الخلايا العصبية الشمية التي يتم الحصول عليها من خلال الأنف خزعة جنبا إلى جنب مع الليزر والتقاط تسليخ مجهري: نهج المحتملين لدراسة الاستجابة للعلاج في اضطرابات العقلية

الاضطراب الثنائي القطب (BD) هو اضطراب شديد العصبية، والتي تتميز التغيرات المرضية في المزاج، ودفع والإدراك ^1. وقد تبين الليثيوم المستخدمة لعلاج BD لتغيير مستويات ثابتة الدولة مرنا عدد كبير من الجينات في الدراسات الحيوانية ^2، لكنه لا يزال غير معروف إذا تم المرتبطة الاستجابة السريرية في البشر ² أي من هذه الجزيئات. ان فهم آلية استجابة الليثيوم تتطلب التحقيق التغيرات التي يسببها الليثيوم الجزيئية في الأنسجة العصبية. للأسف، أنه ليس من العملي للحصول على الخزعات الدماغ من المرضى BD قبل والعلاج ما بعد الليثيوم لتحديد التوقيعات الجزيئية للاستجابة ليثيوم. وقد استخدمت أنسجة المخ بعد الوفاة لدراسة المؤشرات الحيوية في BD، ومع ذلك، فإنها لا يمكن أن تستخدم لتقييم الواسمات الجزيئية المرتبطة مع التغيرات الديناميكية في العواطف، والإدراك ومحرك. وصلاحية التأكد بأثر رجعي الاستجابة للعلاج الليثيوم يمكن أن يكون مشكلة ⁴. الخلايا الليمفاوية وخلايا الدم الأخرى يمكن أن تكون مفيدة، ولكن قد لا تتضمن التغييرات الجزيئية في خلايا الدم التعديلات العصبية ^3-5. قد يكون السائل النخاعي غير كاف للحصول على معلومات على الجزيئات داخل الخلايا التي قد تعكس التغيرات الجوهرية المرتبطة المرض والدواء عكسها.

الظهارة الشمية (OE) هي جزء فريد من الجهاز العصبي المركزي (CNS)، المتعلقة جنيني لهياكل الحوفي ^6؛ ويمكن الوصول إليه بسهولة من خلال الخزعات الأنفية. وهو يتألف من الدبقية مثل دعم خلايا الخلايا (أي معلاقية)، القاعدية تتكاثر، والخلايا العصبية مستقبلات الشم في مراحل مختلفة من التنمية ^7-9. ولذلك، يوفر OE فرصة فريدة لدراسة إتاحتها التغيرات الديناميكية في الجهاز العصبي المركزي من المرضى الذين يعانون من الأمراض العصبية والنفسية ^(7). دراسات يتظاهرون الأداة المساعدة للOE باعتباره الأنسجة البديلة للتحقيق في أحداث الأمراض المرتبطة بها والتي تعكس تلك أورينتurring في الخلايا العصبية في الدماغ ^8،9. على سبيل المثال، واستخدمت دراسات OE للتحقيق الشخصية الجزيئية المرتبطة بظروف نفسية ^10-14. يخدم نظام حاسة الشم أيضا لتحديد endophenoytpes السريرية مثل العجز رائحة التي ترتبط مع الأعراض السلبية للفصام ^15. بالإضافة إلى ذلك، لا تزال عمليات النمو العصبي في OE في جميع مراحل الحياة، وتوفير وسيلة مفيدة لنموذج الفيزيولوجيا المرضية الكامنة وراء الظروف للأمراض النفسية ^8،9.

ومع ذلك، فإن العائق إلى استخدام هذا النسيج هو تلوث كبير من الخزعات حاسة الشم مع الخلايا غير العصبية ^16. على سبيل المثال، RNA الكلي المستخدمة للدراسات التعبير الجيني في الدراسات السابقة OE يتضمن الحمض النووي الريبي المستخرج من الأنف كلها تحتاج فحص الأنسجة بما في ذلك الحمض النووي الريبي من الخلايا غير العصبية ^17. ولذلك، النهج السابقة كانت محدودة بسبب نوعية الخلايا. للتغلب على هذه المشكلة، نهجا جديدا للحصول على وقد وضعت السكان الخلية العصبية المخصب من خلال الجمع بين الخزعات الأنفية مع الليزر التقاط تسليخ مجهري (LCM) ^18.

LCM هو الاسلوب الذي يسمح لعزل انتقائي من الخلايا باستخدام القطع بالليزر والأشعة فوق البنفسجية جنبا إلى جنب مع الأشعة تحت الحمراء ليزر ^19-21. الجمع بين LCM مع نهج OE يقلل من تلوث كبير من OE من الخلايا غير العصبية، وبالتالي تعزيز تخصيب الخلايا العصبية ^(18). وعلاوة على ذلك، وطبقة الخلايا العصبية يمكن تمييزها عن الطبقة تحت المخاطية تحت المجهر، مما يلغي الحاجة لتلطيخ. يمكن أن يزيد من أنواع الخلايا العصبية يمكن تمييزها من السكان الخلية الأخرى باستخدام الأجسام المضادة الأولية التي أعرب عنها نوع من الخلايا ذات الاهتمام ^7. لذلك، هذا الإجراء يؤسس أسهل طريقة لإثراء السكان الخلية العصبية تقريبا بحتة والتي يمكن استخدامها للدراسات التعبير الجيني، المناعية والتحقيقات الشكلية الأخرى.

ve_content "> وتهدف هذه الدراسة إلى إنشاء منصة تجريبية للتحقيق التغيرات الجزيئية في الخلايا العصبية الشمية المرتبطة الحالات المرضية والاستجابة للعلاج. ولمعالجة ذلك، مجموعة صغيرة من المرضى غير المدخنين الذين اجتمعوا المعايير التشخيصية DSM-IV لBD على أساس تم تجنيده في مقابلة التشخيصية للدراسات الجينية (DIG) ²² إلى الخضوع لاثنين من خزعات الأنف: خزعة واحدة قبل العلاج مع الليثيوم وخزعة الثاني، وبعد 6 أسابيع من العلاج الليثيوم عن طريق الفم يوميا وعلاوة على ذلك، يجب أن المرضى BD مؤهلا أن يكون: أعراض للاكتئاب ، استنادا إلى سجل ≥10 من أصل 60 في الطبيب تدار مونتغمري-Asberg تقييم مقياس (مادرس) ^23؛ أعراض لهوس خفيف أو الهوس، استنادا إلى النتيجة ≥10 من أصل 56 على الطبيب تدار يونغ هوس تقييم مقياس (YMRS) ^24؛ أو ≥10 على كل مادرس وYMRS معامل المقيم المشتركة بين المقيم الاتفاق بين الأطباء على حد سواء المقاييس هو> 0.96 بعد الخزعات، كانت الخلايا العصبية ENRI.جنة التعليم العالي من قبل OE LCM. وبعد اتخاذ تدابير إضافية لمراقبة الجودة، لضمان استخراج عالية الجودة RNA من الأنسجة والخلايا العصبية التخصيب، وأجريت في الوقت الحقيقي RT PCR للتحقيق مستويات ما قبل والتعبير بعد العلاج من الجينات في المصالح. تحتوي الأقسام التي تلت ذلك وصفا للتأكد من صحة هذا النهج، وتسليط الضوء على تعظيم الاستفادة من البروتوكول والاستراتيجيات التي تم تطبيقها للبروتوكول اطلاق النار المتاعب.