liberamente nelle tre sale, e mostra una "ricerca della rete" comportamento, come se per rispondere a USV riprodotte dagli emettitori di ultrasuoni. In questo test, i topi soggiornare per periodi di durata diversa vicino a un emettitore sonoro o l'altro. Questi parametri possono essere registrati per ottenere un sensibile misu re di preferenza suono.
Per riprodurre i USV indietro, silicio nanocristallino emettitori termo-acustico (cioè, "emettitore nc-Si"), sono stati utilizzati come in studi precedenti 15-17. Questi dispositivi sono composti da un elettrodo a film sottile riscaldatore, uno strato di silicio poroso nano, e un wafer di silicio monocristallino. Il file audio digitale viene convertito in un segnale analogico e poi fatto passare attraverso l'elettrodo riscaldatore. Il dispositivo converte i segnali termici derivanti voltaggio-dipendenti in significativo di pressione sonora con bassa distorsione. Questo dispositivo è unico in quanto, a differenza di generatori di suoni comuni che dipendono da vibrazioni meccaniche, può riprodurre il suono senza la necessità di un diaframma. L'emettitore presenta un livello di pressione sonora piatta a frequenze da 20 a 160 kHz (figura 2), e può riprodurre USV murini digitalmente registrate molto accuratamente in termini di durata, frequenza e livello sonoro di pressione 15, 18, 19.
ve_content "> In un esperimento rappresentativo mostrato in Figura 3, C57BL / 6 (B6) femmine hanno permesso di scegliere tra BALB / c (BALB) USV maschi e rumore di fondo. Inoltre, la Figura 4 mostra la scelta delle femmine B6 e BALB tra riproduzioni USV simultanee da un topo BALB e un maschio B6, come riportato in un precedente studio 14. Le caratteristiche di USV maschili differiscono B6 e BALB ceppi 20. Come mostrato da questi risultati, l'attrattiva di USV può essere valutata con il presente protocollo, in cui i suoni sono registrati da un individuo dal vivo, acusticamente analizzati e riprodotti ad altri individui.Here, the results of a representative test showed that female mice can discriminate between artificial male USVs and background noise (Figure 3). The conclusion to be drawn from these results is that the discrimination signal is reflected in the duration of stay in the room and sound zone, and in the duration of searching the mesh in the first 5 min of testing, but not in the second 5 min (Figure 3C, E and F). These data indicate that mice become habituated to the playback sounds, possib…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa-in-Aid per JSPS Fellows a AA; da sovvenzioni-in-Aid per la Ricerca Scientifica sulle zone innovative per JSP Fellows (n 4501 e n 25.132.712) di TK; e da una borsa di progetto di ricerca assegnato dalla Azabu University. figura 2 è ristampato da Kihara, T., Harada, T., e Koshida, N. Wafer-compatibile fabbricazione e le caratteristiche del silicio nanocristallino emettitori di ultrasuoni indotte termicamente. In: Sensori e Attuatori A: fisiche, volume 125, Elsevier, pag. 426, (2006), con il permesso di Elsevier.
Soundproof chamber | Muromachi Kikai | ||
Small cage | CLEA Japan | CL-0113-1 | |
Middle cage | CLEA Japan | CL-0103-1 | |
Ultrasound condenser microphones | Avisoft Bioacoustics | CM16/CMPA | |
A/D converter | Avisoft Bioacoustics | UltraSoundGate116H | |
Audio software | Avisoft Bioacoustics | RECORDER USGH | |
Adobe Audition 3.0 / Audio editing software | Adobe Systems | Adobe Audition 3.0 | |
Nc-Si emitter | Original | not commercially available but it is planned to be so in near future | |
D/A converter | National Instruments | NI USB-6251 BNC | |
Attenuator | Original | ||
Amplifier | Yamatake | ||
PC | Windows 7 professional | Intel® core i7-2600K CPU @ 3.4GHz, 8GB RAM, 64-bit operating system | |
Event recorder Excel-macro / Event-scoring software | original | Programmed by Naoto Akagawa & Takeru Yamamoto | |
CCD Camera | |||
Rubber plates (made of elastomer resin) | Tokyo bouon | TI-75BK B4 | Cut them to the proper size http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3 |
Giemsa's azur eosin methylene blue solution | Merck Millipore | 1.09204.0500 |