פלייט מדרגי 96-גם בהתבסס iPSC תרבות וייצור באמצעות מערכת רובוטית טיפול נוזל

פיתוח של פלטפורמת תרבות תאי גזע רובוטית צלחת מבוססת. הביקוש לiPSCs גדל עקב שירותם בפיתוח תרופות ורפואת רגנרטיבית. עם זאת, ייצור להרחבה התמקד בתרבות השעיה 32 בציוד מורכב יחסית שאינם כולל חוקרים רבים וסוטים מן שיטות תרבות חסיד הוקמו. במקום באופן דרסטי לשנות שיטות צלחת מוכחת גזע מבוסס תרבית תאים, כגון מעבר לתרבות השעיה או באמצעות microcarrier, התמקדנו בminiaturizing ומיכון הטכניקות הקיימות שלנו חסיד iPSC התרבות. המטרה הראשונה הייתה להפוך האכלה וpassaging לנרמל את תהליך התרבות השלם. פלטפורמה מסוגלת קנה מידה עד מהיר עם טכנולוגיה הקיימת נדרשה גם. כדי להשיג מטרות אלה שיטה תוכננה לתאי גזע התרבות בצלחת 96-היטב ניצול מערכת אוטומטית טיפול נוזלי (איור 1). Protocols פיתח כאן עם רובוט הטיפול הנוזלי להאכלה והמעבר אינו דורש צעד צנטריפוגה או ניטור רציף על ידי טכנאי. פרוטוקולים אלו פותחו עם שני קווי iPSC חופשיים מזין; אחד נגזר מfibroblasts ואחרים מתאי שומן 33. מערכת הטיפול נוזלי המחשב מבוקר (איור 1 א) מורכבת ממשטח אופקי שנע קדמית ואחורי. יש המיטה תשע, כ נבכי ממוספרים 5 x 3.3 אינץ 'עם לחץ שמירת קטעים לקבל צלחות תרבית תאים סטנדרטיים, מאגרים נוזליים וחומרה מותאמת אישית אחרת. מהלכי ראש pipet שמאל לימין (בניצב לתנועת מיטה), כמו גם למעלה ולמטה. יחד עם המיטה, ראש פיפטה ניתן לתכנת כדי להסיר או לספק תקשורת בכל מקום במיטה אחרי שלקחתי את הטיפים פיפטה ממדף פעמי. במידת צורך, כל אחד מ96-הבארות יכול להיות כל הזמן נפרד כדי למנוע זיהום צולב. בתצורה הנוכחית, 0 ל200 μl של תקשורת יכולה להיות מועבר על ידי כל קצה של ראש pipet, אבל טווחי נפח אחרים אפשריים המבוססים על גודל קצה. כאשר passaging תאי גזע בצלחות סטנדרטיים, האנזימטית או ניתוק כימי בדרך כלל דורש דגירה על 37 מעלות צלזיוס. בדיקה ראשונית אישרה ניתוק עם מפרקי חלבונים ומגיבים ניתוק collagenolytic או מגיב מבוסס EDTA ביצע טוב יותר ב 37 מעלות צלזיוס מ RT הן לזמן לניתוק וההומוגניות של גודל מושבה הופק עבור שני 96 גם הקווים שלנו iPSC (מידע לא מוצג). כדי להפוך את תהליך הפיצול ולמנוע העברת צלחות ובמתוך חממה, רמפות שקבלו משופעת, טמפרטורה מבוקרת וreproducibly למקם תרבות צלחות סטנדרטית נבנו (איור 1 א). כאשר הרמפות היו מחוממות ל -37 מעלות צלזיוס, מפרקי חלבונים ומגיבים ניתוק collagenolytic או ניתוק מבוסס EDTA של iPSCs מ96-גם צלחות היה דומה לצלחות להציב 37 ° C חממה (n נתוניםמוצג ot). הרמפות המשופעות גם נוצלו כדי לאפשר טיפים pipet לאסוף תוכן של היטב כל (פחות מ -5 נפח שייר UL) על ידי הגעה לנקודה הנמוכה ביותר בבאר אילו שאיפה מצלחת שטוחה עזבה נפח שייר של כ 10-15 μl, וכתוצאה מכך באובדן תא. הרמפה המשופעת גם אפשרה לבארות להישטף (triturated) על ידי תקשורת ולהוציא בחלק העליון של משופע היטב ולאסוף אותו בתחתית. תרבות רובוטית של תאי גזע בפורמט צלחת 96-היטב; האכלה וpassaging. יש תרבות של iPSCs באמצעות מערכת טיפול נוזל רובוטית שני שלבים; מעבר והאכלה. כאשר מושבה מוכנה למעבר, זה מחולק ביחס שנקבע מראש לזרע צלחת חדשה אשר לאחר מכן מוזנת במרווחי זמן קבועים עד שהוא מוכן למעבר שוב (איור 1). ניתן להתחיל תרבויות קפואות או אי-96-גם בפורמט 96-היטב ונכנסות למעבר / הזנה מיידמחזור. תאים שאינם משמשים לשמירה על המושבה, המהווה את הרוב המכריע של צלחת, נקצרים לשימושים אחרים ומייצגים את רכיב הייצור של מערכת זו. האכלת 96-היטב iPSCs התרבותי היא מושלמת כאשר כל התקשורת או מוסר לאחר תקופה של התרבות והופקד במאגר פסולת. אז תקשורת טריה aliquoted לאותה הצלחת. הרובוט יכול להשתמש טיפים חדשים ושקתות תקשורת להפריד כל גם להאכלה להתאמה אישית מלאה, כוללים מיזוג תקשורת ממוזגת עם מדיה חדשה. מעבר אופייני של תאי גזע דורש שיטה של ​​ניתוק ולעתים קרובות צעד צנטריפוגה. הפרוטוקולים שתוארו כאן נועד לנרמל ניתוק ולחסל צנטריפוגה. פרוטוקול המעבר מתחיל כאשר הרובוט מספק מגיב דיסוציאציה ל96-גם צלחות רכוב על 37 מעלות רמפות משופעים C. לאחר זמן מוגדר מראש, התאים ניתקו נאספים עם פעולת שטיפה שבו יש למשתמש לניהול עבודותl על העמדה, חזרה, נפח, ושיעור טחינה דקה. זמן אנזים, שיעור טחינה דקה ומספר חזרות טחינה דקה היו מספיק כדי להשתנות גודל ניתק מושבה והומוגניות (איור 2), אבל בכל פרמטר הוא מתכוונן כדי להתאים לדרישות של קו תא נתון. שליטה זו מסירה שונות שהוצגה על ידי טכנאים שpipet עם שיעורים משתנים, עמדות, וחזרתי שוב ושוב. ברגע שהתאים ניתק נאספים ונקוו במאגר עם תקשורת טרי, הם מופצים לצלחת חדשה. כדי להימנע מבעיות צנטריפוגה וזריעה משפלת מצע או המוות של תאים עקב אנזים פעולה, מגיב ניתוק היה מדולל לנקודת המינימום של דיסוציאציה המקובלת שהביאו לזריעה אמינה. טכניקה זו הייתה יעילה למפרקי חלבונים ומגיבים ניתוק collagenolytic במדיום mTeSR1 34, שבו יש תכולת חלבון גבוהה יחסית, אלא גם יעילה בתקשורת חלבון נמוכה כמו חיוניים-8 35 </sup>, שניהם תואמים למערכת זו (נתונים E8 לא מוצגים). השליטה צפיפות הזריעה של תאי גזע לאחר המעבר היא בעל חשיבות עליונה לתרבות תאי גזע שגרתית ומוצלחת. זריעה נמוכה מדי או גבוה יכולה לגרום לבידול ואובדן pluripotency בנוסף לגרימת מרווחי מעבר סדירים מחוץ לרחם. תרבות תאי גזע טיפוסית מסתמכת על פיצול יחס שבו גם אחד מצלחת 6-גם משמש לזרע צלחת כל חדשה 6-היטב (1: פיצול 6). עם רובוט הטיפול הנוזלי יחס זה יכול להיות מותאם כדי להתאים לצרכימים של המשתמש (לדוגמה, 1: 6, 1: 9, 01:12, וכו ') ויש לה ההשפעה הרבה ביותר על מרווח המעבר. הרובוט יכול לקצור עמודה פחות מ, עמודה אחת שלמה (8 בארות), או יותר מעמודה אחת בהתאם לצרכים של המשתמש, אשר אמורים להיקבע באופן אמפירי. IPSCs שומן ופיברובלסטים נגזר שמר את לוח הזמנים של שלושה ימים רגילים האכלה עם מעבר ביום הרביעי כשלפצל 01:12. במקרה זה עמודה אחת נקצרה ומשמשת לזרע 96-גם צלחת חדשה אחד, יצירת פיצול 01:12 עם כל מחזור (איור 3 א). 11 בארות הנותרות היו אז זמינות עבור יישומים במורד הזרם. למסוק בארות ייצור אלה 11, פרוטוקול המעבר חזר על עצמו, פרט לתאים הופקדו לשוקת לאוסף. לחלופין, ניתן להשאיר את התאים על הצלחת ולהשתמש בם ישירות. כדי להשיג מעבר צפיפות זריעה עקבי למעבר בלי לספור, ולשמור על לוח זמני פיצול שיגרתי, הפרוטוקולים שלנו קוראים לפיצול אותו המספר קבוע מראש של עמודות כאשר המושבה היא בצפיפות אידיאלית למעבר. כדי לסייע למשתמשים לזהות את הצפיפות הנכונה למעבר, סדרה של תמונות נוצרה מראה מגוון של צפיפויות עם צפיפות אידיאלית מעבר המודגש (איור 3). כדי לקבוע מתי מעבר, טכנאי בוחן הצלחת שלהם ומשווה אותו לקנה מידת תמונת צפיפות. הרעיוןצפיפות l למעבר נקבעה מהתרבות של iPSCs השומן ופיברובלסטים נגזרים ונמצאה שכאשר המרחב בין רוב המושבות היה כ -25% מקוטר מושבה סמוך. חשובה שהמושבות תחולקנה homogenously. סכום זה של הפרדת מושבה בקורלציה עם הצפיפות הרצויה המרבית כי מחזור האכלה נוסף אחד יביא מושבות נגיעה, אשר הוא הטריגר לבידול מחוץ לרחם. פרוטוקול הכרחי פיתח כאן מתייחס איך להתחיל תרבות בפורמט 96-היטב וכיצד לאפס תרבות לאחר בעיה צפיפות. כאשר תרבות חדשה שנפתחו, הצפיפות הטובה ביותר הזריעה ומספר מחזורי האכלה לפני passaging אינן ידועות. כדי להבטיח צפיפות שמישה לאחר זריעה, הרובוט מפיץ תאים קיימים או מופשרים פני צלחת 96-היטב בדילול סדרתי (איור 4 א). תוצאות דוגמא של שיפוע כזה מוצגות באיור 4 ב-E. לאחר כמה האכלהמחזורים, כמה עמודים להתקרב הצפיפות האידיאלית לפצל, ובשלב זה טכנאי משתמש ברובוט זרע צלחת דילול אחיד להתחיל תרבות רגילה. פרוטוקול שיפוע צפיפות זה היה בשימוש גם כדי לשחזר מרווחי מעבר רגילים והומוגניות מושבה לצלחת לא סדירה. אם מעבר מתעכב או שלא נענו, צפיפות מושבה והגודל הפכו גבוהות מדי, בעוד שאם מעבר הוא מוקדם מדי, צפיפות מושבה היא נמוכה מדי ומושבות בודדות עשויות להיות גדולות מדי, בלי שמופצים באופן שווה על פני היטב. פרוטוקול שיפוע הצפיפות פותר בעיות אלה ומאפשר למשתמש להפעיל מחדש על ידי בחירת סט זורעים באופן אידיאלי של בארות. שני קווי iPSC נשארו pluripotent לאחר 3 חודשים של תרבות רובוטית. תחזוקה של pluripotency בתאי גזע יכולה להיות מושפעת לרעה על ידי תנאי תרבות 36,37. כדי להעריך אם שומן ופיברובלסטים נגזרו קווי iPSC (-iPSC, F-iPSC, בהתאמה) נשמר pluripotency כאשר בתרבית רובוט ב96-גם צלחות לתקופה ארוכה של זמן, שני הקווים היו בתרבית בנוזל טיפול רובוט כפי שתואר לעיל במשך 3 חודשים ולאחר מכן סמני pluripotency נבדקו. לתקופה זו שני הקווים היו passaged עם מגיב ניתוק פרוטאוליטים וcollagenolytic יותר מ -20 פעמים ללא צנטריפוגה. 96-גם צלחות קבועים מ- iPSC וקווי F-iPSC המוכתם לOct4 וNanog הציגו הצטברות גרעינית של סמנים אלה תוך SSEA-4 נצפה על פני התא (5A-L איור). זה עולה בקנה אחד עם דיווחים קודמים לiPSCs pluripotent 38-41. Counterstaining עם DAPI לא חשף את כל תאים נוספים שלא היו גם חיובי לשלושה סמני pluripotency. פגמים בכרומוזומים הם נצפו נפוצים בתאי גזע תרבות 42,43 אבל לא יכולים להשפיע על חלוקת סמני pluripotency כמו אלה שמוצגים באיור 5 א-L. Kניתוח aryotype גילה לי שני קווי iPSC רובוט passaged 46 כרומוזומים רגילים, דבר המצביעים על שיטת התרבות רובוטית לא הציגה חוסר יציבות כרומוזומלית מעבר למה שעלול להתרחש בדרך כלל (איור 5M-N). לחקור ביטוי גנים בתאי גזע הוקם סמני 1,41,44,45 בקווי iPSC רובוט התרבותיים, רנ"א הכל נאסף במקביל למכתים וניתוח קריוטיפ. היו שני קווי iPSC צלחת 96-היטב ביטוי דומה של סמני pluripotency NANOG, POU5F1 וREX1 אילו cardiomyocytes מובחן מכל שורה לא, וגם לא בשורה נפרדת של fibroblasts עורי האנושי (HDFs) (איור 6). Cardiomyocytes נגזר משני הקווים היו MYL7 חיובי ואילו HDFs ותאי גזע לא הביעו MYL7. שני קווי iPSC הובדלו לשריר לב עם המולקולה הקטנה, טכניקת מניפולציה מסלול ה- Wnt תיארה לאחרונה 46 </sup>. כאשר מוכתם, שריר לב משני הקווים היו cTnT חיובי עם היווצרות ברורה sarcomere (איור 7). בידול לתוך שריר לב בפורמט 96-גם היה מוצלח בגדול יותר מ -80% מהבארות (מידע לא מוצג). יחד, נתונים אלה מצביעים על 3 חודשים ויותר מ -20 קטעים של תרבות רובוטית הביאו תאי chromosomally רגילים מציגים תכנית שעתוק בקנה אחד עם pluripotency שהיו גם מסוגל בידול לשריר לב. מערכת () לכיסוח נוזל טיפול מוצגת עם פריסה טיפוסית מיטה לאיור 1. סקירה כללית של ציוד תרבית תאי גזע רובוטית ושגרת תרבות iPSC טיפוסית. 96-גם נובע תרבית תאים. ריאגנטים נוזליים טיפים חדשים סטרילי pipet (טיפים), מיכל נשלף פסולת קצה (פסולת), רב גם שוקת autoclavable למחזיקים נדרשים (נוזלים), 96-גם צלחות ממוקמות ד נתמך בטמפרטורה מבוקרת, רמפה משופעת (96-גם צלחות), 8 ראש pipet רובוטית ערוץ שזז (ראש Pipet) שמאלה / ימינה ולמעלה / למטה. מדף צלחת מכסה מחזיק (PLHR). מספרי עמדת המיטה מוצגים להלן בטבלה. יש תרבות (ב) לכיסוח iPSC שני שלבים: האכלה ומעבר. המחזור של ייצור תאים מתחיל כאשר צלחת מושבה מוכנה למעבר. המשתמש בוחר את היחס הרצוי למעבר ובזרעי רובוט קבוצה חדשה של 96-גם צלחות אז האכילו במרווחים זמן קבועים עד מוכן למעבר שוב. כאשר הצלחות מוכנות למעבר, רוב כל צלחת אינו משמש לזרע צלחות מושבה שלאחר מכן, והוא זמין לשימושים אחרים, ובכך מייצג את שלב הייצור של המערכת. יכולות להיות הציגו שורות תאים קפואות או קיימות בכל עת ומתוחזק במחזור ההזנה / המעבר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. e_content "FO: לשמור-together.within עמודים =" תמיד "> איור 2. פרמטרים טיפול נוזל רובוטית יכול לשמש כדי לשלוט מאפייני ניתוק המושבה iPSC. כל תמונת נציג תערוכות iPSCs פיברובלסטים נגזרים ניתק לאחר הטיפול המצוין ועדיין תלוי ב96-היטב. (למעלה שורה, – C) אנזים זמן, אין טחינה דקה. iPSCs נגזר פיברובלסטים גדל ב96-גם צלחות היו נתונים להגדלת זמנים של מפרקי חלבונים ודיסוציאציה מגיב ניתוק collagenolytic ולא טחינה דקה רובוטית בוצע. שיעור טחינה דק, 3 דקות אנזים – (F בשורה אמצעי, ד). תאים נחשפו לשלוש דקות של מפרקי חלבונים וטיפול מגיב ניתוק collagenolytic ואז תקשורת צמיחת 175 μl יושמה וכל pipetted גם למעלה ולמטה פעם אחת בשיעור שצוין. μl / sec = p מיקרוליטראה שני. (בשורה תחתונה, G – I) טחינה דקה חזרות, 3 אנזים דקות, 160 μl / sec. תאים נחשפו למפרקי חלבונים ומגיבים ניתוק collagenolytic במשך 3 דקות, 175 תקשורת צמיחת μl יושמה, אז triturated 160 μl / שניות למספר מצויינים של חזרות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. איור 3. שומן טיפוסי וערכת תחזוקת מושבה פיברובלסטים iPSC וסדרה של תמונות צפיפות מושבה כדי לקבוע מתי מעבר לשמור על מחזור ההאכלה / מעבר רגיל. (א) החלו בשומן או פיברובלסטים 96-היטב מושבה iPSC מוכן למעבר, עמודה אחת של תאים הייתה passaged ברובוט ללא צנטריפוגה ומדוללתעד 12 עמודים חדשים שהואכלו במרווחים מסוימים לאחר מכן עד הצלחת הייתה מוכנה למעבר שוב. לייצור תאים, עמודות לא משמשות כדי לשמור על המושבה היו passaged ונאספו לשימוש מאוחר יותר. כל מספר של עמודות ניתן passaged לשלוט קצב התרחבות. (ב) כדי לקבוע מתי מעבר, סדרה של תמונות שנתפסו צפיפות כל שעות 24 הועמדו למשתמשים. בתיבה האדומה העליונה (בתוך 72 שעות לאחר זריעה ראשונית) המושבה היא לא צפופה מספיק למעבר וצריכה להיות מוזנת. כאשר הצפיפות מתאימה שמוצגת בתיבה הירוקה (ב ~ 96 שעות), המושבה היא בצפיפות אידיאלית למעבר. על ידי 120 שעות, המושבה היא צפופה מדי למעבר ויש להימנע תרחיש זה. האחרונים עשויים להיפתר עם שיפוע צפיפות זריעה אבל תרבות שגרתית בצפיפות זה מאוד לא מומלץ. בר לבן שווה 200 מיקרומטר. אנא לחץ כאן לצפייה בversi גדולעל של נתון זה. איור 4. 96-גם מערכת התרבות רובוטית מאפשרת למשתמשים להתחיל תרבויות משורות תאים קפואות או פעילים ולבצע שיפוע זריעה. () פתרון תא הוא הוכן על ידי המשתמש ממניות תא קפוא או לאחר קצירת תרבות פעילה והניח על הרובוט. מערכת רובוטית לאחר מכן מבצעת פרוטוקול דילול סדרתי להפיץ את פתרון התא הראשוני לאורך צלחת 96-היטב עם שיפוע הצפיפות מופץ על ידי טור. (ב – ה) דוגמאות לצפיפות תאים מארבעת עשרה עמודים מ, 48 שעות לאחר זריעת פרוטוקול שיפוע צפיפות. קווים לבנים שווים 225 מיקרומטר. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של זהדמות. Pluripotency 5. איור נשמר לשומן ופיברובלסטים נגזרו קווי iPSC במהלך 96-גם תרבות רובוטית 22 (שומן) או 23 קטעים (פיברובלסטים) (~ 3 חודשים). (- L) שומן ושורות תאי פיברובלסטים נגזרים iPSC היו רובוט הפד וpassaged כמתואר בטקסט ללא צנטריפוגה ב96-גם צלחות במשך 22 או 23 מעברים אז קבועים ומוכתמים עבור סמני pluripotency Oct4, Nanog, או Ssea4 עם counterstain DAPI. בר לבן שווה 100 מיקרומטר. (M – N). תרבויות מקבילות לאלה המתוארים בהוגשו לניתוח קריוטיפ שחשף משלים רגילה של 46 כרומוזומים אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר oF נתון זה. iPSCs איור 6. שומני (96-A) ופיברובלסטים (96-F) נגזר בתרבית במשך יותר מ -20 קטעים בפורמט 96-היטב רובוטית נשמר ביטוי גני pluripotency ומובחן לשריר לב. סה"כ mRNA היה שחולץ משני קווי iPSC רובוט התרבותיים כמו גם cardiomyocytes מובחן משני הקווים (CM-= cardiomyocytes iPSC נגזר שומן, CM-F = פיברובלסטים iPSC נגזר cardiomyocytes, נאסף 14 ימים לאחר אינדוקציה בידול) ומשמש לRT-PCR לחקור סמני pluripotency NANOG, POU5F1, REX1, MYL7 cardiomyocyte הסמן וGAPDH שליטת טעינה. fibroblasts עורי האנושי (HDF) גם נאסף ומשמש כאינו iPSC, שליטה שאינה cardiomyocyte. אנא לחץ על כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. איור 7. פיברובלסטים וiPSCs השומן נגזר שמרו את היכולת להתמיין cardiomyocytes לאחר לטווח ארוך 96-גם תרבות רובוטית (- H). שומן וiPSCs פיברובלסטים בתרבית בפורמט 96-היטב רובוטית ליותר מ -20 קטעים הובדלו לשריר לב . 14 ימים לאחר אינדוקציה בידול, cardiomyocytes צלחת קשור 96-גם היו מנותק וreplated בצפיפות נמוכה על גבי שקופיות זכוכית לimmunostaining של טרופונין T (אדום), F- אקטין (ירוק) וגרעינים (כחול). אנא לחץ כאן לצפייה גרסה גדולה יותר של דמות זו. p_upload / 52,755 / 52755fig8.jpg "/> איור 8. גמלון תרבית תאי גזע צלחת 96-היטב. בהיקף של עד ייצור תאי גזע תלוי במספר הצלחות המשמשות לזרע הקבוצה הבאה של צלחות. המשתמש יכול גם לשמור על רמת ייצור אחד על ידי passaging את אותו המספר של צלחות בכל הזדמנות פיצול או להרחיב את הייצור על ידי זריעה יותר צלחות. לדוגמא, במחזור 0, צלחת אחת 96-גם היא passaged לשנתי עשר צלחות חדשות (מחזור 1), יצירת התרחבות של פי 12. שיעור זה עשוי להישמר אם אחד משנים עשר הצלחות הוא passaged לקבוצה חדשה של שנים עשר צלחות (מחזור 1 עד 2) או מורחב על ידי passaging צלחות מרובות (מחזור 2 עד 3). במהלך מעבר, כל צלחות לא משמשות כדי לשמור על המושבה זמינות עבור יישומים במורד הזרם. לכן, passaging 12 צלחות באופן שיגרתי יכול להניב כמה ש144 צלחות בשני קטעים: 12 לתחזוקת מושבה ו -132 לשימושים אחרים."> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. יעילה 9. איור של תרבות צלחת 96-היטב המבוססת על ייצור תאים עולה בהרבה על טיפוח ידני. כפי שצוין באיור 8, צלחת אחת יכולה להיות passaged זרע עשר צלחות, אשר לאחר מכן ניתן passaged 144 צלחות. שיעור זה של הרחבה ניתן להשיג בשתי הזדמנויות פיצול. טכנאי דורש כ -3.5 דקות להאכיל צלחת 6-גם אחד ואילו הם מבלים כ -30 שניות עם צלחת אחת 96-גם לבחון אותו על המיקרוסקופ ולמקם אותו על הרובוט. אם הטכנאי מבצע 144 צלחות, הם ישקיעו כ 1.2 צלחות טיפול HR כאשר האכלה עם הרובוט ואילו תרבות הידנית ידרוש שעות 8 ייעודיות כדי להאכיל. אנא לחצו כאן כדי view גרסה גדולה יותר של דמות זו.