タンパク質の削除の誘導を介して<em>子宮内で</em>エレクトロポレーションは、トランスジェニックモデルにおいて神経細胞の移動の欠損を定義する

ラジアル移行が早い皮質の開発の中心的なプロセスです。このような正確な有糸分裂の終了と神経分化、細胞極性、細胞骨格の動態および膜貫通受容体の発現の調節、ならびにそのような放射状グリア足場の形成のような非細胞自律的因子などの細胞自律的な様々な要因に依存し渡り鳥ガイダンス分子^1-3の分泌。これらのメカニズムのいずれかの破壊がトランスジェニックマウスモデル^4-8にニューロン移動を損なうことができるので、マイグレーションの欠陥の根本原因を決定することは、複雑で困難なプロセスであることができる。 子宮内エレクトロポレーション（IUE） で補完し、簡素化するために使用することができるそれによって、遺伝子ノックアウトモデルの表現型との解釈は、放射状の移行^7,9-11に必要な重要なメカニズムを解明。

子宮内エレクトロポレーションでは （IUE）はによるプラスミドcarryiプロセスであり、目的の遺伝子およびレポーターの両方をngのは、マウスまたはラット胚の脳内脳室に注入した後、電流^12〜14の使用を介して心室の内側を覆う細胞に引き込まれる。これは研究者がアップまたは電気穿孔ニューロンの発生または機能の目的の遺伝子のダウンレギュレーションの効果を分析することができます。 IUE後、脳を免疫組織化学^7,9-11、電気生理学¹⁵または細胞培養物^16,17のために処理することができる。 IUEの主な利点は、遺伝子発現の高度に特異的な操作が可能である。さらに、IUE有向電流（ 図2）を介して発達中の脳の特定の領域を標的化するために使用することができる。 IUEも^10,18-21（テトラサイクリン誘導性遺伝子発現が一例である）は、種々のプロモーターまたはプラスミド活性化システムの制御下で遺伝子を担持するプラスミドの注入を介して特定の細胞型を標的化するために使用することができる。

jove_contentは"> IUEのCreのLox仲介遺伝子の切り出しシステム^7-9,11,22と組み合わせて使用することができる。Creタンパク質のためのメッセージをコードする遺伝子を含むプラスミド（フロックス対立遺伝子についてホモ接合性の胚にエレクトロポレーションすることができる遺伝子または特異的なDNA領域）のCre媒介DNA組換えのための2つのloxP部位によって隣接される。Creがその後のフロックスallele.The効果のノックアウトを生成する、特にエレクトロポ神経前駆細胞に目的の遺伝子の組換えを誘導する神経遊走および個々のニューロン内の開発にノックダウンタンパク質は、次に検討することができる。Creリコンビナーゼのエレクトロポレーション、無傷の支援環境を残して、影響を受けた細胞のわずかな集団において組換えを誘導する。これとは対照的に、特定の細胞型の制御下のCreの組織特異的発現プロモーターは、全体の組織全体で発生した両方の移行神経芽細胞と周囲の環境が影響を受ける可能性があること。したがって、JUXので、これらの2つのアプローチのtapositionは、与えられた移行欠陥が自律的または細胞非自律的なメカニズムをセルに起因しているかどうかを判断できます。実験的なシステムの両方の不良移行は細胞自律的メカニズムから観察された表現型の結果を示唆している。組織特異的Creリコンビナーゼモデルにおける欠陥の移行とのCreのエレクトロポレーション後の通常の移行は、目的の遺伝子は、非細胞自律的な機構を介して作用していることを示している。

IUEもノックアウト動物を^7,9,10に潜在的に相互作用する遺伝子をエレクトロポレーションによって、レスキュー実験を行うために使用することができる。例えば、研究者は下流のターゲットを電気穿孔すると、移行欠陥が電気穿孔ニューロンで修正されているかどうかを決定することによってトランスジェニックモデルにおける移行の表現型を救出しようとする可能性があり。これが成功したレスキューが通常移行がSPEの中でタンパク質の発現を操作することによって復元することができることを示している付加的な利点を有しているcificニューロン、周囲の環境は依然として標的遺伝子を欠損であっても。再び、このアプローチは、欠陥のあるメカニズムは、細胞自律的であるかどうかを決定するという利点を、トランスジェニック系統を交配または生成するより効果的な、より多くの時間とコストである。

IUEはノックアウト胚（ 図4C）にレポータープラスミドの電気穿孔を通って移動するニューロンを追跡するために使用することができる。手術時に心室の内側を覆うだけのニューロンが¹⁷エレクトロポレーションされると、IUEは、 インビボでのそれらの形態の視覚化の利点を有する特定の時間に生まれたニューロンを追跡するために使用することができる。

最後に、このような内側または背側終脳、海馬または神経節隆起（ 図2）のような脳の領域を標的とするIUEを使用することが可能である。これは、研究者の合併症の結果の特定の領域とは独立に遺伝子機能を調査するために力を与える近隣の構造にノックダウンタンパク質からる。

網膜芽細胞腫タンパク質（pR​​bの）のp107およびp130のポケットタンパク質ファミリーを含んでよく、細胞周期の出口のレギュレータを設置している。しかしながら、これらのタンパク質はまた、神経発生の細胞周期の独立した側面を調節するという証拠が増えている。我々は以前に示したように、pRbのとP107は、接線^4,23とラジアル移行⁶の両方で重要な役割を果たしている。ここでは、トランスジェニックモデルでのCreの子宮内エレクトロポレーションでの使用を例示するために、神経遊走⁶にポケットタンパク質ファミリーのメンバーのpRbおよびp107の役割を実証する。要約すると、IUEは遺伝子欠失（または過剰発現）の細胞自律的な効果を分析する強力な方法を提供します。モデルをノックアウト特定の組織と組み合わせると、IUEは、神経移行を制御するメカニズムに関する追加情報を提供することができます。