エタノール鎮静感度との急速な寛容を測定するための安価な、スケーラブルな行動アッセイ<em>ショウジョウバエ</em

アルコール使用障害^{（AUD）（1}に概説される）世界的な巨大な健康問題である。 AUDの開発を駆動するメカニズムは複雑ですが、これらの疾患は、主要な遺伝的要素を持っている（ 例えば^、2）。 AUDと保存された行動反応の大遺伝はより良いの分子基盤を理解するためのエタノール関連行動における特定の遺伝子の関与を調査するために、遺伝的モデル生物を使用することに強い関心を生成している^（3,4で検討）は、多くの種にわたってエタノールへAUD。ミバエ、キイロショウジョウバエは^、（3,4で見直 ​​し）エタノール関連行動の分子遺伝学的メカニズムを探索するための主要なモデル生物として浮上している。ハエの研究は^（5で検討）のエタノールへの行動反応のいくつかのシグナル伝達経路のための役割を強調している。興味深いことに、遺伝子および経路のいくつかの行動RESPONSに影響を与えることハエでエタノールのESはまたげっ歯類エタノール関連行動および/ ​​またはヒトAUD（ 例えば^、6-14）に関与している。 ショウジョウバエモデル系で利用可能な遺伝学的ツールのスイートと相まって種にわたってエタノール関連行動を駆動するメカニズムの保全は、エタノールへの行動反応の遺伝学を調査するためのショウジョウバエモデルの有用性を強調する。

感度^15,16及びヒトでエタノールに^（17に概説）耐性はAUDの開発にリンクされている。エタノールへのこれらの行動反応の両方が^（3,4で検討）実験室の種々のアッセイを経由してハエにモデル化することができます。著者らに知られているフライアッセイのすべては、時間依存エタノール誘発鎮静/協調不能またはエタノールの鎮静からの時間依存性の回復のいずれかに基づいている。

エタノール感度とrの遺伝学上の私たちのグループから前回の記事でショウジョウバエ APID耐性が、ハエのエタノール蒸気誘導性の鎮静に基づいて行動アッセイは^、18を使用した。このアッセイにおける試験は、ライブ大人を転送することによって開始されたセルロースアセテートプラグの上部（ すなわち、非フライ側）にエタノールを加え、酢酸セルロースプラグ付きバイアル中のハエトラップ、餌バイアルを空に麻酔なしハエ、およびシリコーンストッパー^（18を参照すると、 図S3に概略参照）ハエ、セルロースアセテートプラグおよびエタノールを含有するバイアルを密封する。ハエの異なるグループを表す複数のバイアルは、このアッセイのスループットを向上させる、並行して評価した。バイアルを匿名コードを与えられたと実験者は鎮静の評価において意図しない偏りを防ぐために、処置群を知らされた。標準実験では、バイアルにハエは6分間隔で穏やかにタッピングし、30秒の回復後、各バイアル中の鎮静さハエの数を数え、converteパーセントの活性ハエにD。ハエは、内部エタノール¹⁸および鎮静（本報告書でのCF参照¹⁸および図1Aおよび1B）の漸進的増加を引き起こし、時間依存的に酢酸セルロースプラグからエタノール蒸気を吸収した。このアッセイにおける鎮静は操作上ハエ（I）歩行の不在に立っまたは（ii）で、またはそれらの羽ばたくことなく、彼らの背中に横たわっていると定義した。ここで、このエタノールの鎮静作用アッセイを詳細に記載され、それを使用に関連するさらなる操作上の最適化が提供され、そしてアッセイは、フライ鎮静感度に対する食物補充オプションの寄与をアドレス指定するために使用される。