EPA Method 1615 uses an electropositive filter to concentrate enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. This manuscript describes the procedure for collecting samples for Method 1615 analyses.
EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. The standardized sampling component of the method concentrates viruses that may be present in water by passage of a minimum specified volume of water through an electropositive cartridge filter. The minimum specified volumes for surface and finished/ground water are 300 L and 1,500 L, respectively. A major method limitation is the tendency for the filters to clog before meeting the sample volume requirement. Studies using two different, but equivalent, cartridge filter options showed that filter clogging was a problem with 10% of the samples with one of the filter types compared to 6% with the other filter type. Clogging tends to increase with turbidity, but cannot be predicted based on turbidity measurements only. From a cost standpoint one of the filter options is preferable over the other, but the water quality and experience with the water system to be sampled should be taken into consideration in making filter selections.
人間の腸内ウイルスは、消化管内で複製し、糞口経路を通じて広がっている。これらのウイルスは、多くの場合、高濃度1-3に下水に記載されています。彼らは、下水の排水4,5に固執し、表面6,7、地面8-10で、かつ11水を飲んで治療することができます。存在する場合、米国の環境水中のウイルスの濃度は、典型的には直接測定12,13には低すぎる。これはウイルスが大量の水から濃縮されている必要があります。情報収集ルール(ICR)は、米国環境保護庁(USEPA)14が行ったモニタリング中に、感染単位の19.7最確数に全国の0.009の範囲であった大型のユーティリティのソース水中での陽性検体のウイルス濃度(MPN)/ L.陽性サンプルの中央値と平均濃度は、流れストリームからのソース水用0.01 0.03 0.17 MPN / Lであった湖沼や貯水池からのそれらのための0.07 MPN / L、及び地下11(2000年4月25日付けのICR AUX1 18月のAccessデータベースからデータ)を用いてそれらのための0.04から0.74 MPN / Lである。国の地下水のUSEPA研究から陽性サンプルのウイルス濃度は中央値0.13と0.29感染単位/ L 8の平均濃度で0.009から2.12感染単位/ Lの範囲であった。正の地下水試料中のウイルスの濃度は、流動流中のものよりも高かった。これらの研究における地下水を使用して施設の大半は、カルスト領域に位置する帯水層から水を得た。これらには、石灰石と結晶に所在する(破断岩盤)とともに設定が他の設定8,15,16よりも高いウイルス濃度を有する可能性がある。 USEPAウイルス法は、地表水の200 L 300 Lへ(ICR)(1615年法)と地下水17,18の千L 1500 Lへ(ICR)(1615年法)のサンプリングボリュームを指定。しかし、用いて大量の試料は、ほとんどの表面と地下水試料は、ウイルス8,11,19,20について陰性である。
地表水に存在するウイルスは、飲料水の消費者への潜在的な健康リスクをもたらす。表面水処理ルールは、少なくとも4対数によりウイルス濃度を減少させるために、表面の水を使用して、すべての処理プラントを必要とする。でも、4-logの減少で、0.0044 MPN / Lと小さい源水で感染性ウイルス濃度は、平均曝露と治療条件やロタウイルス11,21の用量応答パラメータを仮定して一日あたり1感染につながる可能性があります。未治療の地下水でウイルスからのリスクとは、治療及びウイルスの発生がないためにさらに大きくなる可能性があります。 Borchardtらは、成人における急性胃腸炎の22%および63%までの小児では5年未満が未処理地下水19を使用して、コミュニティで飲料水中のウイルスが原因である可能性がありと推定している。
USEPA Method 1615はBorchardtの調査結果や同僚19,23にフォローアップの国家として未規制汚染物モニタリング規制の第三の監視サイクル(UCMR3)22時のエンテロウイルスとノロウイルスを検出するために開発されました。 USEPA法は、主に、未処理の地下水を使用して、システム内のウイルスを測定するために設計されたが、他の水の行列タイプが含まれるように、より一般的に書かれた。新しい方法は19,23。ICR 17、Borchardt らの方法に基づいて、分子の手順の追加時に使用される前のウイルス法から多くの成分を保存するハイブリッドで、ノロウイルス24のための追加のプライマーセット。本稿の目的は、サンプリング手順及び収集と出荷中にサンプルの完全性を維持するために必要な手順を記述することである。方法全体の評価はCashdollar ら 25に記載されている。このプロトコルは、単純なフィールドをカバーコレクション5ポンプとプレフィルタが不要であり、調整はpHまたは水中の消毒の存在を必要としない場合の表面と接地水のnがサンプリングされる。より複雑なサンプリング要件はFoutがら、17,18に記載されている。
環境水からウイルスを濃縮するための異なるフィルタタイプは、年26にわたって使用されてきた。現在の方法は、限外濾過膜27、電気陰性フィルタ13,28,29、ガラスウールフィルター23、及び電気陽性フィルタ30を使用する。電気陰性フィルタは長年広く使用されたが、塩の添加前又はサンプリング中にフィールド内の水のpHを調整するための要件は、その有用性を制限する13。フィールドサンプリングのための最も実用的なフィルタの選択は電気陽性フィルターです。これらのフィルタは、高流量で、水の任意の調節なしに大量の水のサンプリングを可能にする。グラスウールフィルタは最も安価であるが、陽性のフィルタよりも遅い流速を有しており、市販されていない。限外濾過は、水質の広い範囲にわたって最高のウイルス回収率を提供するが、装置はsampliために必要ngは、容易に携帯用フィールドれず、サンプルを収集するのに必要な時間は、27ずっと長い。方法は、最近使用現場での調整の必要性を回避するために、電気陰性のフィルタを予め調整することを開発されてきたが、これらは大量の試料28,29を収集するため適用できないかもしれない。
EPAメソッド1615は、酸化アルミニウムナノ繊維または第四級アミンのいずれかからの正電荷を得る陽性カートリッジフィルターを使用する。後者は前者の上の利点は、安価で効率的に自然なpH値30,31の広い範囲の海域からウイルスを収集することである。しかし、各カートリッジのほか、Borchardtらによって使用されるグラスウールフィルターは水23,31,32(Cashdollar、未発表データ)からのエンテロウイルスとノロウイルスの類似の回復を与える。カートリッジフィルターは、サンプルの収集を簡単にするために設計された単純なサンプリング装置内に配置されるとサンプリング中に汚染を減少させる。
大規模研究が複数の分析ラボを使用して実施された場合の標準的な方法は非常に貴重である。 EPAメソッド1615はサンプル収集中または不十分な消毒装置の構成部品からの汚染に起因するこれらの研究 – 偽陽性の結果、およびコンポーネントによってフィルター孔の目詰まりの間に収集されたデータに影響を与えることができる2つの主要なサンプル収集の問題を最小限に抑えるために、標準的な手順とガイダンスを提供しています水がサンプリングされる。
腸内ウイルスが不十分な衛生状態に人から人への普及することができるのと同様に、ウイルスは、汚染された手袋33で不十分洗浄し、手や手からのサンプルに導入することができる。これは、サンプラーは、汚染の可能性のある経路を理解し、サンプリング中に無菌技術を使用することが不可欠である。サンプラーは、手袋は、主にページへの暴露からサンプラーを保護するために使用されていないことを理解すべきである汚染からの装置をrotect。サンプリングと介護の開始が汚染を手袋に手を防ぐために、手袋の着用時に注意が必要前には手を洗浄する必要があります。彼らは、高いレベルでのエンテロウイルスまたはノロウイルスを流してできたように胃腸炎や呼吸器症状とのサンプラーは、サンプルを収集してはならない。
第二に、注意が前回のサンプリングイベントからウイルスのキャリーオーバーを防ぐために注意する必要があります。汚染のこの潜在的な源を最小にするために、方法1615でのサンプリング装置は、入口とカートリッジハウジングモジュールとの間の圧力調整器及び圧力計を含まないことによってICRのものから変更された。イベントをサンプリング中に観察された圧力は常に最大の住宅評価(5インチカートリッジハウジング用など 、125 PSI)を下回っていたので、彼らは消毒が困難であったため、これらのコンポーネントは削除されました。後者の問題は、STで機器ブランク対照を使用することにより実証されたICR 6,20に続くudies。それはICRデータに影響を与えた程度は不明であるが、可能性が小さかった。つだけ偽陽性陰性の性能評価サンプルが研究中に存在した(データは示さず)。さらに、キャリーオーバー汚染の可能性を低減するために、それはまた、入口モジュールチューブが各サンプリング事象後に交換することが推奨される。これは、装置は、ウイルスを接種した品質または性能制御のために使用された場合、適切な消毒を確実にするために特に重要である。殺菌を実行する前に、遊離塩素の濃度は、貯蔵中の任意の損失を測定すべきである。上述の装置の構成の変化に加えて、定期的な装置のブランクは消毒が有効であることを実証するために実行されることが不可欠である。方法1615機器ブランクウイルスシードの制御に使用された後に消毒された装置を用いて行うことが義務付け、それによって簡素前消毒に装置を通ってウイルスシードソリューションをパスする必要がなくなるので、手続き。この濃度は、機器上の任意の実行可能なウイルスを不活性化し、核酸を分解することの両方を必要とされる消毒剤の濃度は、方法1615のための0.525パーセントの次亜塩素酸に増加した。そのため、機器のブランクは、細胞培養および定量PCRアッセイの両方を使用して分析する必要があります。
電気陽性のフィルタのどちらのタイプは、 表1に報告された研究の間に、目詰まりの対象となった。減少したボリュームの試料の未知の数はそのような積算の誤読または別のを満たすために、サンプリングの意図的な早期の停止として、サンプリングによるエラーのためにあったかもしれない特に20 NTU未満の濁度測定値との水域の締め切り、。目詰まりの度合いは、両方のフィルタタイプ及び水質パラメータに依存している。プレフィルタは、改善のいくつかの尺度を提供するが、使用される場合、処理され、分析されるべきである別途電気陽性フィルタから。 UCMR3ための現在の推奨は、試料は、少なくとも半分のボリュームが最初のフィルターを用いて収集することができる場合、2つの酸化アルミニウムナノ繊維ベースのフィルタを使用して、プレフィルターすることなく収集することができるということである。
The authors have nothing to disclose.
著者らは、その貢献ICRとの間に実施モニタリングを行った数々のEPAの担当者に感謝可能UCMR3、報告されている他のEPA研究の次のリード研究者:ダニエルDahling、アルフレッドデュフール、アンドレイエゴーロフ、スーザンGlassmeyer、ASJA Korajkic、リチャード·リーバーマン、ロバートSafferman、とティム·ウェイド。批判的にこの原稿をレビューするとシャノングリフィンとマイケル·ウェア。著者は、サンプル収集を実証するため、それらのポンプの家の1つの使用のためにインドのヒル水道に感謝。この作品は、USEPAによって審査と出版が承認されましたが、それは必ずしも公式代理店の方針を反映していない場合があります。商標名や商用製品に関する記述は、使用のために承認または推奨するものではありません。
Name of the reagent/Equipment | Company | Catalogue number | Comments/Description |
1-L polypropylene bottle | Nalgene | 2104-0032 | |
Aluminum foil squares | Cole-Parmer | 06275-40 | |
Autoclave | Steris | Amsco Lab Series | |
Bubble wrap | U.S. Plastics | 50776 | |
Closable bag | Uline | S-12283 | |
Closable bag | Fisher Scientific | S31798C | |
Commercial ice packs | Cole-Parmer | 06345-20 | |
Cool safe box | Diversified Biotech | CSF-BOX | |
Gauze sponge | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
Graduated cylinder | Cole-Parmer | 06135-90 | 4-L or larger |
Hype Wipe | Fisher Scientific | 14-412-56 | |
iButtons temperature data logger | Maxim | DS1921G | |
Insulated storage and transport chest | Fisher Scientific | 11-676-12 | |
Packing tape | U.S. Plastics | 50083 | |
Portable chlorine colorimeter II test kit | Hach | 5870062 | |
Portable pH and temperature probe | Omega | PHH-830 | |
Portable turbidity meter | Omega | TRB-2020-E | |
PTFE thread tape | Cole-Parmer | 08270-34 | Use on all threaded connections |
Pump, Centrifugal Magnetic Drive | Cole-Parmer | 72010-20 | |
Reduction nipple | Cole-Parmer | 06349-87 | |
Sodium hypochlorite (NaClO) | Use locally available household bleach | ||
Sodium thiosulfate (Na2S2O3) | Sigma Aldrich | 217247 | |
Surgical gloves | Fisher Scientific | 19-058-800 | |
Waterproof marker | Fisher Scientific | 22-290546 | |
Media | Composition | ||
0.525% sodium hypochlorite (NaClO) | Prepare a 0.525% NaClO solution by diluting household bleach 1:10 in dH2O. Store 0.525% NaClO solutions for up to 1 week at room temperature. | ||
1 M sodium thiosulfate (Na2S2O3) pentahydrate | Prepare a 1 M solution by dissolving 248.2 g of Na2S2O3 in 1 L of dH2O. Store sodium thiosulfate for up to 6 months at room temperature. |