神経発達障害のマウスモデルにおける空間学習した後、海馬ニューロン活動の免疫組織化学的可視化

神経発達障害は、中枢神経系（CNS）の開発および成熟が中に早期に乱されたダウン症候群、脆弱X症候群（FXS）、レット症候群、神経線維腫症、結節性硬化症やASD、などの障害の広い異種基などが挙げられます出生前の期間^1。これらの発達脳機能障害は、運動機能、言語、学習と記憶のプロセスに深刻な、生涯影響を引き起こす可能性があります。遺伝的要因と環境要因の過多は、ここ数年の間に^2,3神経発達障害の病因に関与しています。臨床表現型の根底にある分子メカニズムは不明のままであっても、上記の知見は、これらの障害のいくつかのマウスモデルの開発を可能にしています。学習および記憶障害には、TSC1 ^{+/-、TSC2 +/-}としてこれらのマウスモデルの数が特定されています、NF1 ^+/-と EN2 ^{– / –}マウス^2,4-7。神経発達障害の分野における重要な課題は、記憶や学習障害の基礎となる細胞および分子プロセスの同定です。学習または記憶の間に活性化、選択のシグナル伝達経路は、特定の遺伝子の転写を誘導し、最終的にデノボのタンパク質合成につながることができます。即時初期遺伝子（IEGs）の活性化およびタンパク質依存性シナプス修飾は、急速に神経活動と行動訓練^8,9に応じて脳の神経細胞に誘導されます。

ニューロフィブロミンを含むシグナル伝達経路の欠損は神経発達障害における学習障害と関連しています。ニューロフィブロミンは、変異神経線維腫症1型の原因となるNF1遺伝子、神経系腫瘍によって特徴付けられる複雑な遺伝性症候群、行動、モータ遅延、および認知DISAの製品ですbilities ^10。抑制性ニューロンに制限NF1欠失についてヘテロ接合マウスは、長期増強（LTP）の初期段階だけでなく、MWM ^5,11,12、侵入した空間学習の欠損を示します。興味深いことに、このマウスモデルにおけるNF1欠損が増加ERKのリン酸化、最終的にこれらのニューロン⁵からのGABA放出の異常な増強を生じ、学習の間に介在阻害におけるRASシグナリングの過剰活性化をもたらします。

これらの知見に基づいて、行動タスク後の神経活動の可視化は、神経疾患に関与する特定の回路を再構成する方法を示しています。ここで説明する免疫組織化学プロトコルは、認知障害とASDマウスモデルにおいてMWMを次の海馬ERKリン酸化レベルを評価し、定量化することを目指しています。 MWMは広くげっ歯類^13,14に海馬依存空間学習および記憶を調べるために使用され</s>アップ。我々は、ERKは、学習と記憶形成の¹⁵において重要な役割を有することが示されたため、タスク依存海馬学習の分子読み出しとしてERKリン酸化を使用することを決定しました。また、ERK経路は、開発視覚野¹⁶における経験依存的可塑性のために必要です。最後に、CNSショーで2 ERKアイソフォーム（ERK2）のいずれかを欠損したマウスは、ERKシグナルは、ASDなどの神経発達障害の病因に重要な役割を果たしている可能性があることを示し、認知感情的、社会的行動¹⁷の異常をマーク。

神経発達障害のモデルとしてマウス（ ^{– / –}たEn2）私たちは、エングレイルド2ノックアウトを使用していました。 EN2 ^{– / –}マウスは、前脳の介在¹⁸の損失を含む解剖学的および行動「ASD様」機能では、ASD関連遺伝子¹⁹の発現低下を示し、社交性を減少し、損なわれた認知の柔軟性^6,7,20。空間learni^{– / –}マウス^6,7および²¹ ASD患者で観察された認知機能障害に関連する可能性があるようなMWMで検出されたものとしてNGとメモリの欠陥は、たEn2、特に堅牢です。 ^{– / –}成体マウス⁷さらに、我々は、MWMにおける減損空間学習が減少ニューロフィブロミンの発現に関連するとEN2の門でのpERKレベルを増加させることが示されました。ここでは、このASDマウスモデルにおいてMWMを次のpERKの免疫組織化学的特性評価のための詳細なプロトコールを提示します。