Aplicação de nanopartículas fluorescentes para estudar Reformas do Sistema Endo-lysosomal por bactérias intracelulares

Nanopartículas fluorescentes (PN), incluindo NPs metálicas, pontos quânticos, o NPS de polímero, o NPS de sílica, pontos de carbono, etc., têm atraído uma atenção considerável nas últimas décadas ^1,2. Em comparação com os corantes orgânicos tradicionais, NPs fluorescentes mostram químicas, propriedades ópticas e mecânicas desejáveis, tais como a potência do sinal forte, a resistência à fotodegradação e elevada biocompatibilidade ^3,4. Essas vantagens tornam o método de escolha para a detecção intracelular e imagens de células vivas. Além disso, uma variedade de NPs elétron-densas são visíveis por microscopia eletrônica (ME), facilitando a sua utilização para análise microscópica correlacionada, que permite combinação de células vivas de rastreamento com microscopia de luz (ML) e maior resolução em nível ultra-estrutural com EM ^5. Por exemplo, NPs de ouro têm sido desde há muito tempo utilizado de forma eficiente em células como biossensores para o diagnóstico sensível vivo, bem como no domínio da ^{imuno-6 de} rotulagem. S recentestudies indicam que nanopartículas de ouro com diferentes tamanhos e formas podem ser facilmente captação por uma grande variedade de linhas de células e transporte de rotina, através da via endossomal, por conseguinte, ter grande potencial de ser aplicada para o transporte intracelular de seguimento da vesícula e do sistema de rotulagem de ^endo-7,8 lisossomal .

Os agentes patogénicos microbianos, tais como Salmonella enterica, Shigella flexneri e histeria monocytogenes, têm desenvolvido diversos mecanismos para invadir as células hospedeiras não fagocíticas ^9. Depois de ser internalizado, os agentes patogénicos, quer localizadas no citosol ou sequestrados nos compartimentos ligados à membrana, interage bastante com os seus ambientes de hospedeiro e modulam estes favorecem a sua própria sobrevivência ^10. Por exemplo, Salmonella enterica reside e replica dentro de um compartimento phagosomal intracelular denominada -contendo vacúolo Salmonella (SCV) por infecção ^11. O SCV amadurecimentotrafega em direção ao aparelho de Golgi, passando por interações contínuas com a via endocítica, e induz a formação de estruturas tubulares extensas, tais como Salmonella filamentos induzidas (SIF), seleção túbulos nexin, Salmonella transportadora secretora induzida por proteínas de membrana (3) SCAMP3 túbulos, etc . ^12-14. Estudar como estas bactérias patogênicas manipular vias de células do hospedeiro é essencial para a compreensão de doenças infecciosas.

Aqui, NPs de ouro-BSA-rodamina foram utilizados como marcadores de fluido para rotular o sistema celular hospedeiro endo-lisossomal, e o agente patogénico humano gastrointestinal Salmonella enterica serovar Typhimurium (Salmonella) foi utilizado como um modelo de bactéria para estudar as interacções entre o agente patogénico com o hospedar via endocítica. NPs de ouro-BSA-rodamina intracelulares em células não infectadas e células infectadas com WT ou estirpes mutantes de Salmonella foram fotografadas por um microscópio de varrimento a laser confocal (CLSM).Então Imaris software foi utilizado para quantificar a distribuição de NPs, indicando que a infecção por Salmonella induzida extremo rearranjo dos endossomas / lisossomas. Seguindo a descrição do presente método, as experiências análogas pode ser concebido para controlar destino a longo prazo das NPs internalizadas e para investigar a influência de várias substâncias exógenas ou factores endógenos na via endocítica de células eucarióticas.