方法论方法血管功能和形态的非侵入性评估

注：该协议遵循从达德利集团NHS信托基金会的人类研究伦理委员会的指导方针。执行所有描述的技术在温度控制的实验室（21 – 22℃），具有稳定的灯光和噪音的情况下。问个人经历评估从食物，饮料，吸烟和之前的测试练习12小时，以避免。扣压血管活性药物至少12小时在适当的时候。 1.激光多普勒成像与离子导入接通激光多普勒成像仪（LDI），并允许扫描仪自动稳定大约30分钟。启动LDI的软件，然后点击“测试”（该软件的主屏幕便会显示）。在主屏幕上，选择任务栏位于窗口顶部的“Ionto协议”。 手动输入协议（在我们的实验室中使用的协议共涉及13号第罐，具有用于离子电渗药物递送从扫描2中设置电流扫描11以30μA的电压）。设置扫描1为基准，没有电流扫描，并扫描12＆13恢复扫描也没有电流。点击OK确认设置并返回到主屏幕。 要求参与者在一个半卧位椅子的前臂休息90度舒适，牢固枕头放松，并把前臂下​​一个黑色的垫子。 注：垫有助于限制由围绕组织背景表面产生假象的测量。重要的是，与会者臂牢固地绑在枕头使得没有运动和相关的伪影。 连接有线插头在每个有机玻璃室向离子电渗疗法控制器的另一端。连接含有2.5ml的剂量的1％乙酰胆碱（ACh）的对离子电渗疗法控制器的anodal连接的腔室，并连接含有该第二室2.5ml的剂量的1％的钠，硝普钠（SNP）的阴极连接。在用0.5％盐水溶液的混合室两种药剂。两个腔室连接到参加者的右前臂用双面粘接片的掌侧的方面。 覆盖腔室由32毫米盖玻片，以防止流体泄漏。 在开始扫描之前，打开位于主屏幕的左上角的“扫描仪设置”窗口。选择“视频和远程”选项卡，选择“自动距离”功能来测量参与者前臂的扫描头的距离。 以下自动测距完成后，选择“图像扫描”标签，并确定将通过点击窗口右下角的“标记”按钮被扫描的区域。如果需要的话，通过手动输入在扫描区域的大小成'扫描区和改变所述感兴趣区域的大小＃8217;部附近的窗口的顶部。确保感兴趣的区域包括的每个的电离子透入腔室的直径和大到足以限制变异性皮肤血流量。 以下评估完成后，保存数据文件。使用LDI图像分析软件来执行灌注测量打开数据文件。 点击主软件窗口“图像查看'，并打开是要分析的图像文件。 使用软件来标记出围绕每个室的外直径的感兴趣区域。调整感兴趣的区域，使之正确地装配上的区域，其中所述腔室在场。然后点击“统计信息”图标，并包含平均灌注单位为每室一栏将显示。注意基线灌注部，以及从前述各12扫描的每个腔室的最高灌注单元。 注意：这种分析方法是具体到我们的实验室;然而，其它方法也可以用来表达由LDI扫描获得的数据。对于一个全面的检讨，请参见从Roustit和Cracowski 12的指导方针。 要计算百分比变化灌注回应胆碱和SNP，减去高峰灌注基线灌注，除以基线灌注，然后乘以100。 注：在我们的实验室，基线的变化相对灌注显示变异良好的内观察员系数乙酰胆碱（7％）和SNP（6％）。 2.血流介导的扩张和硝酸甘油介导的扩张切换多普勒超声机及含血管图像分析（VIA）的软件联网的PC上。 注：通过软件捕获实时图像（在每秒25帧），并提供，以及对血管直径信息血管边界的质量由超声波机器被检测。 OT她的软件包，可它可能包含额外的功能和设置。最好是请教操作手册的专用软件。 要求参与者在一个半卧位扶手椅放松，把他们一个舒适的枕头手臂自己身边，但水平与心脏。周围放置参与者的手腕血压计。 注：患者应被要求保持他们的手臂，仍可以防止在测量过程中的移动文物。 确保从超声波机器的线性阵列换能器成立体钳，并拧紧用蝶形螺母夹紧，使得超声换能器保持在一个固定的位置。 注：钳将确保该超声换能器将保持稳定，一旦血管所在的位置。 在超声机，滚动到“菜单”，设置扫描频率为5 MHz和优化的深度（建议的深度设置为3.5厘米）和超声机器上的增益设置。调节增益设置，以确保有对称的亮度为容器的远近壁。 采用线阵探头，找到肱动脉通常是发现2-10厘米以上的纵向扫描平面的肘窝。进行任何调整，以澄清在此阶段的图像质量。为了帮助确定动脉，打开彩色多普勒帮助显示搏动动脉血流和持续静脉血流区分开来。查看水平穿过屏幕肱动脉;它应该显示为两个固体的平行线，在其表示容器的内腔的线之间通过一个明确的区域隔开。 以允许通过软件自动记录血管直径，使用光标来标记感兴趣的预定区域，以检测和跟踪动脉的前壁和后壁。 注意：所关注的区域的大小可以是增加或使用'x'和'y'的位于主软件屏幕上的按钮降低。 点击VIA软件和图像动脉2分钟“开始”。在此之后，按“充气”威盛软件，同时充气血压袖带置于周围的手腕上心脏收缩的压力（通常高于220毫米汞柱）5分钟。 注：手腕袖带的目的是以阻塞血液流向手。 5分钟后，放气血压袖带以诱导反应性充血其中，在一个健康的容器中，将刺激NO介导的血管舒张。 注：峰值扩张可能会发生多达180秒以下袖带放气，所以最好是继续录制血管直径为袖带释放后3分钟。 以下一个10分钟的休息时间，使用线性阵列换能器重新定位肱动脉并以相同的方式记录一个2分钟基线直径读数作为步2.7。 然后要求参与者把一个500微克舌下甘油，硝酸（GTN）平板电脑在他们的舌头，并继续测量肱动脉直径再5分钟。在此之后，要求参与者以去除GTN平板电脑和监视器的参与者，以确保他们不会遇到任何不良影响的药物。 进行数据的离线分析所有。二十五个数据点可用于评估每个第二;折叠此数据到Microsoft Excel中一秒钟的时代。将数据导出到数字信号分析软件，并用3秒移动平均过滤器过滤。 建立从120秒的数据的基线直径的袖带充气之前。目视检查基线区域和排除文物。平均剩余基线区域，以产生基准直径。 对于血流介导的扩张（FMD）的分析，使用软件自动扫描后cuff-通缩区域峰值扩张和使用光标纪念这个峰值目视检查。如果峰值已经误，使用光标选择一个较小区域内，峰值便可以被识别。记录峰值作为峰直径。 为GTN的数据，采用相同的方法来与FMD使用，除了搜索继5分钟用药峰扩张在该地区。 要计算FMD％和GTN％，减去高峰直径基准直径除以基准直径，然后乘以100。 注意：在我们的实验室中，变异的帧内观察者系数是口蹄疫11％，而对于GTN 12％。 3.颈动脉内膜中层厚度要求参与者躺在舒适的床上，并放置一个枕头在头下，提供颈部支撑。 连接的心电图（ECG）导致多普勒超声，然后将它们附着在所述p心急的四肢。只有基本的ECG迹线是必需的，所以放置在左侧和右侧臂相应引线，并在左脚踝。 通过滚动的'菜单'，并设置扫描频率为10 MHz和优化的深度准备超声波机（推荐深度设置为3 – 第4厘米）和增益设置。调节增益设置，以确保有对称的亮度为容器的远近壁。 向参加者稍微倾斜其头部的左侧，并使用该线阵换能器，扫描沿着利用纵向扫描平面，以确定任何斑块的存在其所有部分（共同的，内部和外部颈动脉）的右颈动脉。保存显示斑块的任何证据的图像。为了帮助识别动脉，查找在容器内的分叉点，因为这显示了颈动脉分叉到内部和外部颈动脉。 测量Ø˚F颈动脉内膜 – 中膜厚度（CIMT），达到总颈动脉，是免费的斑块，并且为1cm近端颈灯泡的截面中的至少3个图像。达到全部图像上的心电图的R波的峰值，因为这对应于心室舒张并在该点该容器是在最少量的剪切应力。 重复步骤在左颈动脉3.4和3.5。请参与者稍微倾斜他们的头，为这种测量的权利。 为了协助获得清晰的图像的近和远壁，在评估过程中小心操作超声波探头，以确保该容器是垂直于超声波束。通过巧妙地连同小的调整，以施加到近侧到远侧角探针（踵趾运动）的压力改变换能器的倾斜和旋转实现这一点。 图像进行分析，离线使用动脉测量软件（AMS）检测血管奔卡里根据Pignoli的线条。加载图像以进行分析，然后使用光标，在不受斑块容器的部分创建的感兴趣的区域。点击“检测”的软件，记录屏幕的cIMT和管腔直径上显示的值。 注：准确的读数只能从远处的墙壁获得，因此忽略了近壁读数。 取三次测量的每个边，然后平均这些得到的平均值的cIMT为左，右颈动脉分开。从两侧进一步平均化的cIMT，得到整体的cIMT。 注：变异的这种技术在我们实验室内观察员系数为9％。 执行使用相同的软件通过手动标记出使用光标的牌匾任何牌匾的测量。点击“分类”的AMS根据其易感性破裂自动计算斑块和档次的回声。点击在“牌匾特性”窗口中看到这些信息。