Makrofaj Kolesterol tükenmesi ve Fagositoz Üzerine Etkisi<em> Cryptococcus neoformans</em

Fagositoz hücre dışı kişiler konakçı hücreler tarafından olan bir süreçtir. Bu patojenlere karşı savunmak için bağışıklık sisteminin cephanelik önemli bir silahtır, ama süreç genellikle içselleştirme ve vücutta ¹ yayılan sağlamak için patojenler tarafından yıkılabilir olabilir. Fagositoz konukçu hücrenin hücre iskeletinin yeniden düzenlemeler yoluyla bağlanması ve yutulma neden olan bazı sinyal olayları aracılık eder. "Profesyonel" fagositler bağlanması ve patojen yutmak ve phagosome ² oluşturan lamellipodia oluşması için sinyal istilacı patojenin yüzeyinde opsonins ayırt eden ve bağlanan edebiliyoruz. Sözde 'profesyonel' fagositler arasında makrofajlar. Makrofajlar çoğu, arayan ve hastalığa neden olan ajanlar ortadan kaldırarak, hasarlı dokuların onarımı ve inflamasyon aracılık dahil koruyucu fonksiyonlarını yürütmek son derece uzmanlaşmış hücrelerdirfagositoz ^1,2 sürecinde bu.

Cryptococcus neoformans cryptococcosis olarak bilinen ciddi bir hastalığa neden patojenik maya türüdür. Cryptococcus sporlar ev sahibi tarafından inhale ve genellikle asemptomatik bir akciğer enfeksiyonu neden vardır. Bu poz son derece yaygın olduğu düşünülmektedir; Ankete tüm bu kriptokok polisakkarit glucuronoxylomannan ve diğer çalışmalara antikor olduğunu Kliniği Bronx-Lübnan Hastanesi Merkezi'nde bulunan Çocuk Enfeksiyon Hastalıkları 61 çocuklu bir ^örnek, hem insan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfekte olmayan ve enfekte yetişkinlerin ³ prevalansı göstermiştir ^4. Alveoler makrofajlar başarıyla net patojen akciğer enfeksiyonuna ve çoğu durumda yanıtın ilk satırı vardır. Ancak, bağışıklığı baskılanmış kişilerde (örneğin, HIV ve AIDS hastaları) maya makrofajlar içinde hayatta yapabiliyor. Bunlardadavalar, makrofajlar patojenin çoğalması için bir niş olarak hizmet verebilir ve hastalık ölümcül hale ⁵ santral sinir sistemi (MSS) onun yayılmasını kolaylaştırabilir ^{– 8. 11 –} Bu makrofajlar hatta "Truva atı" modeli ^3,9 yoluyla kan beyin bariyerini geçmeye maya yardımcı meninkslerde doğrudan maya teslim düşünülmektedir. Böylece, bu fagositoz sürecini ve özellikle kriptokoksik enfeksiyonlarda, bunu etkileyen faktörleri anlamak önemlidir.

^{15 –} Diğer patojen sistemlerinde Önceki çalışma fagositozu ¹² oynamak için önemli bir role sahip olduğu kolesterol oluşturduğu kolesterol ve lipid sallar işaret. Kolesterol, memeli hücrelerde en fazla lipit türdür ve 25 ihtiva eder – memeli hücre zarı ^16, 50%. Bu BIOP modüle bir rol oynadığı tespit edilmiştirrijiditelerini ¹⁷ değiştirerek zarların hysical özellikleri. Kolesterol ve sfingolipitler birlikte lipid sallarının olarak bilinen membran lipit mikro bölgelerini oluştururlar. ^{18 –} lipid sallarının kaveolanın oluşumu, hem de ¹⁶ sinyal belirli tipleri için, izole edilmiş bir etki sağlayan ilgili olduğu tespit edilmiştir. Nedeniyle, küçük boyutları nedeniyle, in vivo olarak, lipid sallar çalışmak zordur. Lipid sallar rolünü incelemek için yararlı bir yolu, onların bileşenleri değiştirmek için. Metil-β-siklodekstrin (MβCD) memeli zarlarda kolesterol tüketen bulunmuştur ve yaygın olarak lipid sallarının ¹⁸ rolünü araştırmak için kullanılan bir bileşimdir.

Bu protokol, konakçı hücre zarlarından kolesterol tüketen ve C fagosite konakçı hücrelerin yeteneği üzerindeki tükenmesi etkisinin belirlenmesi için bir yöntem sunmak in vitro neoformans. Bu prosedür, hücre kültürü techniq kullanırenfeksiyonu için bir model olarak hücre hattı (J774A.1) gibi ölümsüzleştirilmiş makrofaj üzerinde daah. Kolesterol tükenmesi sterol büyüklüğüne özel bir hidrofobik bir çekirdeğe sahiptir ve kolesterol zar ¹⁹ dışarı çekmek için bir havza olarak etki edebilir MβCD, maruz bırakılarak gerçekleştirilmiştir. Kolesterol tükenmesi kantitatif olarak ticari olarak temin edilebilen bir kit kullanılarak ve niteliksel olarak ince tabaka kromatografisi (TLC), ^daha sonra ^{da 20} modifiye edilmiş bir Bligh-Dyer lipid ekstraksiyonu kullanılarak ölçülmüştür. . ^{23 –} fagositoz makrofajları aktive edilmesi için, interferon-γ ve lipopolisakkarit bir kokteyl ile karıştırılır opsonize bir maya kültürünün hücre hattı enfekte ölçülmüştür Cryptococcus bir glucuronoxylomannan (GXM) antikor ya ²¹ ile opsonize edilmiştir. Boyama ve mikroskopi deneyleri fagositoz derecesini değerlendirmek için hücrelerin görselleştirme ve fagositik endeksinin hesaplanmasında izin verdi. Bu protokol d birlikte ele alındığındafizyolojik bir süreç ile, lipid bileşimin değiştirilmesini entegre temel bir metodu escribes.