造血細胞の自動定量化 - 脱灰骨の組織学的画像における間質細胞の相互作用

、光学イメージングを含む顕微鏡における近年の急速な技術開発、に、全組織のコンテキスト内の細胞の解析は、免疫学者のためにますますアクセス可能となっています。懸濁液中の単一細胞の特徴は、細胞および分子の機能を理解するための貴重な不可欠な方法を表す。しかし、それらの（マイクロ）-anatomical環境内の細胞の解析は、免疫応答の発生のような複雑なプロセスに協力種々の細胞型の間の相互作用を理解するために不可欠である。

顕微鏡研究は、画像から定性的な情報を取得することが比較的容易であるが、それは部分的にはこの分野での分析方法は、画像取得が可能であるものと比較して遅れているという事実のために、これらのデータを定量化するための課題である。多くの研究者は、まだ、時間がかかり、その組織学的画像におけるマニュアル細胞計数を頼るしたがって、異なる評価者の間でバイアスを導入し、他のグループによって複製を妨げる。多くの場合、1代表画像は、それがハード読者はこのようなイベントの統計的関連性を判断できるようにすること、出版物における細胞の位置や共局在に関する声明を下線に選択される。

一緒にされた画像データの完全な情報内容はほとんど利用されないという事実と、この組織学的画像を分析するためのより公平な、迅速かつ包括的アプローチの必要性を強調している。

骨髄は、大人の脊椎動物の造血器官として重要な生体機能にかかる複雑な組織である。造血細胞^1,2-ための出生地であるとBリンパ球の発達³に重要な役割を果たしている他に、免疫反応は^4を開始し、成熟した、循環B細胞^5をサポートしているサイトとして作用する。私の維持に加えて、その役割免疫記憶を構成する細胞のいくつかの種類が存在^6-9存在することが判明しているようにmmunologicalメモリは、ますます10年間で明らかになり、理解されている。

骨髄およびその機能の複雑な組織構造との関係は依然としてとらえどころのないままである。そのようなTおよびB細胞のゾーンとしてマクロ区画に編成されて二次リンパ器官とは異なり、骨髄をクリアマクロ区画を欠いている。これまでのところ、骨髄中の個別のコンパートメントは、骨皮質に、または血管系への近接によって定義されています。そのような幹細胞を支持するようなプロセスの数の骨髄中の様々な常駐間質細胞集団の重要性は、そのような長命形質細胞（パソコン）などの免疫記憶細胞集団（CD4 ⁺のB細胞またはメンテナンスの開発およびCD8 ⁺メモリーT細胞）は、明らかに、骨髄中の微小区画のある程度があることを示している。

<pクラスは= "jove_content">これらの観​​察は、骨髄中の（様々な段階での細胞の維持、B細胞の発達の幹、および免疫記憶の維持）特定の機能に特化して別個の微細解剖ニッチの概念をもたらした。異なる機能を果たすニッチ間の異質性のある程度があるように思われるが、そのようなCXCケモカインリガンド12（CXCL12）またはインターロイキン7（IL-7）、などの間質細胞によって産生される因子のいくつかはのための決定的な要素であるこれらのニッチ¹⁰のいくつか。骨髄間質細胞の可視化および特徴付けにより、細長い樹状骨髄全体ネットワークを形成する拡張機能、および間質亜集団を区別するための適切なマーカーの欠如との形態学的特徴のために困難である。

これらのニッチは、それらの細胞および分子は複合に対する共通の特徴を共有してどの程度としてはまだ明らかではないn、および要素は、特定のニッチが一意レンダリング。間質細胞に加えて、造血細胞型は、ニッチのいくつかについて、少なくとも特定の信号を提供することによって、重要な役割を果たすことが示されている。明らかに、ニッチ組成の複雑さは、 その場でそれらの分析を必要とし、免疫学者や血液学者がその細胞成分間の空間的関係を分析することによって、例えば 、骨髄マイクロアーキテクチャにズームインすることがますます重要になってきた。

ここでは、自動化された公平な方法で、骨髄における細胞の共局在及び近隣関係を定量化するための戦略が提示されている。蛍光性の間質細胞及び非蛍光造血細胞を保有するキメラマウスの生成を含むワークフローの詳細、脱灰骨からの組織切片の調製、骨全体を覆って共焦点画像の取得、並びに携帯cは自動画像解析O-ローカライズおよびシミュレーションツールによってランダムポジショニングからの検証/差別が（ 図8）が設けられている。