Un ensayo de conducta Barato, escalable para medir etanol Sedación La sensibilidad y la tolerancia rápida en<em> Drosophila</em

Trastorno por consumo de alcohol (AUD) es un enorme problema de salud en todo el mundo (revisado en ^1). Aunque los mecanismos que impulsan el desarrollo de AUD son complejos, estos trastornos tienen un componente genético importante (por ejemplo, ^2). La gran heredabilidad de la AUD y las respuestas conductuales conservadas en etanol a través de muchas especies (revisado en ^3,4) han generado un gran interés en el uso de organismos modelo genético para investigar la participación de genes específicos en los comportamientos relacionados con etanol hacia una mejor comprensión de las bases moleculares de AUD. La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, se ha convertido en un organismo líder en modelo para explorar los mecanismos moleculares genética de los comportamientos relacionados con etanol (revisado en ^3,4). Los estudios en moscas han puesto de relieve los roles de varias vías de señalización en las respuestas conductuales a etanol (revisado en ^5). Curiosamente, algunos de los genes y las vías que influir respons conductualeses a etanol en las moscas también se han implicado en los comportamientos relacionados con etanol de roedores y / o AUD humano (por ejemplo, ^6-14). La conservación de los mecanismos de los comportamientos relacionados con la conducción de etanol a través de especies, junto con la suite de herramientas genéticas disponibles en el sistema modelo de Drosophila, ponen de relieve la utilidad del modelo de mosca de la fruta para la investigación de la genética de las respuestas de comportamiento a etanol.

Sensibilidad ^15,16 y la tolerancia (revisado en ¹⁷⁾ a etanol en los seres humanos está relacionada con el desarrollo de AUD. Ambas de estas respuestas de comportamiento a etanol puede ser modelado en las moscas a través de una variedad de ensayos de laboratorio (revisado en ^3,4). Todos los ensayos de moscas que se sabe que los autores se basan en cualquiera de tiempo-dependiente inducida por etanol sedación / falta de coordinación o de recuperación en función del tiempo de sedación etanol.

En un artículo anterior de nuestro grupo sobre la genética de la sensibilidad de etanol y rtolerancia apid en Drosophila, se usó un ensayo de comportamiento basados ​​en etanol sedación inducida por vapor de ^moscas-18. Prueba en este ensayo se inició mediante la transferencia de adulto vivo vuela sin anestesia para vaciar viales de alimentos, atrapando las moscas en los viales con un tapón de acetato de celulosa, la adición de etanol a la parte superior (es decir, el lado no-fly) de la bujía de acetato de celulosa, y sellar el vial que contiene moscas, tapón de acetato de celulosa y el etanol con un tapón de silicona (véase el esquema de la Figura S3, referencia ^18). Viales de múltiples que representan los diferentes grupos de moscas fueron evaluados en paralelo, aumentando el rendimiento de este ensayo. Los viales se les dio un código anónimo y experimentadores estaban cegados al grupo de tratamiento para evitar el sesgo no intencional en la evaluación de la sedación. En un experimento estándar, moscas en viales se golpeó suavemente a intervalos de 6 min y, después de una recuperación de 30 segundos, se contó y converte el número de moscas sedados en cada viald para ciento moscas activos. Las moscas absorben vapor de etanol a partir de la clavija de acetato de celulosa de una manera dependiente del tiempo, causando aumentos progresivos en etanol interno ¹⁸ y sedación (referencia cf ¹⁸ y la Figura 1A y 1B en este informe). Sedación en este ensayo se define operacionalmente como moscas (i) de pie en la ausencia de caminar o (ii) que se encuentra en la espalda con o sin batir sus alas. Aquí, este ensayo sedación etanol se describe en detalle, se proporciona una mayor optimización operativa relevante para su uso, y el ensayo se utiliza para tratar la contribución de opciones de administración de suplementos de alimentos sobre la sensibilidad a la sedación mosca.