Scalable Platte mit 96 Vertiefungen Basierend iPSC Kultur und Produktion Mit einem Robotic Flüssigkeitshandhabungssystem

Entwicklung einer Platte auf der Basis Roboterstammzellkultur-Plattform. Die Nachfrage nach iPSCs wird wegen ihrer Nützlichkeit in der Medikamentenentwicklung und der regenerativen Medizin wächst. Doch skalierbare Produktion ist auf Suspensionskultur 32 in relativ komplexe Geräte, die viele Forscher schließt und weicht von festhaftenden Kulturverfahren konzentriert. Anstatt bewährte Platte auf der Basis der Stammzellkulturverfahren, wie zum Beispiel die Umstellung auf eine Suspensionskultur oder mit Hilfe eines Mikro drastisch verändern, konzentrierten wir uns auf die Miniaturisierung und Automatisierung unserer bestehenden haft iPSC Kulturtechniken. Das erste Ziel war es, zu automatisieren Fütterung und Passagieren, die gesamte Kulturverfahren zu normalisieren. Eine Plattform, die schnelle Scale-up mit bestehenden Technologie wurde ebenfalls erforderlich. Um diese Ziele wurde eine Methode zur Kultur Stammzellen entwickelt, bei einer 96-Well-Platte unter Verwendung eines automatisierten Flüssigkeitshandhabungssystem (Figur 1) zu erreichen. Die protocols hier mit der Liquid-Handling-Roboter für die Fütterung und Gang entwickelt kein Zentrifugationsschritt oder kontinuierliche Überwachung durch einen Techniker erforderlich. Diese Protokolle wurden mit zwei Feeder-freien iPSC Linien entwickelt; eine von Fibroblasten abgeleitet und der andere von Fettzellen 33. Das computergesteuerte Flüssigkeitshandhabungssystem (1A) aus einem Flachbett, die vorne und hinten bewegt. Das Bett hat neun, ca. 5 x 3,3 Zoll nummerierten Vertiefungen mit Druckhalteklammern zur Standard-Zellkulturplatten, Flüssigkeitsbehälter und andere kundenspezifische Hardware zu akzeptieren. Die Pipettenkopf bewegt sich von links nach rechts (senkrecht zur Bewegungsbett) sowie nach oben und unten. Zusammen mit dem Bett kann der Pipettenkopf so programmiert werden, zu entfernen oder zu liefern Medien überall auf dem Bett nach dem Aufnehmen Pipettenspitzen aus einem nachfüllbaren Racks. Falls erforderlich, kann jede der 96 Vertiefungen getrennt gehalten werden, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden. Bei der vorliegenden Ausgestaltung, 0 bis200 ul Medien können von jedem Spitze des Pipettenkopf bewegt werden, aber auch andere Volumenbereiche sind möglich, basierend auf Spitzengröße. Wenn das Passagieren Stammzellen in Standardplatten, enzymatische oder chemische Spaltung erfordert typischerweise Inkubation bei 37 ° C. Anfängliche Tests bestätigt Dissoziation mit einem proteolytischen und kollagenolytischen Dissoziation Reagenz oder einer EDTA Reagens, um eine Dissoziation und Homogenität der Koloniegröße für unsere zwei 96 Vertiefungen iPSC Linien produziert eine bessere Leistung bei 37 ° C als RT sowohl zur Zeit (Daten nicht gezeigt). Um die Teilung Prozess zu automatisieren und zu vermeiden beweglichen Platten in und aus einem Inkubator, abgeschrägt, temperaturgesteuerte Rampen, die zu akzeptieren und reproduzierbar zu positionieren Standardkulturplatten wurden (Abbildung 1A) gebaut. Wenn die Rampen wurden auf 37 ° C, einem proteolytischen und kollagenolytischen Dissoziation Reagens oder EDTA basierend Dissoziation der iPSCs von 96-Well-Platten erhitzt war vergleichbar mit Platten in einem Inkubator bei 37ºC (Daten n platziertot gezeigt). Die geneigten Rampen wurden auch genutzt, um Pipettenspitzen ermöglichen, Inhalte eines ganzen gut ist (weniger als 5 & mgr; l Restvolumen) durch das Erreichen der tiefsten Stelle in der Erwägung, dass auch Aspiration aus einer flachen Platte sammeln links ein Restvolumen von ca. 10-15 & mgr; l, was in Zellverlust. Die geneigte Rampe erlaubt auch die Wells durch Ausstoßen von Medien am oberen Ende des Bohrloches geneigt gewaschen werden (zerrieben), und um es am Boden zu sammeln. Roboter Kultur von Stammzellen in der 96-Well-Plattenformat; Fütterung und Passagieren. Kultur iPSCs mit der Roboter-Flüssigkeitshandhabungssystem hat zwei Phasen; Durchgang und Fütterung. Wenn eine Kolonie ist bereit, Durchgang, wird sie in einem vorbestimmten Verhältnis aufgeteilt, um eine neue Platte, die dann in regelmäßigen Abständen zugeführt Saatgut, bis er bereit ist, Durchgang ist wieder (Abbildung 1B). Gefrorenen oder nicht-96-Well-Kulturen können im 96-well Format gestartet werden, und geben Sie den Durchgang / feed sofortZyklus. Zellen, die nicht verwendet werden, um die Kolonie, die die Mehrheit der eine Platte zu erhalten, werden für andere Zwecke entnommen und für die Herstellung Bestandteil dieses Systems. Zuführung 96 Vertiefungen kultiviert iPSCs wird erreicht, wenn einige oder alle der Medien ist nach einer Zeit der Kultur entnommen und in einem Abfallbehälter abgelegt. Dann frisches Medium wird auf der gleichen Platte aliquotiert. Der Roboter kann neue Tipps und Medientröge verwenden, um jeder für völlig kunden Ernährung, einschließlich Mischen konditionierten Medien mit neuen Medien gut zu trennen. Typische Durchgang von Stammzellen erfordert ein Verfahren zur Dissoziation und oft einen Zentrifugationsschritt. Die hier beschriebenen Protokolle zielt darauf ab, die Dissoziation zu normalisieren und zu beseitigen Zentrifugation. Die Passage Protokoll beginnt, wenn der Roboter liefert Dissoziation Reagenz zu 96-Well-Platten auf 37 ° C geneigten Rampen montiert. Nach einer vorgegebenen Zeit werden die dissoziierten Zellen mit einem Waschvorgang, wobei der Anwender contro gesammeltenl die Position, die Wiederholung, die Lautstärke und Verreiben Rate. Enzym Zeit Verreiben Rate und die Anzahl der Wiederholungen Verreiben waren ausreichend, um dissoziierte Koloniegröße und Homogenität (Abbildung 2) variieren, aber jeder Parameter einstellbar ist, um die Anforderungen eines bestimmten Zelllinie geschaffen. Diese Steuerung entfernt Variabilität durch Techniker, die mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten, Positionen und Wiederholungen pipettieren eingeführt. Sobald die dissoziierten Zellen werden gesammelt und in einem Behälter mit frischem Medium vereinigt, sie auf eine neue Platte verteilt sind. Zentrifugiert und Aussaat Probleme von Substratabbau oder Zelltod aufgrund Aktion Enzym zu vermeiden, wurde die Dissoziation Reagenz auf den Minimalpunkt akzeptabel Dissoziation, die in zuverlässigen Impfen führte verdünnt. Diese Technik war wirksam für einen proteolytischen und kollagenolytischen Dissoziation in Reagens mTeSR1 Medium 34, das einen relativ hohen Proteingehalt hat, sondern auch wirksam bei niedrigen Proteinmedien wie Essential-8 35 </sup>, die beide mit diesem System kompatibel sind, (E8 Daten nicht gezeigt). Steuerung der Aussaatdichte von Stammzellen nach dem Durchgang ist von größter Bedeutung, um Routine und erfolgreiche Stammzellkultur. Seeding zu niedrig oder hoch in Eileiter Differenzierung und Verlust der Pluripotenz zusätzlich zu verursachen unregelmäßigen Durchgang Abständen führen. Typische Stammzellkultur stützt sich auf Verhältnis Spaltung, wo eine Vertiefung einer 6-Well-Platte wird verwendet, um eine ganz neue 6-Well-Platte Saatgut (a 1: 6 split). Mit der Flüssigkeitshandhabungsroboter dieses Verhältnis kann eingestellt werden, um den Bedürfnissen des Benutzers zu entsprechen (zum Beispiel 1: 6, 1: 9, 1:12 usw.) und es den größten Einfluss auf den Durchgang Intervall. Der Roboter kann weniger als eine Spalte, eine gesamte Spalte (8 Wells) oder mehr als eine Spalte ernten je nach den Anforderungen des Benutzers, die empirisch bestimmt werden sollte. Die Fett- und Fibroblasten abgeleitet iPSCs halten einen regelmäßigen 3 Tage Fütterung Zeitplan mit Durchgang am vierten Tag, wenn aufgeteilt 1.12. In diesem Fall wurde eine Spalte geerntet und verwendet werden, um eine neue Platte mit 96 Vertiefungen Samen, die Schaffung eines 1.12 Split mit jedem Zyklus (3A). Die restlichen 11 Vertiefungen wurden dann für Downstream-Anwendungen zur Verfügung. Um diese 11 Produktionsbohrungen Ernte wurde der Durchgang außer Protokoll wurden die Zellen in einen Trog zum Einzug wiederholt. Alternativ können die Zellen auf der Platte gelassen und direkt verwendet werden. Um konsistente Aussaatdichte Durchgang zu Durchgang, ohne zu zählen zu erreichen, und die Aufrechterhaltung eines Routinespalt Zeitplan, können Sie unsere Protokolle zur Aufspaltung des gleichen vorbestimmten Anzahl von Spalten, wenn die Kolonie ist in einem idealen Dichte für den Durchgang. , Damit die Benutzer die richtige Dichte für den Durchgang zu identifizieren, wurde eine Serie von Bildern erzeugt, die einen Bereich von Dichten mit einem hervorgehoben ideal Kanaldichte (3B). Zu bestimmen, wann Gang, untersucht ein Techniker ihre Platte und vergleicht sie mit der Bilddichte Maßstab. Die Ideel Dichte um einen Durchgang aus der Kultur der Fett- und Fibroblasten abgeleitet iPSCs ermittelt und festgestellt, dass, wenn der Raum zwischen den meisten Kolonien betrug etwa 25% von benachbarten Koloniedurchmesser. Es ist wichtig, daß die Kolonien homogen verteilt werden. Diese Menge an Kolonie Trennung korreliert mit der maximalen Dichte wünschenswert, weil eine zusätzliche Fütterung Zyklus würde in Kolonien zu berühren, was ein Auslöser für Eileiter Differenzierung führen. Eine notwendige Protokoll hier entwickelten Adressen, wie man eine Kultur im 96-well Format zu starten und wie man eine Kultur nach einer Dichte Problem zurückzusetzen. Wenn eine neue Kultur begonnen wird, die beste Einsaatdichte und Anzahl der Vorschubzyklen Passagierung sind unbekannt. Um eine brauchbare Dichte nach der Aussaat zu gewährleisten, bestehenden oder aufgetauten Zellen in einer 96-Well-Platte verteilt sich der Roboter in einer seriellen Verdünnung (4A). B. Ergebnisse eines solchen Farbverlauf sind in Abbildung 4B-E gezeigt ist. Nach mehreren FütterungZyklen, nähern einige Spalten die ideale Dichte zu spalten, an welcher Stelle ein Techniker verwendet den Roboter, um eine einheitlich verdünnte Platte Saatgut regelmäßig Kultur beginnen. Dieser Dichtegradient-Protokoll wurde auch zur regelmäßigen Intervallen und Koloniepassage Homogenität zu einer unregelmäßigen Platte wiederherzustellen. Wenn der Durchgang verzögert oder verfehlt, Kolonie Dichte und Größe zu hoch, während wenn der Durchgang zu früh ist, ist Koloniedichte zu niedrig, und einzelne Kolonien zu groß werden, ohne daß gleichmäßig über die gut verteilt. Der Dichtegradient-Protokoll löst diese Probleme und ermöglicht dem Benutzer, durch Abheben eine ideal ausgesät Satz von Vertiefungen erneut starten. Zwei iPSC Linien blieb pluripotenten nach 3 Monaten der Roboter Kultur. Pflege der Stammzell Pluripotenz kann nachteilig von Kulturbedingungen 36,37 betroffen sein. Zu beurteilen, ob Fett- und Fibroblasten abgeleitet iPSC Linien (a-iPSC, f-iPSC, respectively) gehalten pluripotency wenn robotisch in 96-Well-Platten für eine längere Zeitdauer kultiviert werden, sind die beiden Leitungen auf der Flüssigkeitshandhabungsroboter, wie oben beschrieben, für 3 Monate, und dann wurden Pluripotenzmarker sucht kultiviert. Für diesen Zeitraum werden beide Leitungen wurden mit einem proteolytischen und kollagenolytischen Dissoziation Reagenz mehr als 20 mal, ohne Zentrifugation agiert. Festen Platten mit 96 Vertiefungen von a-iPSC und F-iPSC Leitungen für Oct4 und Nanog gefärbten zeigte Kernakkumulation dieser Marker während SSEA-4 wurde auf der Zelloberfläche (5A-L) beobachtet. Dies steht im Einklang mit früheren Berichten für pluripotente iPSCs 38-41. Gegenfärbung mit DAPI ergab keine zusätzlichen Zellen, die nicht auch positiv für die drei Pluripotenzmarker waren. Chromosomenanomalien sind üblicherweise während Stammzellkultur 42,43 beobachtet, jedoch nicht auf die Verteilung der Pluripotenzmarker wie in Abbildung 5A-L gezeigt ist. Karyotype Analyse ergab, beide Roboter agierten iPSC Linien hatten 46 normalen Chromosomen, was auf die Roboter-Kulturverfahren nicht chromosomale Instabilität hinaus, was normalerweise auftreten könnten (Abbildung 5 M-N) einzuführen. Zu sondieren etablierten Stammzellgenexpressionsmarker 1,41,44,45 in den Roboter kultiviert iPSC Linien wurde Gesamt-RNA in parallel zur Färbung und Karyotyp-Analyse gesammelt. Beide 96-Well-Platte iPSC Linien hatten ähnliche Ausdruck Pluripotenzmarker NANOG, POU5F1 und REX1 wohin Kardiomyozyten aus jeder Zeile unterschieden nicht taten, noch eine separate Linie von humanen dermalen Fibroblasten (HDF) (Abbildung 6). Die von beiden Linien abgeleitet Kardiomyozyten wurden MYL7 positive während die HDFs und Stammzellen nicht MYL7 auszudrücken. Beide iPSC Linien wurden in Kardiomyozyten mit dem kleinen Molekül unterscheiden, Wnt-Signalweg Manipulationstechnik kürzlich beschriebenen 46 </sup>. Wenn gefärbt waren Kardiomyozyten aus beiden Linien cTnT positive mit klaren Sarkomer Bildung (Abbildung 7). Differenzierung in Kardiomyozyten in dem Format mit 96 Vertiefungen wurde erfolgreich in mehr als 80% der Vertiefungen (Daten nicht gezeigt). Zusammen deuten diese Daten 3 Monate und mehr als 20 Passagen von Roboterkultur ergab chromosomal normalen Zellen, die eine Transkriptions-Programm in Übereinstimmung mit Pluripotenz, die auch in der Lage Differenzierung zu Kardiomyozyten wurden. Abbildung 1. Übersicht über die Roboter-Stammzellkultur Ausrüstung und typische iPSC Kultur Routine. (A) Robotic Liquid Handling mit typischen Bett Layout für gezeigte System 96-Loch-Stammzellkultur. New sterile Pipettenspitzen (Tips), entfernbare Spitze Abfallbehälter (Waste), Multi-Well autoklavierbar Trog erforderlich halten flüssigen Reagenzien (Liquids), 96-Well-Platten positioniert sind eine d auf einem temperaturgesteuerten unterstützt, geneigte Rampe (96-Well-Platten), 8-Kanal-Pipette Roboterkopf, der links / rechts und oben / unten (Pipet Kopf) bewegt. Platte Deckel Haltegestell (PLHR). Bed Positionsnummern in der folgenden Tabelle dargestellt. (B) Robotic iPSC Kultur hat zwei Phasen: Fütterung und Passage. Der Kreislauf der Zellproduktion beginnt, wenn eine Kolonie Platte ist bereit, Durchgang. Der Benutzer wählt das gewünschte Verhältnis zu Durchgang an, und der Roboter Samen eine neue Gruppe von Platten mit 96 Vertiefungen dann in regelmäßigen Abständen wieder zugeführt, bis sie zur Passage. Wenn die Platten sind bereit, Durchgang, die meisten von jeder Platte wird nicht verwendet, um nachfolgende Kolonieplatten Samen und ist für andere Zwecke zur Verfügung, damit die die Produktionsphase des Systems. Gefroren oder bestehende Zelllinien können jederzeit eingebracht und in der Zufuhr / Passage-Zyklus eingehalten werden. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. e_content "fo: keep-together.within-page =" always "> Abbildung 2. Robotic Liquid-Handling-Parameter können verwendet werden, um iPSC Kolonie Dissoziation Eigenschaften steuern. Jeder Vertreter Bild zeigt Fibroblasten abgeleitet iPSCs dissoziiert nach der angegebenen Behandlung noch im 96-well suspendiert. (Obere Reihe, A – C) Enzymzeit, kein Zerreiben. Fibroblasten abgeleitet iPSCs in 96-Well-Platten gezüchtet wurden zunehmenden Zeiten von proteolytischen und kollagenolytischen Dissoziation Reagenz Dissoziation und ohne Roboter Verreiben wurde unter unterzogen. (Mittlere Reihe, D – F) Verreiben Rate, nur 3 Minuten Enzym. Die Zellen wurden bis drei Minuten von proteolytischen und kollagenolytische Dissoziation Reagenz Behandlung ausgesetzt und dann 175 & mgr; l Wachstumsmedium aufgebracht wurde und jede Vertiefung auf und ab sofort bei der angegebenen Geschwindigkeit pipettiert. ul / sec = Mikroliter per Sekunde. (Untere Reihe, G – I) Verreiben Wiederholungen, nur 3 Minuten Enzym, 160 ul / Sek. Die Zellen wurden auf proteolytische und kollagenolytische Dissoziation Reagenz für 3 Minuten ausgesetzt wurden 175 & mgr; l Wachstumsmedium aufgetragen, dann bei 160 l / s für die angezeigte Anzahl der Wiederholungen verrieben. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. Abbildung 3. Typische Fett- und Fibroblasten iPSC Kolonie Wartungsschema und eine Reihe von Kolonie Dichte Bilder zu bestimmen, wann eine regelmäßige Fütterung Gang / Durchgangszyklus zu halten. (A) Beginnend mit einer fetthaltigen oder Fibroblasten-96-Well-iPSC Kolonie bereit, Durchgang, eine Spalte von Zellen wurde auf den Roboter ohne Zentrifugation agiert und verwässert12 neue Spalten, die in bestimmten Zeitabständen danach gefüttert wurden, bis die Platte war wieder bereit, Durchgang. Für die Zellproduktion, wurden Spalten nicht verwendet werden, um die Kolonie zu erhalten agiert und für die anschließende Verwendung gesammelt. Eine beliebige Anzahl von Spalten agiert, um Expansionsrate zu steuern. (B) zu bestimmen, wann Gang eine Reihe von Dichtebilder erfasst alle 24 Stunden wurde für Benutzer zur Verfügung gestellt. In der oberen roten Feld (innerhalb 72 Stunden nach der ersten Aussaat) die Kolonie ist nicht dicht genug, um den Durchgang und sollte gefüttert werden. Wenn die Dichte übereinstimmt, in die grüne Box (bei ~ 96 h) gezeigt, ist die Kolonie zu einem idealen Dichte für den Durchgang. 120 h ist die Kolonie zu dicht, um Durchgang und dieses Szenario zu vermeiden. Letzteres kann mit einer Aussaatdichte gradient aber Routinekultur bei dieser Dichte wird dringend abgeraten gelöst werden. Weiße Balken entspricht 200 um. Bitte klicken Sie hier, um eine größere versi ansehenauf dieser Figur. 4. 96-Loch-Roboter-Kultursystem ermöglicht es Benutzern, Kulturen von gefrorenen oder aktive Zelllinien zu starten und führen Sie eine Aussaat Gradienten. (A) A Zellenlösung wird durch den Benutzer aus einer gefrorenen Zell Lager oder nach der Ernte eine aktive Kultur vorbereitet und platziert am Roboter. Der Roboter führt dann eine Verdünnungs Protokoll, um die anfängliche Zelllösung auf der Platte mit 96 Vertiefungen mit dem Dichtegradienten nach der Kolonne verteilt zu verteilen. (B – E) Beispiele für Zelldichte von vier der zwölf Spalten von A, 48 h nach dem Impfen Dichtegradienten Protokoll. Weiße Linien gleich 225 & mgr; m. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version davon zu sehenAbbildung. Abbildung 5. Pluripotenz ist für Fett- und Fibroblasten abgeleitet iPSC Leitungen während 96-Loch-Roboter-Kultur für 22 (Fettgewebe) oder 23 (Fibroblasten) Passagen (~ 3 Monate) erhalten. (A – L) Fett- und Fibroblasten abgeleitet iPSC Zelllinien Roboter zugeführt werden und wie im Text, ohne Zentrifugation in 96-Well-Platten für 22 oder 23 Durchgänge dann fixiert und für Pluripotenzmarker Oct4, Nanog oder Ssea4 befleckt mit DAPI Gegenfärbung beschrieben agiert. Weiße Balken entspricht 100 & mgr; m. (M – N). Parallel-Kulturen wie in A beschrieben, wurden zur Karyotyp-Analyse, die einen normalen Zahl von 46 Chromosomen zeigte eingereicht Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version zu sehen of dieser Figur. Abbildung 6. Adipose (96-A) und Fibroblasten (96-F) abgeleitet iPSCs kultiviert für mehr als 20 Passagen im 96-well Format Roboter gehalten Pluripotenz Genexpression und zu Kardiomyozyten differenziert. Gesamt-mRNA wurde aus beiden Roboter kultiviert iPSC Linien extrahiert sowie Kardiomyozyten aus beiden Linien differenziert (CM-A = Fett iPSC abgeleitete Kardiomyozyten, abgeleitet CM-F = Fibroblasten iPSC Kardiomyozyten, sammelte 14 Tage nach der Differenzierungsinduktion) und für die RT-PCR verwendet werden, um Pluripotenzmarker NANOG, POU5F1, REX1 sondieren, Kardiomyozyten Marker MYL7 und Ladekontrolle GAPDH. Humane dermale Fibroblasten (HDF) wurden gesammelt und als eine nicht-iPSC nicht cardiomyocyte Kontrolle verwendet. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. Abbildung 7 Fibroblast und Fettgewebe abgeleiteten iPSCs behielt die Fähigkeit, in Kardiomyozyten nach Langzeit 96 Vertiefungen Roboter Kultur unterscheiden (A – H). Fett- und Fibroblasten iPSCs in 96-Well-Roboter-Format für mehr als 20 Passagen kultiviert wurden in Kardiomyozyten differenziert . 14 Tage nach der Differenzierung Induktion wurden 96-Well-Platte gebunden Kardiomyozyten dissoziiert und bei einer niedrigen Dichte auf Glasobjektträger für Immunfärbung von Troponin T (rot), F-Aktin (grün) und Zellkerne (blau) erneut plattiert. Bitte klicken Sie hier, um einen Blick Größere Version der Figur. p_upload / 52.755 / 52755fig8.jpg "/> Abbildung 8. Scaling up Platte mit 96 Vertiefungen Stammzellkultur. Scale up der Stammzellproduktion ist abhängig von der Anzahl der Platten verwendet werden, um die nachfolgende Gruppe von Platten Samen. Der Benutzer kann ein Produktionsniveau aufrecht zu erhalten entweder durch Passagieren die gleiche Anzahl von Platten in jedem Split Gelegenheit oder Produktion zu erweitern durch Impfen mehr Platten. Zum Beispiel im Zyklus 0, einer 96-Well-Platte ist mit zwölf neuen Platten agiert (Zyklus 1), die Schaffung eines 12-fache Expansion. Dieser Satz kann beibehalten werden, wenn einer der zwölf Platten ist mit einem neuen Satz von zwölf Platten (Zyklus 1 bis 2) passagiert oder durch Passagieren mehrere Platten (Zyklus 2-3) erweitert. Während des Durchgangs, irgendwelche Platten nicht verwendet werden, um die Kolonie zu halten für Downstream-Anwendungen zur Verfügung. Für andere Anwendungen 12 zur Kolonie Wartung und 132: Deshalb routine Passagieren 12 Platten könnte so viele wie 144 Platten in zwei Durchgänge ergeben."> Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. Abbildung 9. Wirkungsgrad von 96-Well-Platte auf Basis Kultur zur Zellproduktion manuelle Pflege bei weitem übersteigt. Wie in 8 angegeben, kann eine Platte agiert bis zwölf Platten, die dann zu 144 Platten agiert werden kann Saatgut werden. Dieser Expansionsrate kann auf zwei Split-Möglichkeiten erreicht werden. Ein Techniker benötigt etwa 3,5 Minuten bis zu einer 6-Well-Platte zu ernähren während sie etwa 30 s zu verbringen mit einer Platte mit 96 Vertiefungen, um es auf dem Mikroskop zu untersuchen und auf den Roboter. Wenn der Techniker 144 Platten tragen, sie etwa 1,2 hr Handhabung Platten verbringen werden bei der Fütterung mit dem Roboter in der Erwägung, Hand Kultur wird eine spezielle 8 Stunden zu füttern müssen. Bitte klicken Sie hier, um vIEW eine größere Version dieser Figur.