ラットにおけるパブロフ付きアルコール探索行動の状況誘発性のリニューアルを観察する手順

すべての手順は、コンコルディア大学の動物実験倫理委員会によって承認され、動物ケアカナダ評議会からの推薦に同意している。 1。動物 （ – 到着時に240グラム220）オスLong-Evansラットを入手します。 午前7時に点灯する12時間の明暗サイクルでの温度（21℃）および湿度（44％）を制御動物飼育施設でラットを、上に維持する。 到着時にペア社内ラット。 3日後、個別にベータチップ寝具、ナイロン骨、標準ラット固形飼料と水を自由にプラスチック製の靴箱のケージに家ラット。水のボトルに加えて、第二の瓶のその後の配置を可能にするために、二重グロメットを持つケージの蓋を使用します。 NOTE：ラットを個別にすぐに動物管理施設に到着し収容することができる。 毎日のラットを処理するために開始します。注記：目安として、取り扱いの一週間は、PIであることに、それらを順応さで通常は十分ですアップckedと実験者が取り扱う。 ホームケージ内の2断続的にエタノールへのアクセス注：実験の行動訓練相は17〜19を開始する前に、ラットは、エタノールの生理学的に関連の量を飲むことを保証するためにホームケージ内の断続的なエタノールへのアクセスを実施する。それは光や暗サイクル中にいつでも開始することができるが、明期の間にこの手順を開始する。 各ラットのための2つのボトルを準備します。 100ミリリットルのプラスチックを使用して、エタノールのボトルと473ミリリットル標準的なプラスチック水のボトルなどのメスシリンダー。比較的小容量のエタノールボトルを使用し、漏れや蒸発によるエタノールの損失を最小限に抑えるために、最大ボリューム容量をほぼ満たした。 水道水中に95％エタノールを希釈することによって作ら15％エタノールで1ボトルを埋める。注：そのような10％または20％などの他のエタノール濃度、15％エタノールの代わりに使用することができる。 Fiの水道水で二ボトルをチェック！ 各ボトルに、漏れを最小限にするためにボールベアリングを含んでシッパーチューブを、ゴム栓を挿入する。 コントロールケージがラットや布団を含まないことを除いて、ケージに同一に処理2制御ケージをセットアップします。 2.1.4 – ステップ2.1.1に指定されているコントロールケージ用のエタノールと水のボトルを準備します。 （ – 2.8.2のステップ2.8.1で説明したように）エタノールアクセスセッションの過程で発生する可能性がこぼれおよび/または蒸発を制御するための制御ケージから得措置を使用してください。 すべてのエタノールと水のボトルを秤量する。すべての重みを記録します。 すべてのラットを秤量する。すべての重みを記録します。 エタノールボトルと各ホームケージの水のボトルを置き、同時にケージを制御します。 24時間ケージの両方の瓶のままにしておきます。 24時間の期間の終わりに、の両方からボトルを取り除く同時にケージ。 すべてのエタノールと水のボトルを秤量する。すべての重みを記録します。 それが24時間先に各ラットのホームケージ上に置いたとき、それがボトルの重量からホームケージから取り外すときに24時間の期間中に消費されたどのくらいのエタノールと水を判断するには、各ボトルの重量を差し引く。 二つの制御ケージのために同じことを行い、その後、各流体のための流出の平均量を計算する。 各ラットについての対応、エタノールと水の消費量を測定から、それぞれ、エタノールと水の流出の平均量を引きます。 これらの流出を制御差g / kg体重でエタノール消費量を計算するための措置、水の消費、及びエタノールの嗜好を使用してください。 エタノール消費（g / kg体重）、第1の総溶液（エタノール+水の成分）の濃度に基づいて量（ml）中に消費されたエタノール溶液の重量（g）に変換を計算するために、従う式容量（ml）=質量（g）/濃度に（グラム/ ml）を加えた。注：溶液の密度は、エタノール濃度の関数として変化する。 次に、消費された重量（g）エタノールを得るために、使用される特定のパーセンテージ液にスケーリングされたエタノールの密度（g / ml）とで消費されるエタノール溶液の量（ml）を乗算する。 エタノール消費のg / kg体重測定値を取得するために、ラットの体重（kg）で消費されるエタノールの重量（g）を分割する。 エタノールの嗜好を計算するために、全流体（エタノール+水）溶液摂取のパーセンテージとしてエタノール摂取量（ml）を発現する。 ラットのホームケージにのみバック水筒を返します。次の24時間では、水へのラットのアクセスを与えるが、エタノールではない。代わりにエタノールボトルの、ホームケージ上の予め秤量した第二の水ボトルを置く。 24時間の期間の終了時に、同時にケージから両方の水のボトルを取り外します。 水のボトルの両方のセットを計量。すべての魏を記録ghts。 それはステップ2.8.1で説明したようにコントロールケージから得られた平均流出メジャーを差し引く、24時間以前のホームケージ上に置いたとき、それがボトルの重量からホームケージから取り外すときに、各ボトルの重量を引く – 2.8.2。 水の消費量を計算するために、これらの流出制御の違いを測定に使用します。 2.14〜ステップ2.1で説明したように、ラットにエタノールと水のボトルの両方を提供することにより、サイクルを再び開始します。 エタノール消費の高い、安定したレベルを誘導するために、複数（約12）のセッションをこのサイクルを繰り返します。ホームケージ中のエタノール消費量（g / kg体重）の代表的な結果については、図1を参照してください。 側の好みの発症を予防するためのセッション間ケージの蓋に対するエタノールと水ボトルの空間位置を交互に。 全体で正確で安定したエタノール濃度を確保するために1週間に1回新鮮なエタノール溶液を作るセッション。このアプローチを使用して、長期間にわたるエタノールの蒸発の影響を最小限に抑えます。 3。装置換気され、音響減衰キュービクル内側ハウス各空調室。 ステンレス製の金属棒の床の各空調室、透明なポリカーボネート天井、透明なポリカーボネート後壁とフロントドア、アルミニウム金属パネルの側壁を構築します。 右の金属側壁の根元付近の中央流体ポートをインストールします。ポートにエントリを検出するための赤外線フォトセルと流体ポートへの入り口を装備。 鈍先端が針を用いてエタノールを含有する20ミリリットルの注射器への流体ポートの背面からポリエチレンチューブを接続します。音減衰キュービクルの外に位置シリンジポンプにシリンジを配置します。パブロフの弁別訓練セッションでは、ポンプにそれを置く前に、注射器にエタノールをロードします。首相チューブByは手動でポンプを進め、その後、流体ポートから過剰のエタノールを乾いた布で拭き取ってください。 左側壁には、室内の天井付近に集中的に白houselightをインストールしてください。 クリッカー（2 Hzの周期）と左側壁の左上隅にあるスピーカーホワイトノイズ発生器を取り付けます。 独特のコンテキストを作成するために、視覚的、嗅覚、触覚刺激の特定の構成で、各空調室の衣装。 二つの異なるコンテキスト、コンテキスト1と空調室の指定されたコンテキスト1とコンテキスト2構成の半分とコンテキスト2などの他の半分を使用してください。 、コンテキスト1を作成するペトリ皿に戻し（水道水にレモンオイルを希釈することによって作ら10％v / vの）チャンバ、スプレーレモン臭の壁、天井、前面上に黒厚紙パネルを配置し、中央に配置するには室の床下金属屑トレー、および金属rの上に透明なポリカーボネートフロアパネルを挿入するOD階。吸収紙タオルやベンチライナーで廃棄トレイを並べる。 コンテキスト2を作成するには、それらが明確になるように、ペトリ皿に（水道水中のベンズアルデヒドを希釈することによって行われ、10％V / V）、アーモンド臭を噴霧し、一元的に配置し、発見室の天井と前後の壁を残す室の床下金属廃棄トレイに、金属棒の床の上パンチングメタルフロアパネルを挿入します。吸収紙タオルやベンチライナーで廃棄トレイを並べる。 4。馴化行動訓練室にラットを慣らすとコンディショニングチャンバ内の二つのコンテキストのそれぞれ。実験のこの段階では、20ミリリットル注射器にエタノールをロードしない。 二つの短い馴化セッションで実験室での行動訓練室に動物飼育施設から輸送される過程にラットを慣らす。 最初のセッションでは、ラットをロードI動物飼育施設における車輪付きカートにホームケージをnと、実験室での行動訓練室に輸送。部屋のライトを点灯、キュービクルを減衰各サウンドでファンをオンにし、部屋を出、ドアを閉め、カート上にホームケージ内に残っている間のラットは、20分間のこの新しい環境に適応できます。この20分の期間の終わりに、動物飼育施設にラットを返す。 第二セッションでは、実験室での行動訓練室にラットをもたらす。前述のように、部屋の中に点灯し、キュービクルのファンにしておきます。ドアが気晴らしを最小限に抑えるために閉じた状態で、部屋に残り、処理し、行動訓練室で各ラットの重量を量る。重みを記録し、その後、動物飼育施設にラットを返す。 二つの短い馴化セッションで空調室にラットを慣らす。 行動訓練室にラットを輸送、各ラットの体重を記録し、およびその指定された空調室に各ラットをロードします。 最初の馴化セッションでコンテキスト1とコンテキスト2のような残りの半分室を設置しました。 第二馴化セッションでは前回のセッションで使用されなかったコンテキストと各チャンバを設定します。 釣合いファッションに慣れセッションを実施、ラットのように半分が最初のコンテキスト1にさらされている、コンテキスト2が続き、残りの半分は、まずコンテキスト2に晒されており、理想的には、コンテキスト1に続いて、両方の馴化セッションを実施必要であれば、彼らは二日に分散することができるが、同じ日、。 馴化セッションの場合、プログラムが発行された後houselight 1分を照明するためのコンピュータプログラムを使用する。 20分間のセッション中に行われた流体ポートエントリの合計数を記録します。セッションの最後に、オフにすることhouselightをプログラムします。馴化セッション中にエタノールや手がかりを提示しないでください。 </lI> 、チャンバーからラットを削除し、それらのホームケージに戻し、そして動物ケア施設にそれらをバック運ぶ。 機器（ 例えば 、フロアパネル、廃棄トレイ、ペトリ皿）を清掃してください。詳細は、ステップ5.7を参照してください。 5。パブロフの差別トレーニング（PDT） 行動への列車のラットは、エタノールとない第二、聴覚信号と対になっている1、聴覚信号を区別する。実験のこの段階では、15％エタノールで20ミリリットルの注射器を埋める。 ステップ3.3.2と3.3.3で説明したように、特徴的なコンテキストを作成するために、視覚的、嗅覚の具体的な構成、および触覚刺激で各空調室の衣装エタノール消費や好みに基づいて、コンテキスト1と釣合いファッションにコンテキスト2に残りの半分にしたラットの半分を割り当てるには、ホームケージエタノールアクセス手順の最後の2セッション間で平均した。続きを参照してください。extがコンテキストAに注記としてPDTの間に使用される：各ラットは、訓練のこの段階で1コンテキストを経験する必要があります。 嗅覚刺激は、各空調室に追加される最後の文脈刺激であることを確認してください。嗅覚刺激が含まれており、異なった匂いのcominglingを最小限にするためにチャンバと音響減衰キュービクルのドアを閉じます。 、行動訓練室にラットを持参各ラットの体重を記録し、その指定された空調室に各ラットをロードします。 各PDTセッション中に次の一連のイベントを制御するコンピュータプログラムを開始します。 プログラム後5分が発行された時に、houselightを照らす。 ホワイトノイズ刺激を提示し、クリッカーを​​16回ずつ刺激。 CS +であることが、これらの聴覚刺激のいずれかを指定し、他は両方のコンテキスト全体で相殺方式で、CS-であること。 各CS +とCS-トライアルリットルを作るAST 10秒。 CS +の最後の6秒の中に流体ポートに0.2ミリリットルのエタノールを配信。 CS-中にエタノールを配信しないでください。 各PDTセッション平均で最後の58分を行います。可変時間67秒スケジュールでCS +とCS-それぞれを提示。 10秒CS間隔中にレコード流体ポートエントリ（CS提示の間に10秒）、10秒間予備CS間隔（直前にCSの発症の10秒）、10秒後のCS間隔（直ちに10秒次のCSは、CS +とCS-のプレゼンテーションだけでなく、セッション全体の総流体ポートエントリの両方で）オフセット。また、これらの間隔の間に行われた各ポートのエントリの期間を記録します。 セッションの最後に、houselightをオフにしてください。 、チャンバーからラットを削除し、それらのホームケージに戻し、そして動物ケア施設にそれらをバック運ぶ。 ラットは各PDT秒で配信エタノール3.2ミリリットルを消費していることを確実にするために流体ポートを確認してくださいession。 少量の水を含む60ミリリットルの注射器でポリエチレン管からエタノールをフラッシュします。そして、それが乾燥していることを確認し、第二の、空の注射器を使用して配管を通る空気の60ミリリットルを渡します。 機器を清掃してください。毎日の清掃のために、フロアパネル、廃棄トレイ、ペトリ皿を洗う。週に一度、全体の調整チャンバを清掃します。実験装置に不要な匂いを導入することを避けるために香りのクリーニング製品を使用しないでください。 ラットはCS-対CS +への入港応答の安定した差別を示すまで、毎日PDTセッションを続行します。注：CS-に応答して行わポートのエントリが低いままでなければならないのに対し、CS +に応答して行わポートのエントリは、セッションで増やす必要があります。差別を達成するために必要なPDTセッションの正確な数は異なりますが、約20セッションに関するガイドとして、計画することができ、応答エアコン。 6。絶滅各空調チャムの衣装BERの視覚、嗅覚、および触覚刺激とラットはPDTセッション中に経験したものとは区別されるコンテキストを作成します。コンテキスト1は、PDTで使用された場合、消去セッションのコンテキスト2のようなチャンバーを構成します。コンテキストBとして絶滅の間に使用されるコンテキストを参照してください。 PDTセッションに同一の消去セッションを実施するが、CS +中にエタノールが届かない。 CS +とCS-を提示するために、PDT中に使用された同じコンピュータプログラムを使用します。 実験のフェーズ間の一貫性を維持するために、シリンジポンプに空のシリンジをロードし、ポンプがオンのままにしておきます。ポリエチレン管は消去セッションの前にエタノールが含まれていないことを確認してください。 ラットはもはやショーは、CS +とCS-の間、応答が判別するまで、毎日の消去セッションを続行します。メモ：differeがなくなるまでCS +に応答して行わポートエントリは次第に、絶滅セッション間で辞退すべきCS-に応答して行わCS +に応答して行わポートエントリとポートエントリ間NCE。応答エアコン消すために必要な消去セッションの正確な数は異なりますが、約8セッションのガイドとして、計画することができます。 ステップ5.7で説明したように、各セッションの終了時に機器を清掃してください。 7。コンテキストに誘導されるリニューアルテスト PDTセッション中に経験されたコンテキストを作成するために、視覚的、嗅覚、および触覚刺激で各調整チャンバーを装備。例えば、与えられたラットは、PDTセッションでコンテキスト1を経験した場合には、テストセッション中にコンテキスト1のように、彼のチャンバーを構成します。コンテキストAとしてリニューアルテスト中に使用されるコンテキストを参照してください。 PDTセッションに同一のコンテキストによって誘発される更新試験を行うが、リニューアルテスト中にエタノールが届かない。提示 CS +とCS-PDTセッション中前とするが、エタノールはご遠慮いただいております。 同じコンピュータPRを使用してくださいCS +とCS-を提示するために、PDT中に使用されたogram。 、フェーズ間の一貫性を維持するため、シリンジポンプに空のシリンジをロードし、終了するにはポンプがオンになって。ポリエチレン管は、テストセッションの前にエタノールが含まれていないことを確認してください。 パブロフ付きアルコール探索行動の文脈によって誘発されるリニューアルを守ってください。注：この更新効果はCS-に応答して行わ入港の振る舞い​​を変えることなく、CS +に対応して作られたポートのエントリ数の選択的増加により明らかなように、CS +とCS-の相対はで観察中で応答絶滅の訓練の終わり。 ステップ5.7で説明したように、セッションの終了時に機器を清掃してください。