法医学インチタッチDNA」の証拠から簡体マイクロマニピュレーションにより回収する単一のヒト生体粒子の強化された遺伝解析

男性のドナーが着用シャツの襟（ポリエステル100％）から回収された個人や凝集生体粒子の代表的な画像を図6（個々の生体粒子）および図7（凝集生体粒子）に示されている。生体粒子は、ここに記載したプロトコルを使用して、シャツの襟から回収した：トリパンブルー、タングステン針と水溶性接着剤を用いて生体粒子試料の採取と回収生体粒子の直接接触、染色を介してゲルフィルムのシャツの襟から生体粒子の移動5μlのマイクロボリューム溶解/ STR増幅を使用し、STR分析6及び図7は、個々のタッチDNA項目（20単一/個々の生体粒子20凝集した生体粒子）から分析される生体粒子の典型的なサンプリングを表す図 。各画像収集生体粒子（複数可）（ミクロン）の長さおよび幅の測定値で標識される。 PERC集めた生体粒子（群）の各々から回収STR対立遺伝子のentage証拠このタイプの生体粒子から得られることが期待される成功の様々な程度を示すために、各個々の画像上に設けられている。タッチDNAサンプルから回収された生体粒子は、主に死亡または瀕死のケラチノサイトであり、 図6および図7に見られるように、したがって立証STRプロファイルは、収集された各生体粒子から得られない。このシャツの襟のサンプルについて、STRプロファイルは、個々の生体粒子の14/20（70％）から入手し、15/20（75％）が生体粒子を凝集させた。しかし、回収された各プロファイルは、証明力の範囲である：個々の生体粒子プロファイルの百分の3から97までの対立遺伝子の回収と塊状生体粒子プロファイルの三から百パーセントの対立遺伝子の回復を。起因する成功率の変動に、各タッチのDNA項目から多数の生体粒子の収集が推奨されます。これは非常にprobatiを取得する良いチャンスを確実にSTRプロファイルをVEの。 シャツの襟から個々の生体粒子の試料の一つから得られたSTRプロファイルが図8に示されている（プロファイルが発信された生体粒子は、左側に示されている）。ほぼ完全なSTRプロファイル（30対立遺伝子のうち28、1つの遺伝子座が脱落し、基準プロファイルと比較することによって確認得られたプロファイルの精度）は、この個々の生体粒子を得た。得られたプロファイルは、合理的にバランスのとれた間座ピーク高さと高品質のものであり、全くの対立遺伝子が脱落しません。対立遺伝子が脱落すると、不平衡ピーク高アーチファクトが両方頻繁に低い鋳型DNA試料で観察される。シャツの襟から塊状生体粒子サンプルの一つから得られたSTRプロファイルが図9に示されている。完全なSTRプロファイル（30/30対立遺伝子、基準プロファイルと比較することによって確認得られたプロファイルの精度）を得た。前述のように、STRプロファイルがこれまでから回収されていないY生体粒子を収集。単一の生体粒子（3％の対立遺伝子の回復、1/30対立遺伝子）の不成功DNAプロファイリングの例を図10（個々の生体粒子）に示されている。この個々の生体粒子が成功しなかったが、このサンプル中の生体粒子のドナー性の高い証明力STRプロファイルは、同じサンプルから回収された他の生体粒子から得られた。これは、同じオブジェクトから複数の単セル/クランプサンプリングを実行する必要性を示している。 タッチのDNAの証拠のためにここで説明し開発された「スマート」の分析方法は、単一の証明力単一のソース·プロファイルを回復するために成功裏に使用されており、さまざまなからの「凝集」生体粒子は、オブジェクトや衣料品に触れた（ 例えば、椅子のアームレスト、車のステアリングホイール、携帯電話、コー​​ヒーカップ、タバコ、ペン、シャツ、ショートパンツ、そしてセーター）。しかし、重要なことに、このアプローチはまた、雄dは検出およびプロファイリングのために使用されているonorシミュレートされた物理的な接触/暴行混合試料中のDNA（シングルソース）（ 例えば、加害者、被害者の手首をつかんで、首や衣服、または性的暴行のように、被害者の寝具でお問い合わせください）。 図1：生体粒子収集のためのゲルフィルムスライドの準備。 （A）白色裏面保護カバーは、接着裏当てを露出させるために、ゲルフィルムの一片から、滅菌ピンセットを用いて除去される。ゲルフィルムはその後しっかり圧力でガラス顕微鏡スライドに接着されている。（B）ゲルフィルム試料は、生体粒子の収集に使用する準備ができたら、上部透明な保護膜は、滅菌ピンセットを用いて除去される。 図2：ゲルを用いた生体粒子コレクション種々の基材から-film。ゲルフィルムスライドは、種々の表面から生体粒子を収集するために使用することができる。ゲルフィルムを対象または対象の表面と直接接触して配置される。穏やかな圧力はゲルフィルムの表面に生体粒子を転送するために適用される。 （A）着用衣料品（コートカラー）からの生体粒子の集合体、（B）はオブジェクト（走行コーヒーカップ）、及び（C）直接人間の皮膚（男性の手首）に触れたが示されている。 図3：生体粒子（ズボンの脚の内側）着用衣類項目の生体粒子は、物体表面との直接接触を介してゲルフィルムに転写される。生体粒子は「塊」または（赤の矢印で示される）個人/シングル生体粒子として求めることができる。 <img ALT =「図4「SRC = "/ファイル/ ftp_upload / 52612 / 52612fig4.jpg" /> 図4：ゲルフィルムスライド上の生体粒子の任意染色生体粒子のより良い視覚化のために、ゲルフィルム試料をトリパンブルー染色で染色することができる。ゲルフィルムの全面を、トリパンブルー（A）で覆われている。染色の1~2分後、スライドを静かに過剰染色スライド（B）に逃げることができるように傾斜している。滅菌水（C）で穏やかにフラッディングが過剰染色を除去するために使用することができる。スライドを空気乾燥させた後、スライドは、適切な染色（D、E）を確保するために顕微鏡下で観察することができる。すべてではない生体粒子が染色された（色はすなわち、青）が表示されます：注意してください。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 OAD / 52612 / 52612fig5.jpg "/> 図5：生体粒子の収集と分析。 （A）（「接着剤」）は、水溶性ウェーブはんだテープの少量（または「ボール」）は、穏やかな掻爬によりタングステン針の先端に収集される。（B）の接着剤は、その後ゲル状に接触さ関心の生体粒子を収集するためにフィルム表面。個々のまたは複数の生体粒子は、単一の接着剤ボールを回収することができる。（C）は 、所望の生体粒子が収集されたら、針の先端0.2mlのPCRチューブ中で増幅混合物内に配置される。それが溶解するまでニードルを液体に保持され、溶液中への生体粒子の放出が観察される。収集プロセスのすべてのステップが成功した生体粒子の収集と伝達を確実にするために実施し、顕微鏡下で観察されている。 LARを見るにはこちらをクリックしてくださいこの図のGER版。 図6：。シャツの襟試料中の個々の生体粒子生体粒子が男性ドナーが着用シャツの襟の内側から、ゲルフィルムを使用して回収した。生体粒子を、トリパンブルーを用いて染色した試料において同定さ20の異なる個々の生体粒子の画像が示されている。各画像において、収集された生体粒子を（;プロファイルは回収しなかった生体粒子を示す黒丸プロファイルが回収された生体粒子を示す赤い丸）丸で囲まれている。パーセント対立回復（可能な30のうち、観測された対立遺伝子の数）は、プロファイルが回収された元の生体粒子の画像の上に示されている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 図7：シャツの襟試料中の凝集生体粒子生体粒子が男性ドナーが着用シャツの襟の内側から、ゲルフィルムを使用して回収した。。生体粒子を、トリパンブルーを用いて染色した試料において同定さ20の異なる塊状の生体粒子の画像が示されている。 。プロファイルが可能30のうち％の対立遺伝子の回復（観察された対立遺伝子の数）を回収しなかった生体粒子を示す黒丸;各画像において、収集された生体粒子は、プロファイルが回収された生体粒子を示す（赤い丸丸れるプロフィールを回収し、そこから各生体粒子のために示されている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 <p class="jove_content" fo:keep-together.wiシン·ページ= "常に"> 図8：男性のシャツの襟からの単一の生体粒子から得常染色体STRプロファイル常染色体STRプロファイルは5μlの直接溶解/増幅反応を使用して（左に示す）は、単一の生体粒子から得られた。。このプロファイルの精度は、ドナー基準サンプルとの比較によって決定した。五常染色体STR遺伝子座およびアメロゲニン（性決定）は、単一の反応で共増幅およびキャピラリー電気泳動によって分離される。結果は、電気泳動図のようにここに表示されます。アレル数字は、各遺伝子座における各ピーク下の指定です。 x軸が表すフラグメントサイズ（塩基対、bp）を、y軸は信号強度を表す。（RFU相対蛍光単位;それぞれ対応する対立遺伝子の数の下で提供）をの拡大版を表示するには、こちらをクリックしてくださいこの図。 図9：男性のシャツの襟から塊状生体粒子から得られた常染色体STRプロファイル常染色体STRプロファイルは5μlの直接溶解/増幅反応を使用して（左に示す）凝集した生体粒子から得られた。。このプロファイルの精度は、ドナー基準サンプルとの比較によって決定した。五常染色体STR遺伝子座およびアメロゲニン（性決定）は、単一の反応で共増幅およびキャピラリー電気泳動によって分離される。結果は、電気泳動図のようにここに表示されます。アレル数字は、各遺伝子座における各ピーク下の指定です。 x軸が表すフラグメントサイズ（塩基対、bp）を、y軸は信号強度（;各対応する対立遺伝子の数に基づいて提供RFU相対蛍光単位）を表す。PG "ターゲット=" _空白 ">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 図10：収集された生体粒子から得られる常染色体STRプロファイルを得るための障害の例は、左側に示され、個々の生体粒子は、シャツの襟ゲルフィルム試料を採取した。 （右側に示す）を得られたSTRプロファイルから分かるように、（可能な30のうち）1つの対立遺伝子のみが得られた。アレル数字は、各遺伝子座における各ピーク下の指定です。 x軸は信号強度を表すフラグメントサイズ（塩基対、bp）を、y軸を表している。（RFU相対蛍光単位;それぞれ対応する対立遺伝子の数の下で提供）をこの図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。