Methode der Untersuchung Palatal Fusion mit statischen Organ Culture

Gesichtsspalten sind die vorherrschenden kraniofaziale Missbildungen. Auch bei Berücksichtigung aller möglichen kraniofazialen Defekten, dies sind die zweithäufigste Geburt Anomalien bei Neugeborenen ^2. Gaumenspalten bei ungefähr 1 in jeden 700 Geburten in den Vereinigten Staaten (US) jedes Jahr auftreten, ist die Inzidenz von Gaumenspalte gleich 475 Kinder mit Gaumenspalten pro Monat oder 15 Kinder mit Spalten pro Tag ³ geboren. Etwa 1% der Kinder geboren auf der ganzen Welt jedes Jahr weisen irgendeine Form von kraniofazialen Dysmorphien.

Klüften des Gaumens und der Lippen brauchen einen sehr teuren und komplizierten Verfahren mit lebenslangen Folgen für die Patienten, die diese Anomalie haben. Die geschätzten Kosten für jeden Patienten mit oralen Spalt beträgt ca. 100.000 $ ^4. Die Behandlung eines Patienten mit Lippen- und Gaumenspalte erfordert ein Team von Ärzten einschließlich Schädelchirurgen, HNO-Ärzte, Genetiker, Anästhesisten,Logopäden, Ernährungswissenschaftler, Kieferorthopäden, Zahntechniker, Psychologen, Neurochirurgen und Augenärzten.

In palatogenesis, stellt sich die sekundären Gaumen gepaart Auswüchse, die ursprünglich vertikal wachsen und unterziehen Gaumenregal Höhe über den Zungenrücken. Nach der Erhebung, wachsen die paarigen Gaumen Regalen in Richtung der Mittellinie (bei E14.5 -E15 bei Mäusen und Woche 9 bei Menschen). Der mediale Rand Epithel (MEE), die die Lagerspitze deckt haftet Bildung der Mittellinie epithelialen Naht.

Dies wird durch epitheliale zu mesenchymale Transition und / oder Apoptose gefolgt, um mesenchymale Fluss zu ermöglichen. Haftung der gegenüberliegenden MEE ist ein wesentliches Ereignis, dessen Veränderung bewirkt, Gaumenspalte. Allerdings untersucht nur wenige Studien, die Anfangshaftung der Gaumen Regalen ^5. Die harten Gaumen Formen durch Differenzierung von mesenchymalen Zellen in Osteoblasten. Die abnorme Entwicklung des Gaumens können Schlüssel zu erzeugent Gaumen mit oder ohne Beteiligung der Lippe.

Gaumen Organkulturtechniken hatte weithin für viele Labors in den letzten 30 Jahren ^6,7 verwendet.

In diesem Protokoll beschreiben wir im Detail ein Verfahren zur Gaumen Dissektion und statischer Organkultur. Der Vorteil eines bewegungsOrganKultur ist, dass es Gaumen Regalen zu verschmelzen. Diese Technik war erfolgreich in unserem Labor für viele Fusion und Signalisierung Experimenten ^8,9 verwendet. Aber der Schutzumfang der Technik ist beträchtlich und kann verwendet werden, wann immer statische Organkultursystem erforderlich ist, einschließlich der Bewertung der Reaktionen auf exogene chemische Mittel sein, die Auswirkungen regulatorischer Wachstumsfaktoren in verschiedenen Bahnen und bestimmten Proteinen.

Abbildung 1. Maus Palatogenesis. Entwicklungsstadien der Mäuse Gaumen. (BF) Scanning elecTRON Mikroskopische Aufnahmen (SEM) der Sekundär Gaumen an repräsentativen Entwicklungszeiten. Rote Pfeile: zeigen den Anfangsteil der Gaumen Adhäsion und Fusion. Gelbe Pfeile: Punkt, um den Raum zwischen den primären und sekundären Gaumen, die nach der Fusion verschwinden (nachgedruckt von Kaufman ¹¹ mit Genehmigung von PLoS ONE).